• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    17a α-D- 高炔雌二醇-3-乙酯聯(lián)合環(huán)磷酰胺對L615白血病小鼠的實驗研究

    2014-08-08 16:13:57王忻妍王月英吳紅英路璐張俊伶
    中國醫(yī)藥導報 2014年13期
    關(guān)鍵詞:荷瘤低劑量小鼠

    王忻妍+王月英+吳紅英+路璐++張俊伶+孟愛民+李德冠

    [摘要] 目的 觀察17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯(DHEA)聯(lián)合環(huán)磷酰胺(CTX)對接種L615白血病細胞小鼠的治療作用。 方法 將接種L615白血病細胞的小鼠分為對照組、CTX組、DHEA(低、中、高)劑量組、DHEA(低、中、高劑量)聯(lián)合化療(CTX)組,連續(xù)給藥9、12 d后分別檢測腫瘤抑制率、外周血細胞數(shù)、骨髓有核細胞數(shù)、胸腺與脾指數(shù)等指標。 結(jié)果 DHEA低、中、高劑量組,CTX組以及DHEA(低、中、高劑量)聯(lián)合CTX組瘤重均低于對照組,抑瘤率分別為45.40%、67.94%、50.48%、70.48%、69.21%、75.87%及72.06%,與對照組比較差異有高度統(tǒng)計學意義(P < 0.01)。DHEA中劑量組瘤重均低于DHEA低劑量組及DHEA高劑量組,差異有統(tǒng)計學意義(P < 0.05)。DHEA低、中、高劑量組的白細胞數(shù)[(15.87±3.32)×109、(17.92±1.79)×109、(18.55±3.21)×109/L)]及DHEA聯(lián)合CTX各組的白細胞數(shù)[(16.72±2.67)×109、(18.98±2.34)×109、(19.65±2.79)×109/L)]均高于對照組[(13.32±2.56)×109/L],差異有高度統(tǒng)計學意義(P < 0.01)。DHEA低、中、高劑量組及DHEA聯(lián)合CTX各組的白細胞數(shù)均高于CTX組[(10.56±1.83)×109/L],差異有高度統(tǒng)計學意義(P < 0.01)。DHEA低、中、高劑量組的骨髓有核細胞數(shù)[(8.28±2.12)×106、(9.93±1.36)×106、(8.22±1.91)×106/股骨]及DHEA聯(lián)合CTX各組的骨髓有核細胞數(shù)[(7.55±1.13)×106、(8.67±2.21)×106、(7.96±1.46)×106/股骨]均高于對照組[(6.34±1.21)×106/股骨],差異有統(tǒng)計學意義(P < 0.05)。DHEA中劑量組的骨髓有核細胞與CTX組[(7.92±0.89)×106/股骨]比較差異有高度統(tǒng)計學意義(P < 0.01)。DHEA低、中、高劑量組及DHEA聯(lián)合CTX各組的胸腺和脾臟指數(shù)均高于對照組,與對照組比較差異均有高度統(tǒng)計學意義(均P < 0.01)。 結(jié)論 DHEA及聯(lián)合化療對L615白血病細胞有抑制作用,對化療后荷瘤小鼠造血系統(tǒng)具有一定的保護作用。

    [關(guān)鍵詞] 17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯;抗腫瘤;環(huán)磷酰胺;造血功能

    [中圖分類號] R811.5[文獻標識碼] A[文章編號] 1673-7210(2014)05(a)-0004-05

    Effects of DHEA combined with Cyclophosphamide on leukemia L615 mice

    WANG Xinyan1,2 WANG Yueying2 WU Hongying2 LU Lu2 ZHANG Junling2 MENG Aimin2 LI Deguan2▲

    1.Cancer Hospital of Hangzhou City, Zhejiang Province, Hangzhou 310002, China; 2.Institute of Radiation Medicine, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical CollegeTianjin Key Laboratory of Radiation Medicine and Molecular Nuclear Medicine, Tianjin 300192, China

    [Abstract] Objective To observe the therapeutic effects of 17a α-D-homo ethynyclestradiol-3-accetate (DHEA) combining with Cyclophosphamide(CTX) on the mice inoculated with leukemia L615 cells. Methods The mice inoculated with L615 were divided into control group, CTX group (treated with CTX), three DHEA groups (treated with low, middle and high doses DHEA), three combined groups (treated with low, middle, high doses DHEA and CTX). The mice were continuously delivered drugs for 9 days. The tumor inhibition rate, blood and bone marrow nucleated cell counts, spleen and thymus indexes were determined at 12 days. Results The tumors weight in the mice of three DHEA groups and three combined groups were all significantly lower than those in mice of control group, the tumor inhibitory rates were 45.40%, 67.94%, 50.48%, 70.48%, 69.21%, 75.87% and 72.06% respectively, the differences were statistically significant (P < 0.01). The tumors weight of middle DHEA dose group were lower than those of low DHEA dose group and high DHEA dose group (P < 0.05). The WBC counts of three DHEA groups [(15.87±3.32)×109, (17.92±1.79)×109, (18.55±

    1.杭州市腫瘤醫(yī)院,浙江杭州 310002;

    2.中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院放射醫(yī)學研究所天津放射醫(yī)學與分子核醫(yī)學重點實驗室,天津 300192

    3.21)×109/L] and three combined groups [(16.72±2.67)×109, (18.98±2.34)×109, (19.65±2.79)×109/L] were significantly higher than those of control group [(13.32±2.56)×109/L], the differences were statistically significant (P < 0.01). The WBC counts of three DHEA groups and three combined groups were higher than those of CTX group [(10.56±1.83)×109/L], the differences were statistically significant (P < 0.01). The BMNCs of three DHEA groups [(8.28±2.12)×106, (9.93±1.36)×106, (8.22±1.91)×106/femur] and three combined groups [(7.55±1.13)×106, (8.67±2.21)×106, (7.96±1.46)×106/femur] were significantly higher than those of control gruop [(6.34±1.21)×106/femur], the differences were statistically significant (P < 0.05). The BMNCs of middle DHEA group was higher than that of CTX group [(7.92±0.89)×106/femur], the difference was statistically significant (P < 0.01). The thymus and spleen index of three DHEA groups and three combined groups were higher than those of control group, the differences were statistically significant (P < 0.01). Conclusion DHEA alone or DHEA combining with CTX shows inhibitory effects on the L615 tumor of mice and protective effects on the hematopoiesis of mice received chemotherapy.

    [Key words] 17a α-D-home ethynyclestradiol-3-accetate; Tumor inhibitory effects; Cyclophosphamide; Hematopoietic function

    惡性腫瘤的治療主要包括手術(shù)及放化療,而放、化療主要副作用是抑制免疫及造血功能,17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯(DHEA)是一種新型輻射防護劑,本研究前期試驗結(jié)果顯示,對小鼠的肝癌、食管癌、黑色素瘤、肺癌[1-4]等均有明顯的抑制作用。本實驗按照國家一類新藥報批要求[5],通過建立L615白血病小鼠模型,探討單獨使用DHEA及DHEA聯(lián)合環(huán)磷酰胺(CTX)藥物對L615白血病是否具有抑瘤增效作用,為其用于治療腫瘤的研究提供實驗依據(jù)。

    1材料與方法

    1.1 動物和細胞系

    中國醫(yī)學科學院放射所培育的IRM-2近交系小鼠,體重為20~22 g,雌雄各半,合格證號:SCXK(津)2005-0001,SPF級動物實驗室飼養(yǎng),飼料為清潔級全價鼠料,由北京科奧協(xié)力飼料有限公司提供。L 615白血病瘤株由中國醫(yī)學科學院血研所提供。

