霍山石斛安全性評(píng)價(jià)研究

李濱，陳鋒，王新生，張煒玲，*，戴亞峰，歐陽(yáng)臻

（1.江蘇大學(xué)藥學(xué)院，江蘇鎮(zhèn)江212013；2.安徽圣農(nóng)生物科技股份有限公司，安徽六安237000）

霍山石斛是蘭科石斛屬植物，是石斛中的極品，素有“軟黃金”之稱(chēng)，主產(chǎn)于大別山區(qū)的安徽省霍山縣。霍山石斛因具有益胃生津、滋陰清熱、清心明目、潤(rùn)肺止渴等功效[1-2]，已成為食品行業(yè)炙手可熱的原料。但鮮見(jiàn)霍山石斛的毒性研究的報(bào)道。為了科學(xué)地評(píng)價(jià)霍山石斛作為新食品資源食品和保健食品原料的安全性，本文對(duì)其進(jìn)行了動(dòng)物毒理實(shí)驗(yàn)和外源性毒素（農(nóng)殘、重金屬）含量的研究，為以霍山石斛為主要原料的產(chǎn)品開(kāi)發(fā)推廣提供科學(xué)依據(jù)，并為霍山石斛質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 樣品

霍山石斛在安徽圣農(nóng)生物科技股份有限公司石斛有機(jī)栽培基地采摘，經(jīng)烘干、粉碎過(guò)100目篩的粉末。

1.2 劑量

2010版《中國(guó)藥典》第一部石斛的人體推薦最大劑量為12 g/d，以每人60 kg體重計(jì)算，折合劑量0.2g/kg·bw。

1.3 動(dòng)物及環(huán)境

清潔級(jí)ICR健康小鼠及SD大鼠由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，實(shí)驗(yàn)環(huán)境為屏障系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)期間實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度22℃～24℃，濕度52%～58%。

1.4 儀器、試劑及菌株

1.4.1 儀器

6890N氣相色譜儀：美國(guó)安捷倫公司；AA-670型原子吸收分光光度計(jì)：日本島津；EX224ZH電子天平：上海精密儀器有限公司；OLYMPUS顯微鏡：日本OLYMPUS株式會(huì)社；YXQ.WF-0.5高壓滅菌器：衡陽(yáng)市金一帆制藥設(shè)備實(shí)業(yè)有限公司；日立7180型全自動(dòng)生化分析儀：日本 OLYMPUS株式會(huì)社；CELLDYN3700型全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀：美國(guó)雅培公司；BMJ-160恒溫培養(yǎng)箱：上海博迅實(shí)業(yè)有限公司。

1.4.2 試劑

六六六、滴滴涕、鉛、砷、汞標(biāo)準(zhǔn)品均由國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心提供；總蛋白、白蛋白、尿素氮、血糖、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、膽固醇、甘油三酯和肌酐試劑盒均來(lái)自于國(guó)藥集團(tuán)；其余試劑均為分析純由國(guó)藥集團(tuán)提供。

1.4.3 菌株

鼠傷寒沙門(mén)氏菌組氨酸缺陷型 TA97、TA98、TA100、TA102四株菌株和S-9均由中國(guó)CDC營(yíng)養(yǎng)與食品安全所提供。

1.5 方法

1.5.1 外源毒素含量測(cè)定（有機(jī)氯農(nóng)藥殘留和重金屬）

按2010年版《中國(guó)藥典》一部附錄ⅨQ和相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[3-4]的方法測(cè)定有機(jī)氯類(lèi)農(nóng)藥殘留量；按2010年版《中國(guó)藥典》一部附錄ⅨE和相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中的方法測(cè)定 Pb、As、Hg[5-7]的含量。

1.5.2 動(dòng)物安全性評(píng)價(jià)

依據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年版）[8]中保健食品安全性毒理學(xué)檢測(cè)方法進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；

1.5.2.1 小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)[9]

采用最大耐受劑量法，選小鼠20只，雌、雄，首次灌胃前禁食16 h，自由飲水。取受試樣品加蒸餾水配制成0.5 g/mL的溶液，按最大灌胃量20 mL/kg·bw，給小鼠1 d內(nèi)間隔4 h經(jīng)口灌胃3次，累積染毒劑量為30 g/kg·bw。灌胃后連續(xù)觀(guān)察14 d，記錄中毒表現(xiàn)及死亡情況，求得最大耐受劑量。

