銀杏達(dá)莫注射液對急性肺損傷的實(shí)驗(yàn)及分析

肖望+廖秀清+劉燕君+謝曉玲

[摘要] 目的 探討銀杏達(dá)莫注射液對急性肺損傷的保護(hù)作用。方法 健康家兔24只，采用完全隨機(jī)分為3組：對照組、模型組和實(shí)驗(yàn)組，每組8只。觀察三組的MDA、SOD、肺干濕比、IL-10及TNF-a變化。結(jié)果 三組MDA比較，差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；模型組SOD與其他兩組比較，差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。實(shí)驗(yàn)組與對照組SOD比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。三組肺干濕比比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。三組IL-10比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；三組TNF-a比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 銀杏達(dá)莫注射液對急性肺損傷具有明顯的保護(hù)作用。

[關(guān)鍵詞] 銀杏達(dá)莫注射液；急性肺損傷；保護(hù)作用

[中圖分類號] R541.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 2095-0616（2014）06-27-03

急性肺損傷（ALI）/急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）是嚴(yán)重感染、創(chuàng)傷、休克等打擊后常見的外科危急并發(fā)癥，死亡率極高，目前仍無十分有效的治療方法和藥物[1-2]。本項(xiàng)目通過建立急性肺損傷動物模型，觀察銀杏達(dá)莫對組織形態(tài)學(xué)和生物學(xué)的影響，同時(shí)研究心率、呼吸、頻率、血?dú)夥治龊拖嚓P(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的動態(tài)變化[3]，探討銀杏達(dá)莫注射液對急性肺損傷的保護(hù)作用和可能機(jī)制，以期為ALI/ARDS的臨床治療提供一個可能的新途徑，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

健康家兔24只，體重2.5～3.5kg，雌雄各半。

采用完全隨機(jī)分3組：對照組、模型組和實(shí)驗(yàn)組，每組8只。動物許可證號：SYXK2006007。三組動物的體重、性別比等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 動物造模

乙醚吸入麻醉至家兔軀體變軟，四肢活動減少，家兔頭頸部后仰并以血管鉗向外輕拉家兔舌頭使口咽部充分暴露，以耳鏡快速置入家兔口腔并暴露其聲門，當(dāng)聲門打開時(shí)迅速以注射軟管滴入LPS溶液（2mg/kg），豎立并左右晃動家兔身體以使藥物在兩肺內(nèi)分布均勻每天1次，連續(xù)2d。

1.3 方法

術(shù)前禁食12h，所有動物經(jīng)耳緣靜脈注射3%戊巴比妥鈉（30mg/kg），麻醉成功后，行頸動脈置管，連接多導(dǎo)生理監(jiān)測儀，連續(xù)記錄心率、呼吸頻率等變化。實(shí)驗(yàn)組與模型組：耳緣靜脈緩慢推注油酸（0.1mL/kg），10min后靜脈注射生理鹽水30mL。對照組：耳緣靜脈注射生理鹽水30mL。

1.4 觀察指標(biāo)

記錄各組動物在傷前和傷后1、2、3、4h的心率、呼吸頻率，并通過動脈插管抽取血標(biāo)本，測定各時(shí)點(diǎn)血?dú)夥治鲋岛脱錞NF-a、IL-10。4h后處死動物，取左肺下葉背段1cm×1cm×1cm大小肺組織，用10%甲醛固定，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察其組織形態(tài)學(xué)變化。按Naokiis介紹的方法肺損傷進(jìn)行評分：把肺損傷程度分為5分：0=無損傷，1=輕度損傷，2=中度損傷，3=重度損傷，4=極重度損傷。在左下肺相同的部位取1g大小的肺組織做出勻漿液，用硫代巴比妥酸法測定丙二醛含量和超氧化物歧化酶的活性；剩余肺組織稱重后置80℃烤箱，烘烤72h至恒重，計(jì)算肺濕/干（W/D）比。肺干濕比（W/D）=濕重/干重；肺系數(shù)=100×肺濕重/體重[4]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件，方差齊時(shí)兩兩比較采用LSD聯(lián)合SNK法；計(jì)量資料用（）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用x2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組上清液中MDA檢測及SOD活性結(jié)果比較

三組MDA比較，差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；模型組SOD與其他兩組比較，差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。實(shí)驗(yàn)組與對照組SOD比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2.2 三組肺干濕比比較

對照組肺干濕比為4.35±0.21，模型組為5.26±0.55，實(shí)驗(yàn)組為4.97±0.51，三組肺干濕比比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=5.167，P<0.05）。

2.3 三組血清TNF-a、IL-10比較

三組IL-10比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；三組TNF-a比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