    1.2 試劑和儀器

    CTX為上海華聯(lián)制藥有限公司產(chǎn)品,DHEA是中國醫(yī)學科學院放射所合成的雌激素類輻射防護劑,白色粉末,無味。sysmex poch-100i全自動血液分析儀(日本),電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)。

    1.3 L615荷瘤小鼠模型的建立

    L615細胞生長至亞融合狀態(tài)時收集細胞,用生理鹽水調(diào)整細胞數(shù)約為5×107/mL,取0.2 mL接種于每只小鼠右側(cè)腋窩下,計為實驗第1天。

    1.4 分組及給藥

    實驗第3天,將荷瘤鼠隨機分為對照組、CTX(25 mg/kg)組、DHEA低劑量(5 mg/kg)、中劑量(7.5 mg/kg)、高劑量(10 mg/kg)組,DHEA低、中、高劑量聯(lián)合CTX組,每組各10只。DHEA組及DHEA聯(lián)合CTX組腹腔注射DHEA,給藥劑量0.2 mL/只,1次/d,連續(xù)9 d,對照組給予同體積茶油,DHEA聯(lián)合CTX組及CTX組腹腔注射CTX,給藥劑量0.2 mL/只,隔日1次,共4次。

    1.5 外周血細胞計數(shù)

    實驗第l2天,小鼠眼球摘除采血,全自動血液分析儀計數(shù)血細胞數(shù)。處死小鼠取瘤體稱重,計算抑瘤率,抑瘤率=[1-(治療組平均瘤質(zhì)量/對照組平均瘤質(zhì)量)]×100%。取一側(cè)股骨,用白細胞稀釋液沖洗骨髓腔,收集骨髓細胞制成懸液,全自動血液分析儀計數(shù)骨髓有核細胞數(shù)。取胸腺、脾臟稱重,計算胸腺和脾重指數(shù)。

    1.6 生命延長率實驗

    取L615細胞懸液(細胞數(shù)約為5×107/mL)接種于小鼠腹腔,0.1 mL/只,實驗第3天,將荷瘤鼠隨機分為對照組、CTX(25 mg/kg)組、DHEA低劑量(5 mg/kg)、中劑量(7.5 mg/kg)、高劑量(10 mg/kg)組,DHEA低、中、高劑量聯(lián)合CTX組,每組各10只。DHEA組及DHEA聯(lián)合CTX組腹腔注射DHEA,給藥劑量0.2 mL/只,1次/d,連續(xù)9 d,對照組給予同體積茶油,DHEA聯(lián)合CTX組及CTX組腹腔注射CTX,給藥劑量0.2 mL/只,隔日1次,共4次。觀察生存期。生命延長率=[(治療組平均生存天數(shù)/對照組平均生存天數(shù))-1]×100%。

    1.7統(tǒng)計學方法

    采用統(tǒng)計軟件Prism5.0對數(shù)據(jù)進行分析,正態(tài)分布計量資料以均數(shù)±標準差(x±s)表示,組間比較采用t檢驗;重復測量的計量資料多組間比較采用方差分析,兩兩比較采用LSD-t檢驗。計數(shù)資料以率表示,采用χ2檢驗。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié)果

    2.1 DHEA及DHEA聯(lián)合CTX對荷瘤小鼠L615的抑瘤作用

    為了分析DHEA及DHEA聯(lián)合CTX對L615的作用,本次實驗首先觀察了其對小鼠腫瘤大小的影響。結(jié)果顯示,DHEA低、中、高劑量組、CTX組、DHEA聯(lián)合CTX各組瘤重均低于對照組,差異均有高度統(tǒng)計學意義(t = 3.944、8.898、5.266、9.288、8.776、10.571、7.464,P < 0.01)。DHEA中、高劑量聯(lián)合CTX組的瘤重低于CTX組,但與CTX組比較差異無統(tǒng)計學意義(P > 0.05)。DHEA中劑量組瘤重均低于低劑量組及高劑量組,差異有統(tǒng)計學意義(P < 0.05)。DHEA低劑量聯(lián)合CTX組瘤重低于DHEA低劑量組,兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P < 0.05);DHEA高劑量聯(lián)合CTX組瘤重低于DHEA高劑量組,兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P < 0.05)。DHEA中劑量聯(lián)合CTX組瘤重低于DHEA低劑量聯(lián)合CTX組及DHEA高劑量聯(lián)合CTX組,但差異無統(tǒng)計學意義(P > 0.05),結(jié)果顯示DHEA低、中、高劑量組及DHEA聯(lián)合CTX組,對L615腫瘤細胞均呈明顯的抑制作用。而計算抑瘤率表明DHEA中劑量聯(lián)合CTX組對L615腫瘤細胞最具抑制作用。見表1。

    表1 DHEA及DHEA聯(lián)合CTX對荷瘤鼠L615腫瘤的抑制率

    注:與對照組比較,*P < 0.01;與CTX組比較,▲P < 0.05;與DHEA低劑量組比較,△P < 0.05;DHEA:17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯;CTX:環(huán)磷酰胺;“-”代表無數(shù)據(jù)

    2.2 DHEA、DHEA聯(lián)合CTX對荷瘤小鼠L 615白細胞及骨髓有核細胞的影響

    造血免疫系統(tǒng)在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中占據(jù)重要地位,本次實驗觀察了DHEA、CTX及DHEA聯(lián)合CTX對荷瘤小鼠外周血及單側(cè)股骨有核細胞數(shù)的影響。DHEA低、中、高劑量組白細胞數(shù)及DHEA聯(lián)合CTX各組的白細胞數(shù)均高于對照組,其中DHEA中劑量組及高劑量組與對照組比較差異有高度統(tǒng)計學意義(t = 4.656、5.207,P < 0.01)。DHEA高劑量組及中劑量組的白細胞數(shù)要高于低劑量組,但差異無統(tǒng)計學意義(P > 0.05)。DHEA低、中、高劑量聯(lián)合CTX組的白細胞數(shù)與對照組比較差異有高度統(tǒng)計學意義(t = 2.906、5.161,5.286,P < 0.01)。DHEA低、中、高劑量組的白細胞數(shù)均高于CTX組,差異有高度統(tǒng)計學意義(t = 4.429、9.092、9.631,P < 0.01)。DHEA低、中、高劑量聯(lián)合CTX組的白細胞數(shù)均高于CTX組,差異有高度統(tǒng)計學意義(t = 6.017、8.964、9.043,P < 0.01)。DHEA低、中、高劑量組的骨髓有核細胞數(shù)均高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(t = 2.513、6.236、2.629,P < 0.05、P < 0.01、P < 0.05)。CTX組的骨髓有核細胞數(shù)與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(t = 3.327,P < 0.01)。DHEA聯(lián)合CTX低、中、高劑量組的骨髓有核細胞數(shù)均高于對照組,與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(t = 2.311,P < 0.05;2.924,P < 0.05;2.701,P < 0.05、P < 0.01)。DHEA中劑量組的骨髓有核細胞與CTX組比較差異有高度統(tǒng)計學意義(t = 3.911, P < 0.01)。DHEA中劑量組的骨髓有核細胞高于DHEA低劑量聯(lián)合CTX組及DHEA高劑量聯(lián)合CTX組,差異有高度統(tǒng)計學意義(t = 4.256、3.122,P < 0.01),這些結(jié)果提示DHEA及DHEA聯(lián)合CTX對荷瘤小鼠的造血免疫系統(tǒng)有一定保護作用。

    表2 DHEA及聯(lián)合CTX對荷瘤鼠 L615白細胞

    及骨髓有核細胞造血的影響(x±s)

    注:與對照組比較,*P < 0.05,**P < 0.01;與CTX組比較,#P < 0.01;DHEA:17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯;CTX:環(huán)磷酰胺