1.5.2.2 致突變?cè)囼?yàn)[10]

1）細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)（Ames試驗(yàn)）

采用標(biāo)準(zhǔn)平板摻入法，采用經(jīng)鑒定合格的鼠傷寒沙門(mén)氏菌突變型菌株 TA97、TA98、TA100、TA102，活化系統(tǒng)為多氯聯(lián)苯誘導(dǎo)的大鼠肝S-9。在無(wú)菌條件下，將受試樣品用無(wú)菌水稀釋成不同的劑量，隨后與瓊脂、試驗(yàn)菌液、S-9混合液混合導(dǎo)入平皿中。平皿中最終劑量分別為 5 000、1 000、200、40、8 μg/皿，每個(gè)劑量組做3個(gè)平皿，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照、溶劑對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照（2-AF、敵克松、疊氮鈉、1，8-二羥蒽醌，劑量分別為10、50、1.5、50 μg。）。均包括加 S-9 和不加 S-9 兩種情況。平皿37℃培養(yǎng)48 h，計(jì)數(shù)每皿回變菌落數(shù)。如果受試物的回變菌落數(shù)超過(guò)自發(fā)回變菌落數(shù)的2倍以上，并有劑量一反應(yīng)關(guān)系者定為陽(yáng)性。整套試驗(yàn)在相同試驗(yàn)條件下重復(fù)一次。

2）小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)

采用30給受試物法。選ICR小鼠50只，隨機(jī)分成5組，每組10只，雌雄各半。將受試物分為高、中、低 3 個(gè)劑量組，分別為 2.0、1.0、0.5 g/kg·bw，另設(shè)陰性對(duì)照（無(wú)菌水），陽(yáng)性對(duì)照（環(huán)磷酰胺0.04 g/kg·bw）。受試樣品用無(wú)菌水配制濃度為1.0、0.5、0.25 g/mL，以20 mL/kg·bw灌胃，兩次間隔24 h，第二次給受試樣品后6 h處死小鼠，取胸骨常規(guī)制片、鏡檢，每鼠計(jì)數(shù)1 000個(gè)骨髓嗜多染紅細(xì)胞（PCE），記錄含微核細(xì)胞數(shù)、微核發(fā)生率，每片記數(shù)200個(gè)嗜多染紅細(xì)胞，觀(guān)察嗜多染紅細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞的比值（PCE/RBC）。結(jié)果采用Poisson分布U檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

3）小鼠精子畸形試驗(yàn)

選ICR小鼠25只，隨機(jī)分成5組，每組5只。將受試物分為高、中、低3個(gè)劑量組，分別為2.0 g/kg·bw、1.0 g/kg·bw、0.5 g/kg·bw，另設(shè)陰性對(duì)照（無(wú)菌水），陽(yáng)性對(duì)照（環(huán)磷酰胺0.04 g/kg·bw）。受試樣品用無(wú)菌水配制濃度為 1.0、0.5、0.25 g/mL，以 20 mL/kg·bw 灌胃，每天1次，連續(xù)5 d。于首次給受試樣品后的第35天處死小鼠，取兩側(cè)附睪精子濾液按常規(guī)制片、鏡檢。每鼠計(jì)數(shù)1 000個(gè)結(jié)構(gòu)完整的精子，計(jì)算精子畸形發(fā)生率（以百分率計(jì)），結(jié)果采用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。

1.5.2.3 大鼠30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)[11]

選擇SD健康大鼠80只，隨機(jī)分4組，每組20只，雌雄各半。受試樣品按人體推薦最大劑量的30、65、100 倍設(shè) 6.0、13.0、20.0 g/kg·bw 3 個(gè)劑量組，另設(shè)陰性對(duì)照（無(wú)菌水）。受試樣品用無(wú)菌水配制濃度分別為0.3、0.65、1.0 g/mL，以 20 mL/kg.bw 灌胃，連續(xù) 30 d。大鼠自由進(jìn)食飲水，每周稱(chēng)1次體重和2次食物攝入量，計(jì)算每周及總的食物利用率，每周觀(guān)察動(dòng)物一般情況，有無(wú)中毒表現(xiàn)和死亡。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中觀(guān)察大鼠體重、食物利用率，血液學(xué)指標(biāo)，臟器系數(shù)、病理學(xué)檢查。