2.4 三組HE染色圖片

對照組：未見明顯改變，肺泡結(jié)構(gòu)多數(shù)保持完整，肺泡壁無水腫，肺間質(zhì)少見炎性細(xì)胞浸潤。模型組：肺間質(zhì)內(nèi)大量炎性細(xì)胞浸潤，肺泡腔內(nèi)少量炎性細(xì)胞，肺間質(zhì)水腫，肺泡間隔增寬，肺泡腔結(jié)構(gòu)破壞、融合，肺泡腔及肺間質(zhì)內(nèi)炎性出血。實(shí)驗(yàn)組：肺間質(zhì)內(nèi)大量炎性細(xì)胞浸潤，肺泡腔內(nèi)少量炎性細(xì)胞，肺間質(zhì)水腫，肺泡間隔增寬，肺泡腔結(jié)構(gòu)破壞、融合，肺泡腔及肺間質(zhì)內(nèi)炎性出血。與模型組相差不多。見圖1。

A 正常對照組肺組織

B 油酸損傷組肺組織

C 實(shí)驗(yàn)組肺組織

3 討論

急性肺損傷（ALI）是由多種肺內(nèi)外致病因素引起的，以急性呼吸困難為主要臨床表現(xiàn)的全身炎癥反應(yīng)綜合征，其發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，若不能得到及時(shí)有效的治療，往往會發(fā)展成急性呼吸窘迫綜合癥（ARDS），甚至危及患者生命。至今ALI確切的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，目前認(rèn)為除有些致病因素對肺泡膜的直接損傷外，更重要的是多種效應(yīng)細(xì)胞如中性粒細(xì)胞、巨唾細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等在肺內(nèi)聚集、激活導(dǎo)致氧化應(yīng)激及TNF-a、IL-10等促炎介質(zhì)增加，使肺內(nèi)抗炎介質(zhì)增加，促發(fā)過度炎癥反應(yīng)，是ALI發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[5-6]。

銀杏達(dá)莫注射液含有雙嘧達(dá)莫和銀杏葉提取制劑，銀杏葉提取制劑有效成分為銀杏黃酮和銀杏內(nèi)酯，是具有多種藥理作用的血管擴(kuò)張劑。具有抑制血小板活化因子，防止血栓形成，擴(kuò)張毛細(xì)血管、增加組織血流量、抑制脂質(zhì)過氧化，抑制OFR對組織的損傷，降低血中膽固醇及改善微循環(huán)等作用。而銀杏內(nèi)酯是目前被認(rèn)為最有臨床應(yīng)用前景的天然PAF受體拮抗劑[7]。其可清除氧自由基，防止自由基對神經(jīng)細(xì)胞的損傷，抑制自由基誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡；雙嘧達(dá)莫可抑制血小板的第一相聚集和第二相聚集[8]，因而具有抗血栓形成作用，與銀杏內(nèi)酯聯(lián)合應(yīng)用能協(xié)同改善腦組織供血流量。而銀杏黃酮苷是氧自由基的捕捉劑和清除劑，參與清除超氧陰離子，抑制脂質(zhì)氧化反應(yīng)，從而起到保護(hù)腦細(xì)胞的作用[9-10]。endprint

MDA是OFR與生物膜多聚不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，測定MDA可反映OFR水平從而反映內(nèi)皮細(xì)胞損傷程度。SOD是機(jī)體內(nèi)抗氧化酶之一，主要清除O2-，使脂質(zhì)過氧化反應(yīng)受抑[11-12]。機(jī)體清除OFR的能力可以間接以SOD活性來衡量，SOD能清除OFR，從而抵抗細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷。本研究中，三組MDA比較，差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；模型組SOD與其他兩組比較，差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)組與對照組SOD比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明銀杏達(dá)莫具有保護(hù)損傷的肺組織得功能。IL-10是體內(nèi)最重要的抗炎因子。但是，由于其作用比較復(fù)雜，因此在ALI中的作用研究的不多，并且根據(jù)各研究實(shí)驗(yàn)條件不同結(jié)果也各異。在本課題實(shí)驗(yàn)條件下，IL-10含量在各組間并沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；三組TNF-a比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

綜上所述，銀杏達(dá)莫能夠抑制血漿TNF-a含量升高，減輕PMN浸潤，清除氧自由基，減輕肺組織水腫程度而對ALI起到了有效的保護(hù)作用。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 曹慧玲，呂士杰，姜艷霞，等.急性肺損傷家兔氧自由基變化及不同中藥治療作用的對比[J].中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2006，13（3）：146-149.

[2] 馬希剛，張珍祥，徐永建.火把花根片對急性肺損傷的保護(hù)作用研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2007，14 （3）：176-180.