    2.3 DHEA、DHEA聯(lián)合CTX對荷瘤小鼠L615臟器指數(shù)的影響

    胸腺和脾臟是重要的免疫器官,本次實驗觀察了DHEA、DHEA聯(lián)合CTX及CTX對這兩個臟器的影響。DHEA低、中、高劑量組及DHEA聯(lián)合CTX各組的胸腺指數(shù)均高于對照組,其中DHEA低、中劑量組與對照組比較差異有高度統(tǒng)計學意義(t = 12.280、5.993,P < 0.01)。CTX組與對照組比較差異有高度統(tǒng)計學意義(t = 4.715,P < 0.01)。DHEA低、中、高劑量組聯(lián)合CTX組與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(t = 3.253、7.513、2.578,P < 0.01、P < 0.05),DHEA中劑量組和DHEA中劑量聯(lián)合CTX組與CTX組比較差異有統(tǒng)計學意義(t = 3.284、3.019,P < 0.01);DHEA低、中、高劑量組與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(t = 5.205、5.428、3.389,P < 0.01),DHEA低、中、高劑量聯(lián)合CTX組的脾重指數(shù)均高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(t = 8.255、17.517、10.708,P < 0.01)。見表3。

    2.4 DHEA及DHEA聯(lián)合CTX對荷瘤小鼠的平均存活時間及生命延長率的影響

    腫瘤患者生存率是治療是否有效的重要指標,本次實驗觀察了DHEA、DHEA聯(lián)合CTX及CTX對荷瘤小鼠存活時間的影響。DHEA各組及DHEA聯(lián)合CTX各組荷瘤小鼠平均存活天數(shù)均高于對照組,其中DHEA低、中、高劑量聯(lián)合CTX組與對照組比較差異均有高度統(tǒng)計學意義(P < 0.01)。DHEA聯(lián)合CTX各組荷瘤小鼠的平均存活天數(shù)高于CTX組,其中DHEA中劑量聯(lián)合CTX組與CTX組比較差異有統(tǒng)計學意義(P < 0.05)。表明DHEA及DHEA聯(lián)合CTX給藥有助于提高荷瘤小鼠的平均存活時間,抑制L615腫瘤的發(fā)生發(fā)展。見表4。

    表4 DHEA及DHE聯(lián)合CTX各組荷瘤小鼠的平均存活時間

    及生命延長率

    注:與對照組比較,*P < 0.05,**P < 0.01;與CTX組比較,#P < 0.05;DHEA:17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯;CTX:環(huán)磷酰胺;“-”代表無數(shù)據(jù)

    3 討論

    化療已成為晚期惡性腫瘤患者最重要的治療方法之一,但是化療在殺傷腫瘤細胞的同時也損傷機體的正常細胞,使原本免疫功能低下的腫瘤患者的免疫力進一步降低,腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與機體的免疫功能密切相關(guān)[6-7],所以降低化療藥物的毒副作用,提高腫瘤患者的免疫功能,充分發(fā)揮化療藥物的治療作用,日益成為國內(nèi)外專家學者研究的方向[8-10]。DHEA是中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院放射所研制的炔雌醇的衍生物,經(jīng)過研究證實,其對由于輻射引起的造血組織損傷具有預防和治療的作用。本次實驗結(jié)果證明,DHEA明顯抑制荷瘤小鼠L615白血病的生長,腫瘤生長速度明顯減漫,瘤重明顯減輕,DHEA低、中、高劑量組抑瘤率分別為45.40%、67.94%、50.48%,與對照組比較差異有高度統(tǒng)計學意義(P < 0.01)。DHEA中劑量組瘤重均低于低劑量組及高劑量組,與低、高兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P < 0.05),說明中劑量抑制腫瘤效果好于低劑量和高劑量。環(huán)磷酰胺作為常用的化療藥物,本實驗中作為化療治療藥物[11-12]。當DHEA(低、中、高劑量)與CTX聯(lián)合應用時,抑瘤率分別為69.21%、75.87%、72.06%,與對照組比較差異有高度統(tǒng)計學意義(P < 0.01)。表明具有良好的協(xié)同抗瘤效果,DHEA中劑量聯(lián)合CTX組的抑瘤率(75.87%)高于CTX組(70.48%)和DHEA中劑量組(67.94%),進一步說明中等劑量DHEA具有良好療效。胸腺和脾臟是機體重要的免疫器官,胸腺、睥臟質(zhì)量在一定程度上反映了機體免疫功能的強弱,而化療藥物的應用可加重機體的免疫抑制, 因此提高化療后的免疫功能非常重要[13]。脾臟和胸腺在化療藥物作用下,其組織結(jié)構(gòu)較快地發(fā)生嚴重損傷,表現(xiàn)為明顯萎縮,從而抑制了機體的免疫和抗病能力。實驗結(jié)果證明,DHEA單獨給藥及聯(lián)合化療均能增加胸腺和脾臟的重量。同時均能增加癌荷瘤小鼠的白細胞和骨髓有核細胞的數(shù)量。DHEA低、中、高劑量組白細胞數(shù)及DHEA聯(lián)合CTX各組的白細胞數(shù)均高于對照組,其中DHEA中劑量組、高劑量組及DHEA聯(lián)合CTX各組與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P < 0.01),DHEA高劑量組及中劑量組的白細胞數(shù)要高于低劑量組,但差異無統(tǒng)計學意義。DHEA中劑量組的骨髓有核細胞高于CTX組及DHEA低劑量聯(lián)合CTX組、DHEA高劑量聯(lián)合CTX組,差異有統(tǒng)計學意義(P < 0.01),這些結(jié)果提示單獨給予DHEA及DHEA聯(lián)合CTX對荷瘤小鼠的造血免疫系統(tǒng)有一定保護作用。

    DHEA聯(lián)合CTX化療治療荷瘤小鼠后,能延長荷瘤小鼠的存活時間,生存期比單純的CTX化療生存率有所提高。表明DHEA及聯(lián)合化療對L615移植小鼠腫瘤具有顯著的協(xié)同抗瘤效果,改善化療后荷瘤小鼠的造血功能及降低免疫抑制作用,其具體作用機制有待進一步深入研究。

    [參考文獻]

    [1]杜利清,孟愛民,王月英,等.DHEA聯(lián)合γ射線對食管癌EC109細胞移植裸鼠的抑瘤與抗輻射作用[J].輻射研究與輻射工藝學報,2013,31(1):6-9.

    [2]王月英,王小春,吳紅英,等.17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯聯(lián)合γ射線照射對不同品系小鼠的抑瘤作用 [J]. 國際放射醫(yī)學核醫(yī)學雜志,2012,36(2):97-100.

    [3]王忻妍,王月英,吳紅英,等.17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯聯(lián)合放、化療抗腫瘤作用的研究[J].中國醫(yī)藥導報,2013,10(32):4-6,9.

    [4]宋娜玲,孟愛民,王月英,等.17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯聯(lián)合γ射線對黑色素瘤B16生長的抑制作用[J].中華放射醫(yī)學與防護雜志,2012,32(3):233-235.

    [5]衛(wèi)生部藥政局.新藥(西藥)臨床前研究指導原則匯編(藥學,藥理學,毒理學)[C].北京:衛(wèi)生部藥政局,1993:137.

    [6]Sehreiber H. Tumor immunologyIn Fundamental Immunology [M]. 3rd ed. New York:Raven Press Ltd,1993:l143.

    [7]Frey B,Rubner Y,Kulzer L,et al. Antitumor immune responses induced by ionizing irradiation and further immune stimulation [J]. Cancer Immunol Immunother,2014,63(1):29-36.