2 結(jié)果與分析

2.1 霍山石斛原料中外源毒素的含量測(cè)定

根據(jù)中國(guó)藥典第一部（2010版）農(nóng)藥殘留量和重金屬測(cè)定方法，檢測(cè)出霍山石斛原料中六六六、滴滴涕、鉛、砷、汞的含量見(jiàn)表1。

表1 霍山石斛中外源毒素的含量Table 1 Exogenous toxins content in Dendrobium huoshanense mg/kg

從表1可以看出霍山石斛中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量（六六六、滴滴涕）和重金屬（鉛、砷、汞）均大大低于保?。üδ埽┦称吠ㄓ脴?biāo)準(zhǔn)[12]、食品中農(nóng)藥最大殘留限量[13]和藥用植物及制劑外經(jīng)貿(mào)綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中的規(guī)定。因此上述研究結(jié)果表明安徽圣農(nóng)生物科技股份有限公司提供霍山石斛原料外源性毒素含量完全符合國(guó)家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，食用安全。

2.2 小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)

以30 g/kg·bw劑量的霍山石斛給小鼠灌胃后未見(jiàn)明顯中毒癥狀，觀(guān)察14 d無(wú)死亡。觀(guān)察期末將受試動(dòng)物處死進(jìn)行解剖檢查，肝、脾、腎、胃、腸、心、肺等主要臟器，未見(jiàn)明顯異常改變。因此，霍山石斛的雌雄小鼠急性經(jīng)口的最大耐受劑量（MTD）大于30 g/kg·bw（相當(dāng)于人體推薦劑量的150倍），屬無(wú)毒級(jí)。

2.3 致突變?cè)囼?yàn)結(jié)果

2.3.1 Ames試驗(yàn)

Ames試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2，表3。

表2 霍山石斛Ames實(shí)驗(yàn)回變菌落數(shù)（±SD）（第一次）Table 2 Dendrobium huoshanense Ames test about the colony count（first）（±SD）

表2 霍山石斛Ames實(shí)驗(yàn)回變菌落數(shù)（±SD）（第一次）Table 2 Dendrobium huoshanense Ames test about the colony count（first）（±SD）

注：“*”表示超過(guò)陰性對(duì)照組菌落數(shù)2倍以上。

不加S-9 TA97 TA98 TA100 TA102 TA97 TA98 TA100 TA102霍山石斛 5000 123±16 35±3 175±9 274±29 121±16 34±7 172±18 284±25 1000 119±18 33±2 166±18 249±15 114±11 36±4 175±23 271±32 200 113±16 34±5 170±15 266±28 109±12 33±4 178±19 268±30 40 113±13 37±6 165±25 269±13 125±14 36±2 156±14 280±20 8 121±13 36±3 150±16 266±23 111±17 36±5 161±22 278±21 2-氨基芴 10 1 135±133* 3 573±230* 2 931±190*1,8-二羥基蒽醌 50 1 107±82*敵克松 50 2 020±134* 1 259±148* 1 094±132*疊氮鈉 1.5 2 156±232*自發(fā)回變（水） 0.1 mL 113±18 38±7 165±12 286±13 117±14 40±5 172±21 275±26組別 劑量/（μg/皿）回變突變數(shù)加S-9

表3 霍山石斛Ames實(shí)驗(yàn)回變菌落數(shù)（±SD）（第二次）Table 3 Dendrobium huoshanense Ames test about the colony count（second）（±SD）

表3 霍山石斛Ames實(shí)驗(yàn)回變菌落數(shù)（±SD）（第二次）Table 3 Dendrobium huoshanense Ames test about the colony count（second）（±SD）

注：“*”表示超過(guò)陰性對(duì)照組菌落數(shù)2倍以上。

不加S-9 TA97 TA98 TA100 TA102 TA97 TA98 TA100 TA102霍山石斛 5000 113±9 36±2 169±19 267±19 116±11 36±2 170±21 277±19 1000 123±11 36±4 161±29 257±26 113±24 33±2 164±18 279±30 200 118±22 35±4 162±18 262±19 123±19 37±2 169±23 259±11 40 100±8 34±6 167±20 261±12 120±17 32±4 170±16 271±26 8 118±10 36±4 174±27 281±17 130±8 33±3 179±20 279±16 2-氨基芴 10 1 143±142* 3 564±251* 2 686±228*1，8-二羥基蒽醌 50 1 114±131*敵克松 50 2 042±127* 1 196±101* 1 057±139*疊氮鈉 1.5 2 014±108*自發(fā)回變（水） 0.1 mL 120±12 35±3 160±32 278±25 122±15 34±2 165±13 264±23組別 劑量/（μg/皿）回變突變數(shù)加S-9