[3] 朱珊珊，劉功檢.內(nèi)毒素急性肺損傷與中性粒細(xì)胞凋亡研究現(xiàn)狀[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，9（4）：11-13.

[4] 崔蓉，孟憲麗，王平，等.黃零水提取物對急性肺損傷家兔的保護(hù)作用及其與膽堿能抗炎通路的相關(guān)性研究[J].中草藥，2012，43（2）：321-326.

[5] 崔蓉.黃芩和黃連對急性肺損傷家兔的保護(hù)作用及其與膽堿能抗炎通路的相關(guān)性實(shí)驗(yàn)研究[D].成都：成都中醫(yī)藥大學(xué)，2012.

[6] 徐云潔，朱蕾.川芎嗪對急性肺損傷的保護(hù)作用[J].中國臨床醫(yī)學(xué)，2006，13（6）：916-917.

[7] GR Sajitha，Regi Jose，A Andrews，et al.Garlic Oil and Vitamin E Prevent the Adverse Effects of Lead Acetate and Ethanol Separately as well as in Combination in the Drinking Water of Rats[J].Indian J Clin Biochem，2010，25（3）：280-288.

[8] MM Ghaisas，YS Ahire，PR Dandawate，et al.Effects of Combination of Thiazolidinediones with Melatonin in Dexamethasone-induced Insulin Resistance in Mice[J].Indian Pharm Sci，2011，73（6）：601-607.

[9] 崔磊，矯春曉，李敬田，等.銀杏達(dá)莫在內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷中保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國醫(yī)藥指南，2010，8（26）：11-13.

[10] 林利，詹麗英.參附注射液對大蘭內(nèi)毒素性肺損傷的保護(hù)作用[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2010，26（6）：942-944.

[11] 謝丹紅，盛志新.銀杏葉的臨床應(yīng)用[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2007，27（8）：1111-1112.

[12] 馮建利，姚博，杜怡峰.銀杏達(dá)莫對急性腦梗死病人血漿氧化修飾低密度脂蛋白水平的影響[J].中國新藥與臨床雜志，2007，26（2）：125-128.

（收稿日期：2014-01-14）endprint

MDA是OFR與生物膜多聚不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，測定MDA可反映OFR水平從而反映內(nèi)皮細(xì)胞損傷程度。SOD是機(jī)體內(nèi)抗氧化酶之一，主要清除O2-，使脂質(zhì)過氧化反應(yīng)受抑[11-12]。機(jī)體清除OFR的能力可以間接以SOD活性來衡量，SOD能清除OFR，從而抵抗細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷。本研究中，三組MDA比較，差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；模型組SOD與其他兩組比較，差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)組與對照組SOD比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明銀杏達(dá)莫具有保護(hù)損傷的肺組織得功能。IL-10是體內(nèi)最重要的抗炎因子。但是，由于其作用比較復(fù)雜，因此在ALI中的作用研究的不多，并且根據(jù)各研究實(shí)驗(yàn)條件不同結(jié)果也各異。在本課題實(shí)驗(yàn)條件下，IL-10含量在各組間并沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；三組TNF-a比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

綜上所述，銀杏達(dá)莫能夠抑制血漿TNF-a含量升高，減輕PMN浸潤，清除氧自由基，減輕肺組織水腫程度而對ALI起到了有效的保護(hù)作用。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 曹慧玲，呂士杰，姜艷霞，等.急性肺損傷家兔氧自由基變化及不同中藥治療作用的對比[J].中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2006，13（3）：146-149.

[2] 馬希剛，張珍祥，徐永建.火把花根片對急性肺損傷的保護(hù)作用研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2007，14 （3）：176-180.

[3] 朱珊珊，劉功檢.內(nèi)毒素急性肺損傷與中性粒細(xì)胞凋亡研究現(xiàn)狀[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，9（4）：11-13.

[4] 崔蓉，孟憲麗，王平，等.黃零水提取物對急性肺損傷家兔的保護(hù)作用及其與膽堿能抗炎通路的相關(guān)性研究[J].中草藥，2012，43（2）：321-326.

[5] 崔蓉.黃芩和黃連對急性肺損傷家兔的保護(hù)作用及其與膽堿能抗炎通路的相關(guān)性實(shí)驗(yàn)研究[D].成都：成都中醫(yī)藥大學(xué)，2012.

[6] 徐云潔，朱蕾.川芎嗪對急性肺損傷的保護(hù)作用[J].中國臨床醫(yī)學(xué)，2006，13（6）：916-917.

[7] GR Sajitha，Regi Jose，A Andrews，et al.Garlic Oil and Vitamin E Prevent the Adverse Effects of Lead Acetate and Ethanol Separately as well as in Combination in the Drinking Water of Rats[J].Indian J Clin Biochem，2010，25（3）：280-288.