    [8]李衛(wèi)紅,王浩,周曉靚,等.腫瘤放射治療增敏劑研究新進展[J].國際放射醫(yī)學核醫(yī)學雜志,2013,37(4):233-238.

    [9]劉曉秋,王芹,周則衛(wèi),等.9401對H22肝癌小鼠放射增敏效應的研究[J].國際放射醫(yī)學核醫(yī)學雜志,2013,37(1):13-15,37.

    [10]白明華,張揚,王寶峰,等.姜黃素提高人胰腺癌PANC-1細胞放射敏感性的機制研究[J].中華放射醫(yī)學與防護雜志,2013,33(4):360-363.

    [11]于洪升,費從合,沈方臻,等.低劑量輻射聯(lián)合環(huán)磷酰胺對腫瘤細胞凋亡、細胞周期以及骨髓增殖的影響[J].中華放射醫(yī)學與防護雜志,2004,24(2):31-33.

    [12]王叔橋,張麗宏,李炎,等.參黃膠囊對環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠免疫功能的影響[J].現(xiàn)代藥物與臨床,2013,28(4):504-507.

    [13]Li D,Wang Y,Wu H,et al. The effects of p38 MAPK inhibition combined with G-CSF administration on the hematoimmune system in mice with irradiation injury [J]. PLoS One,2013,8(4):62921.

    (收稿日期:2014-01-14本文編輯:蘇暢)

    [基金項目] 國家自然科學基金資助項目(編號81102873);天津市自然科學基金資助項目(編號12JCQNJC09100)。

    [作者簡介] 王忻妍(1979.11-),女,碩士研究生;研究方向:腫瘤治療。

    ▲通訊作者

    表2 DHEA及聯(lián)合CTX對荷瘤鼠 L615白細胞

    及骨髓有核細胞造血的影響(x±s)

    注:與對照組比較,*P < 0.05,**P < 0.01;與CTX組比較,#P < 0.01;DHEA:17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯;CTX:環(huán)磷酰胺

    2.3 DHEA、DHEA聯(lián)合CTX對荷瘤小鼠L615臟器指數(shù)的影響

    胸腺和脾臟是重要的免疫器官,本次實驗觀察了DHEA、DHEA聯(lián)合CTX及CTX對這兩個臟器的影響。DHEA低、中、高劑量組及DHEA聯(lián)合CTX各組的胸腺指數(shù)均高于對照組,其中DHEA低、中劑量組與對照組比較差異有高度統(tǒng)計學意義(t = 12.280、5.993,P < 0.01)。CTX組與對照組比較差異有高度統(tǒng)計學意義(t = 4.715,P < 0.01)。DHEA低、中、高劑量組聯(lián)合CTX組與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(t = 3.253、7.513、2.578,P < 0.01、P < 0.05),DHEA中劑量組和DHEA中劑量聯(lián)合CTX組與CTX組比較差異有統(tǒng)計學意義(t = 3.284、3.019,P < 0.01);DHEA低、中、高劑量組與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(t = 5.205、5.428、3.389,P < 0.01),DHEA低、中、高劑量聯(lián)合CTX組的脾重指數(shù)均高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(t = 8.255、17.517、10.708,P < 0.01)。見表3。

    2.4 DHEA及DHEA聯(lián)合CTX對荷瘤小鼠的平均存活時間及生命延長率的影響

    腫瘤患者生存率是治療是否有效的重要指標,本次實驗觀察了DHEA、DHEA聯(lián)合CTX及CTX對荷瘤小鼠存活時間的影響。DHEA各組及DHEA聯(lián)合CTX各組荷瘤小鼠平均存活天數(shù)均高于對照組,其中DHEA低、中、高劑量聯(lián)合CTX組與對照組比較差異均有高度統(tǒng)計學意義(P < 0.01)。DHEA聯(lián)合CTX各組荷瘤小鼠的平均存活天數(shù)高于CTX組,其中DHEA中劑量聯(lián)合CTX組與CTX組比較差異有統(tǒng)計學意義(P < 0.05)。表明DHEA及DHEA聯(lián)合CTX給藥有助于提高荷瘤小鼠的平均存活時間,抑制L615腫瘤的發(fā)生發(fā)展。見表4。

    表4 DHEA及DHE聯(lián)合CTX各組荷瘤小鼠的平均存活時間

    及生命延長率

    注:與對照組比較,*P < 0.05,**P < 0.01;與CTX組比較,#P < 0.05;DHEA:17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯;CTX:環(huán)磷酰胺;“-”代表無數(shù)據(jù)

    3 討論

    化療已成為晚期惡性腫瘤患者最重要的治療方法之一,但是化療在殺傷腫瘤細胞的同時也損傷機體的正常細胞,使原本免疫功能低下的腫瘤患者的免疫力進一步降低,腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與機體的免疫功能密切相關(guān)[6-7],所以降低化療藥物的毒副作用,提高腫瘤患者的免疫功能,充分發(fā)揮化療藥物的治療作用,日益成為國內(nèi)外專家學者研究的方向[8-10]。DHEA是中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院放射所研制的炔雌醇的衍生物,經(jīng)過研究證實,其對由于輻射引起的造血組織損傷具有預防和治療的作用。本次實驗結(jié)果證明,DHEA明顯抑制荷瘤小鼠L615白血病的生長,腫瘤生長速度明顯減漫,瘤重明顯減輕,DHEA低、中、高劑量組抑瘤率分別為45.40%、67.94%、50.48%,與對照組比較差異有高度統(tǒng)計學意義(P < 0.01)。DHEA中劑量組瘤重均低于低劑量組及高劑量組,與低、高兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P < 0.05),說明中劑量抑制腫瘤效果好于低劑量和高劑量。環(huán)磷酰胺作為常用的化療藥物,本實驗中作為化療治療藥物[11-12]。當DHEA(低、中、高劑量)與CTX聯(lián)合應用時,抑瘤率分別為69.21%、75.87%、72.06%,與對照組比較差異有高度統(tǒng)計學意義(P < 0.01)。表明具有良好的協(xié)同抗瘤效果,DHEA中劑量聯(lián)合CTX組的抑瘤率(75.87%)高于CTX組(70.48%)和DHEA中劑量組(67.94%),進一步說明中等劑量DHEA具有良好療效。胸腺和脾臟是機體重要的免疫器官,胸腺、睥臟質(zhì)量在一定程度上反映了機體免疫功能的強弱,而化療藥物的應用可加重機體的免疫抑制, 因此提高化療后的免疫功能非常重要[13]。脾臟和胸腺在化療藥物作用下,其組織結(jié)構(gòu)較快地發(fā)生嚴重損傷,表現(xiàn)為明顯萎縮,從而抑制了機體的免疫和抗病能力。實驗結(jié)果證明,DHEA單獨給藥及聯(lián)合化療均能增加胸腺和脾臟的重量。同時均能增加癌荷瘤小鼠的白細胞和骨髓有核細胞的數(shù)量。DHEA低、中、高劑量組白細胞數(shù)及DHEA聯(lián)合CTX各組的白細胞數(shù)均高于對照組,其中DHEA中劑量組、高劑量組及DHEA聯(lián)合CTX各組與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P < 0.01),DHEA高劑量組及中劑量組的白細胞數(shù)要高于低劑量組,但差異無統(tǒng)計學意義。DHEA中劑量組的骨髓有核細胞高于CTX組及DHEA低劑量聯(lián)合CTX組、DHEA高劑量聯(lián)合CTX組,差異有統(tǒng)計學意義(P < 0.01),這些結(jié)果提示單獨給予DHEA及DHEA聯(lián)合CTX對荷瘤小鼠的造血免疫系統(tǒng)有一定保護作用。

    DHEA聯(lián)合CTX化療治療荷瘤小鼠后,能延長荷瘤小鼠的存活時間,生存期比單純的CTX化療生存率有所提高。表明DHEA及聯(lián)合化療對L615移植小鼠腫瘤具有顯著的協(xié)同抗瘤效果,改善化療后荷瘤小鼠的造血功能及降低免疫抑制作用,其具體作用機制有待進一步深入研究。

    [參考文獻]

    [1]杜利清,孟愛民,王月英,等.DHEA聯(lián)合γ射線對食管癌EC109細胞移植裸鼠的抑瘤與抗輻射作用[J].輻射研究與輻射工藝學報,2013,31(1):6-9.