試驗(yàn)結(jié)果表明霍山石斛各劑量組回變菌落數(shù)均未超過(guò)陰性對(duì)照組回變菌落數(shù)的2倍，亦無(wú)劑量-反應(yīng)關(guān)系。即霍山石斛對(duì) TA97、TA98、TA100、TA102 四株試驗(yàn)菌株，在加與不加S-9時(shí)，均未見(jiàn)有致基因突變作用。

2.3.2 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)

小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)結(jié)果表明，霍山石斛各劑量組微核率與陰性對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而陽(yáng)性對(duì)照組（環(huán)磷酞胺）與陰性對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。同時(shí)未見(jiàn)霍山石斛對(duì)小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核形成及PCE/RBC比值產(chǎn)生影響。上述結(jié)果表明霍山石斛對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞無(wú)損傷作用。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 霍山石斛對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞微核發(fā)生率和PCE/RBC比值的影響Table 4 Influence of Dendrobium huoshanense incidence and PCE/RBC ratio on the micronucleus of bone marrow cells in mice

2.3.3 小鼠精子畸形試驗(yàn)

霍山石斛對(duì)小鼠精子畸形的影響結(jié)果見(jiàn)表5和表6。

表5 霍山石斛對(duì)小鼠精子畸形率的影響Table 5 Influence of Dendrobium huoshanense affect sperm deformity rate in mice

從表5和表6可見(jiàn)，各劑量組精子畸形率與陰性對(duì)照組比較，無(wú)顯著性差異（P＞0.05），而陽(yáng)性對(duì)照組小鼠精子畸形率與陰性對(duì)照組比較有顯著提高（P＜0.01）。因此試驗(yàn)結(jié)果表明霍山石斛對(duì)小鼠精子畸形率未產(chǎn)生影響。

2.4 大鼠30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)

用霍山石斛摻入飼料喂養(yǎng)大鼠30 d內(nèi)，各組小鼠生長(zhǎng)發(fā)育良好，無(wú)異常行為和中毒癥狀，無(wú)死亡。并通過(guò)以下指標(biāo)檢測(cè)來(lái)判斷霍山石斛對(duì)大鼠身體狀況的影響。

2.4.1 霍山石斛對(duì)大鼠體重及食物利用率的影響

記錄大鼠30d喂養(yǎng)期間內(nèi)不同階段的體重、增重及總增重結(jié)果見(jiàn)表7和表8。各劑量組雌雄鼠各時(shí)點(diǎn)的每周及總進(jìn)食量、每周及總食物利用率見(jiàn)表9和表10。

表6 霍山石斛對(duì)小鼠精子畸形類(lèi)型及比例的影響Table 6 Influence of Dendrobium huoshanense effects on mice sperm malformation type and proportion

表7 霍山石斛對(duì)大鼠體重的影響（±SD）Table 7 Influence of Dendrobium huoshanense effect on the body weight of rats（±SD）

表7 霍山石斛對(duì)大鼠體重的影響（±SD）Table 7 Influence of Dendrobium huoshanense effect on the body weight of rats（±SD）

性別劑量/（g/kg·bw）動(dòng)物數(shù)體重/gP初重 第7 d 第14 d 第21 d 第30 d雄0 10 79±3 145±7 217±9 290±20 369±14 6.0 10 79±3 145±7 221±11 297±20 383±22 0.244 13.0 10 79±3 143±5 217±12 292±23 372±21 0.950 20.0 10 79±3 137±11 211±13 288±19 369±18 1.000雌0 10 76±3 130±4 180±13 215±18 241±21 6.0 10 75±3 131±7 178±15 213±20 237±20 0.933 13.0 10 76±3 133±9 182±12 219±18 246±14 0.803 20.0 10 76±3 129±6 173±8 213±12 237±14 0.923

表8 霍山石斛各劑量組大鼠的增重（±SD）Table 8 Dendrobium huoshanense each dose group of rats weight（±SD）