[8] MM Ghaisas，YS Ahire，PR Dandawate，et al.Effects of Combination of Thiazolidinediones with Melatonin in Dexamethasone-induced Insulin Resistance in Mice[J].Indian Pharm Sci，2011，73（6）：601-607.

[9] 崔磊，矯春曉，李敬田，等.銀杏達(dá)莫在內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷中保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國醫(yī)藥指南，2010，8（26）：11-13.

[10] 林利，詹麗英.參附注射液對大蘭內(nèi)毒素性肺損傷的保護(hù)作用[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2010，26（6）：942-944.

[11] 謝丹紅，盛志新.銀杏葉的臨床應(yīng)用[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2007，27（8）：1111-1112.

[12] 馮建利，姚博，杜怡峰.銀杏達(dá)莫對急性腦梗死病人血漿氧化修飾低密度脂蛋白水平的影響[J].中國新藥與臨床雜志，2007，26（2）：125-128.

（收稿日期：2014-01-14）endprint

MDA是OFR與生物膜多聚不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，測定MDA可反映OFR水平從而反映內(nèi)皮細(xì)胞損傷程度。SOD是機(jī)體內(nèi)抗氧化酶之一，主要清除O2-，使脂質(zhì)過氧化反應(yīng)受抑[11-12]。機(jī)體清除OFR的能力可以間接以SOD活性來衡量，SOD能清除OFR，從而抵抗細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷。本研究中，三組MDA比較，差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；模型組SOD與其他兩組比較，差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)組與對照組SOD比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明銀杏達(dá)莫具有保護(hù)損傷的肺組織得功能。IL-10是體內(nèi)最重要的抗炎因子。但是，由于其作用比較復(fù)雜，因此在ALI中的作用研究的不多，并且根據(jù)各研究實(shí)驗(yàn)條件不同結(jié)果也各異。在本課題實(shí)驗(yàn)條件下，IL-10含量在各組間并沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；三組TNF-a比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

綜上所述，銀杏達(dá)莫能夠抑制血漿TNF-a含量升高，減輕PMN浸潤，清除氧自由基，減輕肺組織水腫程度而對ALI起到了有效的保護(hù)作用。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 曹慧玲，呂士杰，姜艷霞，等.急性肺損傷家兔氧自由基變化及不同中藥治療作用的對比[J].中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2006，13（3）：146-149.

[2] 馬希剛，張珍祥，徐永建.火把花根片對急性肺損傷的保護(hù)作用研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2007，14 （3）：176-180.

[3] 朱珊珊，劉功檢.內(nèi)毒素急性肺損傷與中性粒細(xì)胞凋亡研究現(xiàn)狀[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，9（4）：11-13.

[4] 崔蓉，孟憲麗，王平，等.黃零水提取物對急性肺損傷家兔的保護(hù)作用及其與膽堿能抗炎通路的相關(guān)性研究[J].中草藥，2012，43（2）：321-326.

[5] 崔蓉.黃芩和黃連對急性肺損傷家兔的保護(hù)作用及其與膽堿能抗炎通路的相關(guān)性實(shí)驗(yàn)研究[D].成都：成都中醫(yī)藥大學(xué)，2012.

[6] 徐云潔，朱蕾.川芎嗪對急性肺損傷的保護(hù)作用[J].中國臨床醫(yī)學(xué)，2006，13（6）：916-917.

[7] GR Sajitha，Regi Jose，A Andrews，et al.Garlic Oil and Vitamin E Prevent the Adverse Effects of Lead Acetate and Ethanol Separately as well as in Combination in the Drinking Water of Rats[J].Indian J Clin Biochem，2010，25（3）：280-288.

[8] MM Ghaisas，YS Ahire，PR Dandawate，et al.Effects of Combination of Thiazolidinediones with Melatonin in Dexamethasone-induced Insulin Resistance in Mice[J].Indian Pharm Sci，2011，73（6）：601-607.

[9] 崔磊，矯春曉，李敬田，等.銀杏達(dá)莫在內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷中保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國醫(yī)藥指南，2010，8（26）：11-13.

[10] 林利，詹麗英.參附注射液對大蘭內(nèi)毒素性肺損傷的保護(hù)作用[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2010，26（6）：942-944.

[11] 謝丹紅，盛志新.銀杏葉的臨床應(yīng)用[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2007，27（8）：1111-1112.

[12] 馮建利，姚博，杜怡峰.銀杏達(dá)莫對急性腦梗死病人血漿氧化修飾低密度脂蛋白水平的影響[J].中國新藥與臨床雜志，2007，26（2）：125-128.

（收稿日期：2014-01-14）endprint