    [2]王月英,王小春,吳紅英,等.17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯聯(lián)合γ射線照射對不同品系小鼠的抑瘤作用 [J]. 國際放射醫(yī)學核醫(yī)學雜志,2012,36(2):97-100.

    [3]王忻妍,王月英,吳紅英,等.17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯聯(lián)合放、化療抗腫瘤作用的研究[J].中國醫(yī)藥導報,2013,10(32):4-6,9.

    [4]宋娜玲,孟愛民,王月英,等.17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯聯(lián)合γ射線對黑色素瘤B16生長的抑制作用[J].中華放射醫(yī)學與防護雜志,2012,32(3):233-235.

    [5]衛(wèi)生部藥政局.新藥(西藥)臨床前研究指導原則匯編(藥學,藥理學,毒理學)[C].北京:衛(wèi)生部藥政局,1993:137.

    [6]Sehreiber H. Tumor immunologyIn Fundamental Immunology [M]. 3rd ed. New York:Raven Press Ltd,1993:l143.

    [7]Frey B,Rubner Y,Kulzer L,et al. Antitumor immune responses induced by ionizing irradiation and further immune stimulation [J]. Cancer Immunol Immunother,2014,63(1):29-36.

    [8]李衛(wèi)紅,王浩,周曉靚,等.腫瘤放射治療增敏劑研究新進展[J].國際放射醫(yī)學核醫(yī)學雜志,2013,37(4):233-238.

    [9]劉曉秋,王芹,周則衛(wèi),等.9401對H22肝癌小鼠放射增敏效應的研究[J].國際放射醫(yī)學核醫(yī)學雜志,2013,37(1):13-15,37.

    [10]白明華,張揚,王寶峰,等.姜黃素提高人胰腺癌PANC-1細胞放射敏感性的機制研究[J].中華放射醫(yī)學與防護雜志,2013,33(4):360-363.

    [11]于洪升,費從合,沈方臻,等.低劑量輻射聯(lián)合環(huán)磷酰胺對腫瘤細胞凋亡、細胞周期以及骨髓增殖的影響[J].中華放射醫(yī)學與防護雜志,2004,24(2):31-33.

    [12]王叔橋,張麗宏,李炎,等.參黃膠囊對環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠免疫功能的影響[J].現(xiàn)代藥物與臨床,2013,28(4):504-507.

    [13]Li D,Wang Y,Wu H,et al. The effects of p38 MAPK inhibition combined with G-CSF administration on the hematoimmune system in mice with irradiation injury [J]. PLoS One,2013,8(4):62921.

    (收稿日期:2014-01-14本文編輯:蘇暢)

    [基金項目] 國家自然科學基金資助項目(編號81102873);天津市自然科學基金資助項目(編號12JCQNJC09100)。

    [作者簡介] 王忻妍(1979.11-),女,碩士研究生;研究方向:腫瘤治療。

    ▲通訊作者

    表2 DHEA及聯(lián)合CTX對荷瘤鼠 L615白細胞

    及骨髓有核細胞造血的影響(x±s)

    注:與對照組比較,*P < 0.05,**P < 0.01;與CTX組比較,#P < 0.01;DHEA:17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯;CTX:環(huán)磷酰胺

    2.3 DHEA、DHEA聯(lián)合CTX對荷瘤小鼠L615臟器指數(shù)的影響

    胸腺和脾臟是重要的免疫器官,本次實驗觀察了DHEA、DHEA聯(lián)合CTX及CTX對這兩個臟器的影響。DHEA低、中、高劑量組及DHEA聯(lián)合CTX各組的胸腺指數(shù)均高于對照組,其中DHEA低、中劑量組與對照組比較差異有高度統(tǒng)計學意義(t = 12.280、5.993,P < 0.01)。CTX組與對照組比較差異有高度統(tǒng)計學意義(t = 4.715,P < 0.01)。DHEA低、中、高劑量組聯(lián)合CTX組與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(t = 3.253、7.513、2.578,P < 0.01、P < 0.05),DHEA中劑量組和DHEA中劑量聯(lián)合CTX組與CTX組比較差異有統(tǒng)計學意義(t = 3.284、3.019,P < 0.01);DHEA低、中、高劑量組與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(t = 5.205、5.428、3.389,P < 0.01),DHEA低、中、高劑量聯(lián)合CTX組的脾重指數(shù)均高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(t = 8.255、17.517、10.708,P < 0.01)。見表3。

    2.4 DHEA及DHEA聯(lián)合CTX對荷瘤小鼠的平均存活時間及生命延長率的影響

    腫瘤患者生存率是治療是否有效的重要指標,本次實驗觀察了DHEA、DHEA聯(lián)合CTX及CTX對荷瘤小鼠存活時間的影響。DHEA各組及DHEA聯(lián)合CTX各組荷瘤小鼠平均存活天數(shù)均高于對照組,其中DHEA低、中、高劑量聯(lián)合CTX組與對照組比較差異均有高度統(tǒng)計學意義(P < 0.01)。DHEA聯(lián)合CTX各組荷瘤小鼠的平均存活天數(shù)高于CTX組,其中DHEA中劑量聯(lián)合CTX組與CTX組比較差異有統(tǒng)計學意義(P < 0.05)。表明DHEA及DHEA聯(lián)合CTX給藥有助于提高荷瘤小鼠的平均存活時間,抑制L615腫瘤的發(fā)生發(fā)展。見表4。

    表4 DHEA及DHE聯(lián)合CTX各組荷瘤小鼠的平均存活時間

    及生命延長率

    注:與對照組比較,*P < 0.05,**P < 0.01;與CTX組比較,#P < 0.05;DHEA:17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯;CTX:環(huán)磷酰胺;“-”代表無數(shù)據(jù)

    3 討論

    化療已成為晚期惡性腫瘤患者最重要的治療方法之一,但是化療在殺傷腫瘤細胞的同時也損傷機體的正常細胞,使原本免疫功能低下的腫瘤患者的免疫力進一步降低,腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與機體的免疫功能密切相關(guān)[6-7],所以降低化療藥物的毒副作用,提高腫瘤患者的免疫功能,充分發(fā)揮化療藥物的治療作用,日益成為國內(nèi)外專家學者研究的方向[8-10]。DHEA是中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院放射所研制的炔雌醇的衍生物,經(jīng)過研究證實,其對由于輻射引起的造血組織損傷具有預防和治療的作用。本次實驗結(jié)果證明,DHEA明顯抑制荷瘤小鼠L615白血病的生長,腫瘤生長速度明顯減漫,瘤重明顯減輕,DHEA低、中、高劑量組抑瘤率分別為45.40%、67.94%、50.48%,與對照組比較差異有高度統(tǒng)計學意義(P < 0.01)。DHEA中劑量組瘤重均低于低劑量組及高劑量組,與低、高兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P < 0.05),說明中劑量抑制腫瘤效果好于低劑量和高劑量。環(huán)磷酰胺作為常用的化療藥物,本實驗中作為化療治療藥物[11-12]。當DHEA(低、中、高劑量)與CTX聯(lián)合應用時,抑瘤率分別為69.21%、75.87%、72.06%,與對照組比較差異有高度統(tǒng)計學意義(P < 0.01)。表明具有良好的協(xié)同抗瘤效果,DHEA中劑量聯(lián)合CTX組的抑瘤率(75.87%)高于CTX組(70.48%)和DHEA中劑量組(67.94%),進一步說明中等劑量DHEA具有良好療效。胸腺和脾臟是機體重要的免疫器官,胸腺、睥臟質(zhì)量在一定程度上反映了機體免疫功能的強弱,而化療藥物的應用可加重機體的免疫抑制, 因此提高化療后的免疫功能非常重要[13]。脾臟和胸腺在化療藥物作用下,其組織結(jié)構(gòu)較快地發(fā)生嚴重損傷,表現(xiàn)為明顯萎縮,從而抑制了機體的免疫和抗病能力。實驗結(jié)果證明,DHEA單獨給藥及聯(lián)合化療均能增加胸腺和脾臟的重量。同時均能增加癌荷瘤小鼠的白細胞和骨髓有核細胞的數(shù)量。DHEA低、中、高劑量組白細胞數(shù)及DHEA聯(lián)合CTX各組的白細胞數(shù)均高于對照組,其中DHEA中劑量組、高劑量組及DHEA聯(lián)合CTX各組與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P < 0.01),DHEA高劑量組及中劑量組的白細胞數(shù)要高于低劑量組,但差異無統(tǒng)計學意義。DHEA中劑量組的骨髓有核細胞高于CTX組及DHEA低劑量聯(lián)合CTX組、DHEA高劑量聯(lián)合CTX組,差異有統(tǒng)計學意義(P < 0.01),這些結(jié)果提示單獨給予DHEA及DHEA聯(lián)合CTX對荷瘤小鼠的造血免疫系統(tǒng)有一定保護作用。

    DHEA聯(lián)合CTX化療治療荷瘤小鼠后,能延長荷瘤小鼠的存活時間,生存期比單純的CTX化療生存率有所提高。表明DHEA及聯(lián)合化療對L615移植小鼠腫瘤具有顯著的協(xié)同抗瘤效果,改善化療后荷瘤小鼠的造血功能及降低免疫抑制作用,其具體作用機制有待進一步深入研究。

    [參考文獻]

    [1]杜利清,孟愛民,王月英,等.DHEA聯(lián)合γ射線對食管癌EC109細胞移植裸鼠的抑瘤與抗輻射作用[J].輻射研究與輻射工藝學報,2013,31(1):6-9.

    [2]王月英,王小春,吳紅英,等.17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯聯(lián)合γ射線照射對不同品系小鼠的抑瘤作用 [J]. 國際放射醫(yī)學核醫(yī)學雜志,2012,36(2):97-100.

    [3]王忻妍,王月英,吳紅英,等.17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯聯(lián)合放、化療抗腫瘤作用的研究[J].中國醫(yī)藥導報,2013,10(32):4-6,9.

    [4]宋娜玲,孟愛民,王月英,等.17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯聯(lián)合γ射線對黑色素瘤B16生長的抑制作用[J].中華放射醫(yī)學與防護雜志,2012,32(3):233-235.

    [5]衛(wèi)生部藥政局.新藥(西藥)臨床前研究指導原則匯編(藥學,藥理學,毒理學)[C].北京:衛(wèi)生部藥政局,1993:137.

    [6]Sehreiber H. Tumor immunologyIn Fundamental Immunology [M]. 3rd ed. New York:Raven Press Ltd,1993:l143.

    [7]Frey B,Rubner Y,Kulzer L,et al. Antitumor immune responses induced by ionizing irradiation and further immune stimulation [J]. Cancer Immunol Immunother,2014,63(1):29-36.

    [8]李衛(wèi)紅,王浩,周曉靚,等.腫瘤放射治療增敏劑研究新進展[J].國際放射醫(yī)學核醫(yī)學雜志,2013,37(4):233-238.

    [9]劉曉秋,王芹,周則衛(wèi),等.9401對H22肝癌小鼠放射增敏效應的研究[J].國際放射醫(yī)學核醫(yī)學雜志,2013,37(1):13-15,37.

    [10]白明華,張揚,王寶峰,等.姜黃素提高人胰腺癌PANC-1細胞放射敏感性的機制研究[J].中華放射醫(yī)學與防護雜志,2013,33(4):360-363.

    [11]于洪升,費從合,沈方臻,等.低劑量輻射聯(lián)合環(huán)磷酰胺對腫瘤細胞凋亡、細胞周期以及骨髓增殖的影響[J].中華放射醫(yī)學與防護雜志,2004,24(2):31-33.

    [12]王叔橋,張麗宏,李炎,等.參黃膠囊對環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠免疫功能的影響[J].現(xiàn)代藥物與臨床,2013,28(4):504-507.

    [13]Li D,Wang Y,Wu H,et al. The effects of p38 MAPK inhibition combined with G-CSF administration on the hematoimmune system in mice with irradiation injury [J]. PLoS One,2013,8(4):62921.

    (收稿日期:2014-01-14本文編輯:蘇暢)

    [基金項目] 國家自然科學基金資助項目(編號81102873);天津市自然科學基金資助項目(編號12JCQNJC09100)。

    [作者簡介] 王忻妍(1979.11-),女,碩士研究生;研究方向:腫瘤治療。

    ▲通訊作者

    猜你喜歡
    荷瘤低劑量小鼠
    小鼠大腦中的“冬眠開關(guān)”
    除痰解毒方聯(lián)合吉非替尼對肺腺癌H1975荷瘤小鼠Twist、Fibronectin表達的影響
    短管兔耳草乙醇提取物對H22荷瘤小鼠的抑瘤作用
    中成藥(2017年8期)2017-11-22 03:19:14
    16排螺旋CT低劑量掃描技術(shù)在腹部中的應用
    米小鼠和它的伙伴們
    獨角蓮軟膠囊抗人肝癌Hep-2荷瘤裸鼠移植瘤作用及對p53表達的影響
    石見穿多糖對H22荷瘤小鼠的抗腫瘤免疫調(diào)節(jié)作用
    Avp-iCre轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定
    自適應統(tǒng)計迭代重建算法在頭部低劑量CT掃描中的應用
    低劑量輻射致癌LNT模型研究進展
    国产一区二区在线av高清观看| 成人综合一区亚洲| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 两个人的视频大全免费| avwww免费| 91麻豆精品激情在线观看国产| 免费大片18禁| 午夜爱爱视频在线播放| 日韩大尺度精品在线看网址| 成人亚洲欧美一区二区av| 五月伊人婷婷丁香| 国产精品精品国产色婷婷| 国模一区二区三区四区视频| 99久久成人亚洲精品观看| 亚洲欧美成人精品一区二区| 蜜臀久久99精品久久宅男| 亚州av有码| 国产精品久久久久久av不卡| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲色图av天堂| 深夜a级毛片| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲国产色片| 日韩一区二区视频免费看| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 黑人高潮一二区| 久久午夜福利片| 午夜福利成人在线免费观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 亚洲美女黄片视频| av在线播放精品| 国产亚洲欧美98| 午夜视频国产福利| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国国产精品蜜臀av免费| 国产麻豆成人av免费视频| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 亚洲色图av天堂| 看非洲黑人一级黄片| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 精品一区二区三区视频在线| 欧美最黄视频在线播放免费| 永久网站在线| 国产成年人精品一区二区| 久久久久国内视频| 国产精品一区二区免费欧美| 欧美区成人在线视频| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 一本精品99久久精品77| 亚洲欧美精品自产自拍| 99热网站在线观看| 色综合站精品国产| 卡戴珊不雅视频在线播放| 99riav亚洲国产免费| 春色校园在线视频观看| 麻豆av噜噜一区二区三区| 中出人妻视频一区二区| 精品一区二区三区av网在线观看| 亚洲性久久影院| 成年版毛片免费区| 日韩人妻高清精品专区| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产一区二区在线av高清观看| 乱人视频在线观看| 日韩高清综合在线| 精品无人区乱码1区二区| 美女高潮的动态| 免费看日本二区| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 黄色欧美视频在线观看| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 看十八女毛片水多多多| 男人舔奶头视频| 91av网一区二区| 国产伦精品一区二区三区视频9| 色吧在线观看| 一级毛片电影观看 | 久久人人精品亚洲av| 成年女人永久免费观看视频| 国产视频内射| 亚洲高清免费不卡视频| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 3wmmmm亚洲av在线观看| 男人的好看免费观看在线视频| 在线播放国产精品三级| 高清午夜精品一区二区三区 | 日日摸夜夜添夜夜爱| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲av二区三区四区| 日本 av在线| 亚洲五月天丁香| 直男gayav资源| 99视频精品全部免费 在线| 久久久久久久久大av| 午夜老司机福利剧场| 国产大屁股一区二区在线视频| 国产视频一区二区在线看| av免费在线看不卡| 简卡轻食公司| 亚洲,欧美,日韩| av国产免费在线观看| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产精品久久久久久久久免| 在线观看免费视频日本深夜| 麻豆国产97在线/欧美| 国产精品一区www在线观看| 成人一区二区视频在线观看| 男女啪啪激烈高潮av片| 久久6这里有精品| 九九爱精品视频在线观看| 一个人看的www免费观看视频| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 18禁在线无遮挡免费观看视频 | 久久久久久国产a免费观看| 麻豆国产av国片精品| 成人一区二区视频在线观看| 久久国产乱子免费精品| 一本久久中文字幕| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产精品综合久久久久久久免费| 天美传媒精品一区二区| 国产精品一区二区免费欧美| 2021天堂中文幕一二区在线观| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 啦啦啦啦在线视频资源| 全区人妻精品视频| 最近视频中文字幕2019在线8| 亚洲一区高清亚洲精品| 免费av不卡在线播放| www.色视频.com| av卡一久久| 又爽又黄a免费视频| 免费观看在线日韩| 一级毛片电影观看 | 嫩草影院新地址| 校园春色视频在线观看| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 99热只有精品国产| 天天躁日日操中文字幕| 亚洲在线观看片| 国产高清视频在线播放一区| 日本a在线网址| 99热这里只有精品一区| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 日韩高清综合在线| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 成人av一区二区三区在线看| 天堂√8在线中文| 99热6这里只有精品| 搞女人的毛片| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产探花极品一区二区| 丰满的人妻完整版| 国产日本99.免费观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 亚洲自偷自拍三级| 欧美中文日本在线观看视频| 全区人妻精品视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 亚洲美女搞黄在线观看 | 最近的中文字幕免费完整| 中国美白少妇内射xxxbb| 在线观看一区二区三区| 亚洲国产精品成人久久小说 | 日产精品乱码卡一卡2卡三| 亚洲av一区综合| 成年av动漫网址| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 成人特级av手机在线观看| 色视频www国产| 一个人看视频在线观看www免费| 日本 av在线| 六月丁香七月| 色尼玛亚洲综合影院| 免费观看在线日韩| 91在线精品国自产拍蜜月| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 免费在线观看影片大全网站| 色播亚洲综合网| 亚洲在线观看片| 人人妻人人澡欧美一区二区| 六月丁香七月| av在线亚洲专区| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产精品三级大全| 色av中文字幕| 亚洲精品亚洲一区二区| videossex国产| 欧美最黄视频在线播放免费| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 亚洲国产精品成人久久小说 | 深夜a级毛片| 亚洲va在线va天堂va国产| 久久久欧美国产精品| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 最近在线观看免费完整版| 伦精品一区二区三区| 国产成人91sexporn| 人妻少妇偷人精品九色| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 有码 亚洲区| 女的被弄到高潮叫床怎么办| ponron亚洲| av在线播放精品| 成人综合一区亚洲| 丰满的人妻完整版| 国产精品伦人一区二区| 日本黄大片高清| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲三级黄色毛片| 99热网站在线观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲av第一区精品v没综合| 久久久久久久亚洲中文字幕| 我的老师免费观看完整版| av在线天堂中文字幕| 级片在线观看| 91av网一区二区| 白带黄色成豆腐渣| 国产精品福利在线免费观看| 亚洲精品国产av成人精品 | 卡戴珊不雅视频在线播放| 亚洲人成网站高清观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 日日撸夜夜添| 毛片一级片免费看久久久久| 精品无人区乱码1区二区| 天堂av国产一区二区熟女人妻| av.在线天堂| 99热只有精品国产| 久久九九热精品免费| 最近最新中文字幕大全电影3| 成年女人看的毛片在线观看| 亚洲三级黄色毛片| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 九九热线精品视视频播放| 最新在线观看一区二区三区| 久久久久国产网址| 最新中文字幕久久久久| av在线播放精品| 国产精品日韩av在线免费观看| 亚洲成a人片在线一区二区| 国语自产精品视频在线第100页| 在线免费观看的www视频| 麻豆国产av国片精品| 亚洲人成网站在线播| 国产免费男女视频| 精品福利观看| 波多野结衣高清无吗| 91久久精品国产一区二区三区| 亚洲va在线va天堂va国产| 国产 一区 欧美 日韩| 人人妻人人看人人澡| 波野结衣二区三区在线| 精华霜和精华液先用哪个| 91久久精品国产一区二区成人| 麻豆乱淫一区二区| 久久久精品大字幕| 在线观看免费视频日本深夜| 亚洲美女视频黄频| 亚洲精品久久国产高清桃花| 天堂影院成人在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产一区亚洲一区在线观看| 禁无遮挡网站| 一本精品99久久精品77| 国产伦在线观看视频一区| av.在线天堂| avwww免费| 69人妻影院| 国产69精品久久久久777片| 精品久久久噜噜| 中文亚洲av片在线观看爽| 日本 av在线| 嫩草影院新地址| 少妇熟女欧美另类| 亚洲人成网站高清观看| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产 一区 欧美 日韩| 国产高清不卡午夜福利| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 成人漫画全彩无遮挡| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 97碰自拍视频| 综合色丁香网| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 九九在线视频观看精品| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 热99re8久久精品国产| 国产成人一区二区在线| 又粗又爽又猛毛片免费看| 香蕉av资源在线| 久久韩国三级中文字幕| 99热这里只有是精品在线观看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产极品精品免费视频能看的| 久久这里只有精品中国| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲欧美日韩高清专用| 亚洲av成人精品一区久久| 久久久久久九九精品二区国产| 黄色视频,在线免费观看| 特大巨黑吊av在线直播| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲av成人av| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲精品日韩在线中文字幕 | 久久人人爽人人片av| 我的老师免费观看完整版| 国产成人a∨麻豆精品| 中国美白少妇内射xxxbb| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 九九爱精品视频在线观看| 2021天堂中文幕一二区在线观| 熟女人妻精品中文字幕| 12—13女人毛片做爰片一| 男插女下体视频免费在线播放| 亚洲色图av天堂| 我要搜黄色片| 97超碰精品成人国产| 色哟哟·www| 国产在视频线在精品| 国产一区二区在线观看日韩| 校园春色视频在线观看| avwww免费| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产男靠女视频免费网站| 国产成人aa在线观看| 国产免费一级a男人的天堂| 春色校园在线视频观看| 亚洲第一区二区三区不卡| 日韩av在线大香蕉| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 俄罗斯特黄特色一大片| 成人精品一区二区免费| 亚洲精品国产成人久久av| 成人综合一区亚洲| 国产成人福利小说| 午夜视频国产福利| 激情 狠狠 欧美| 亚洲人成网站在线观看播放| 国内精品一区二区在线观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 麻豆一二三区av精品| 国产精品免费一区二区三区在线| 日韩欧美国产在线观看| 搡老岳熟女国产| 日本黄色片子视频| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 免费看av在线观看网站| 婷婷色综合大香蕉| 亚洲美女搞黄在线观看 | 麻豆乱淫一区二区| 2021天堂中文幕一二区在线观| 国产中年淑女户外野战色| 男女啪啪激烈高潮av片| 久久久久性生活片| 午夜影院日韩av| 在线看三级毛片| 身体一侧抽搐| 久久6这里有精品| 变态另类丝袜制服| 亚洲最大成人手机在线| 欧美日韩国产亚洲二区| 日韩中字成人| 在现免费观看毛片| 欧美最黄视频在线播放免费| 午夜福利高清视频| 岛国在线免费视频观看| av在线老鸭窝| 亚洲成人精品中文字幕电影| 国产成人影院久久av| 搡老熟女国产l中国老女人| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产人妻一区二区三区在| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产单亲对白刺激| 欧美区成人在线视频| 亚洲性夜色夜夜综合| 最近最新中文字幕大全电影3| 在线观看av片永久免费下载| 日本免费a在线| 欧美潮喷喷水| 热99在线观看视频| 日本黄色片子视频| 1000部很黄的大片| 久久久精品94久久精品| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产大屁股一区二区在线视频| 婷婷色综合大香蕉| 欧美中文日本在线观看视频| 成人毛片a级毛片在线播放| 一本久久中文字幕| 欧美不卡视频在线免费观看| 嫩草影院精品99| 午夜久久久久精精品| 午夜影院日韩av| 亚洲四区av| 伊人久久精品亚洲午夜| 十八禁网站免费在线| 中文字幕免费在线视频6| 成人毛片a级毛片在线播放| 夜夜爽天天搞| 国产精品野战在线观看| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 中文字幕免费在线视频6| 精品一区二区三区人妻视频| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 久久久成人免费电影| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 在线观看66精品国产| 18禁在线播放成人免费| 欧美最黄视频在线播放免费| 草草在线视频免费看| 欧美3d第一页| 在线观看av片永久免费下载| 1024手机看黄色片| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 欧美zozozo另类| 91在线观看av| 国产精品日韩av在线免费观看| 国产综合懂色| 黄片wwwwww| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 乱系列少妇在线播放| 国产精品乱码一区二三区的特点| 精品午夜福利在线看| 精品午夜福利视频在线观看一区| 日韩av不卡免费在线播放| 日本a在线网址| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 精品国产三级普通话版| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲一区二区三区色噜噜| 欧美成人a在线观看| 日韩国内少妇激情av| 成人特级av手机在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲成人中文字幕在线播放| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 色哟哟哟哟哟哟| 在线观看午夜福利视频| 在线国产一区二区在线| 国产成人91sexporn| 国产v大片淫在线免费观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 人妻久久中文字幕网| 成年版毛片免费区| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国产一区亚洲一区在线观看| 免费黄网站久久成人精品| 国产一区二区三区av在线 | 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产高潮美女av| 禁无遮挡网站| 日本成人三级电影网站| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 亚洲人成网站在线播| 91av网一区二区| 国产v大片淫在线免费观看| 91av网一区二区| 欧美中文日本在线观看视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲欧美清纯卡通| 99久久九九国产精品国产免费| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 成人欧美大片| 深夜精品福利| 别揉我奶头 嗯啊视频| 精品人妻视频免费看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 日韩欧美 国产精品| 1024手机看黄色片| 免费观看在线日韩| av卡一久久| 伦理电影大哥的女人| 日韩欧美免费精品| 久久亚洲国产成人精品v| 成人特级av手机在线观看| 亚洲美女搞黄在线观看 | 欧美另类亚洲清纯唯美| 精品久久久久久久久亚洲| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 中文字幕av成人在线电影| 能在线免费观看的黄片| 一进一出抽搐gif免费好疼| 国产淫片久久久久久久久| 国产伦在线观看视频一区| 免费av不卡在线播放| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 日韩欧美免费精品| 真人做人爱边吃奶动态| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 内射极品少妇av片p| 成人午夜高清在线视频| 亚洲性久久影院| 国产一区二区在线av高清观看| 可以在线观看毛片的网站| 丰满人妻一区二区三区视频av| 久久久久久久久久久丰满| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产单亲对白刺激| 在线观看免费视频日本深夜| 男女视频在线观看网站免费| 成人高潮视频无遮挡免费网站| a级毛片免费高清观看在线播放| 精品久久久噜噜| 精品午夜福利在线看| 成人美女网站在线观看视频| 深夜精品福利| 日韩大尺度精品在线看网址| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 中文字幕久久专区| 99在线人妻在线中文字幕| 可以在线观看毛片的网站| 麻豆国产97在线/欧美| 真人做人爱边吃奶动态| a级毛片a级免费在线| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 久久综合国产亚洲精品| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 两个人视频免费观看高清| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产成人a∨麻豆精品| 国产精品1区2区在线观看.| 成人无遮挡网站| 在线观看免费视频日本深夜| 美女cb高潮喷水在线观看| 不卡一级毛片| 一边摸一边抽搐一进一小说| 人妻夜夜爽99麻豆av| 国产v大片淫在线免费观看| 亚州av有码| 特级一级黄色大片| 亚洲va在线va天堂va国产| 中文字幕av成人在线电影| 免费看日本二区| 亚洲综合色惰| 尾随美女入室| 国产亚洲av嫩草精品影院| 精品人妻视频免费看| 淫妇啪啪啪对白视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 热99re8久久精品国产| 少妇被粗大猛烈的视频| 精品国内亚洲2022精品成人| 日日干狠狠操夜夜爽| 女同久久另类99精品国产91| 午夜爱爱视频在线播放| 国产伦精品一区二区三区视频9| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 久久午夜亚洲精品久久| 婷婷色综合大香蕉| 99久久精品一区二区三区| 欧美成人a在线观看| 神马国产精品三级电影在线观看| 中文在线观看免费www的网站| 超碰av人人做人人爽久久| 国内精品美女久久久久久| 午夜福利成人在线免费观看| 欧美一区二区国产精品久久精品| 国产黄片美女视频| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲综合色惰| 久久久久久久久久成人| 99在线视频只有这里精品首页| 男女下面进入的视频免费午夜| 成人精品一区二区免费| 插阴视频在线观看视频| 日本五十路高清| 最近最新中文字幕大全电影3| 国产黄色小视频在线观看| 国内精品美女久久久久久| 99热这里只有精品一区| 亚洲最大成人av| 免费观看在线日韩| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲无线在线观看| 欧美日韩综合久久久久久| 干丝袜人妻中文字幕| 国产男人的电影天堂91| 三级经典国产精品| 久久99热6这里只有精品| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 看十八女毛片水多多多| 在线看三级毛片| 国产男人的电影天堂91| 网址你懂的国产日韩在线| 欧美色欧美亚洲另类二区| 亚洲av美国av| 欧美不卡视频在线免费观看| 久久精品国产亚洲网站| 黑人高潮一二区| 亚洲色图av天堂| 桃色一区二区三区在线观看| 深夜精品福利| 三级经典国产精品| 国产69精品久久久久777片| 床上黄色一级片| 在线a可以看的网站| 老司机午夜福利在线观看视频|