表8 霍山石斛各劑量組大鼠的增重（±SD）Table 8 Dendrobium huoshanense each dose group of rats weight（±SD）

性別劑量/（g/kg·bw）動(dòng)物數(shù)增重/g總增重第1天～第7天 第8天～第14天 第15天～第21天 第22天～第30天雄0 10 66±5 72±3 73±15 78±8 290±13 6.0 10 66±5 76±6 76±10 86±8 304±20 13.0 10 65±4 73±7 76±13 80±5 294±20 20.0 10 58±11 75±11 77±10 81±6 290±16雌0 10 54±5 51±12 35±10 28±8 164±23 6.0 10 56±7 47±11 35±10 24±9 161±18 13.0 10 57±9 49±10 37±12 27±9 171±14 20.0 10 53±5 44±5 40±10 24±7 161±14

表9 霍山石斛各劑量組大鼠的攝食量（±SD）Table 9 Dendrobium huoshanense each dose group of rats Ingestion（±SD）

表9 霍山石斛各劑量組大鼠的攝食量（±SD）Table 9 Dendrobium huoshanense each dose group of rats Ingestion（±SD）

性別劑量/（g/kg·bw）動(dòng)物數(shù)第1天～第7天第8天～第14天第15天～第21天第22天～第30天雄0攝食量/g 總攝食量10 124±4 172±7 251±7 311±7 858±22 6.0 10 124±6 173±10 261±14 322±14 880±44 13.0 10 121±5 172±6 257±9 307±10 857±24 20.0 10 115±9 166±8 247±9 307±9 834±29雌0 10 110±5 151±11 183±14 243±14 686±39 6.0 10 111±6 145±12 177±11 237±11 670±36 13.0 10 111±6 149±8 192±8 252±8 704±26 20.0 10 108±5 142±5 176±8 235±7 661±18

表10 霍山石斛對(duì)大鼠食物利用率的影響（±SD）Table 10 Influence of Dendrobium huoshanense on rat food utilization rate（±SD）

表10 霍山石斛對(duì)大鼠食物利用率的影響（±SD）Table 10 Influence of Dendrobium huoshanense on rat food utilization rate（±SD）

性別劑量/（g/kg·bw）動(dòng)物數(shù)食物利用率/%P第1天～第7天 第8天～第14天 第15天～第21天 第22天～第30天 總利用率雄0 10 53.4±3.3 42.0±1.6 29.2±5.8 33.8±1.3 33.8±1.3 6.0 10 53.6±3.9 43.7±2.2 29.0±3.1 34.5±1.4 34.5±1.4 0.524 13.0 10 53.2±2.3 42.6±4.2 29.4±4.3 34.2±1.7 34.2±1.7 0.823 20.0 10 50.0±7.7 44.9±6.0 31.0±3.8 34.7±1.4 34.7±1.4 0.329雌0 10 48.8±2.8 33.5±5.7 19.1±5.0 23.9±2.3 23.9±2.3 6.0 10 50.2±5.6 32.1±6.8 19.7±5.1 24.1±2.1 24.1±2.1 0.998 13.0 10 51.4±6.9 33.1±7.1 19.5±6.1 24.2±1.9 24.2±1.9 0.979 20.0 10 49.4±4.8 31.0±3.6 22.9±5.6 24.4±2.4 24.4±2.4 0.935

表7和表8的結(jié)果顯示，各劑量組的大鼠在各個(gè)階段的體重與陰性對(duì)照相比均無(wú)明顯的差異，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表9和表10顯示，各劑量組動(dòng)物食物利用率與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

2.4.2 霍山石斛對(duì)大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響

經(jīng)口給予大鼠不同劑量的霍山石斛30 d后測(cè)定各劑量組大鼠血液紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白水平、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及其分類(lèi)等指標(biāo)，結(jié)果見(jiàn)表11。

由表11可見(jiàn)，霍山石斛的高、中、低劑量組各血液學(xué)指標(biāo)與陰性對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.4.3 霍山石斛對(duì)大鼠血液生化指標(biāo)的影響

經(jīng)口給予大鼠不同劑量的霍山石斛30天后測(cè)定各劑量組大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、總蛋白、白蛋白、總膽固醇、甘油三酯、尿素氮、肌酐及血糖的水平。結(jié)果顯示，霍山石斛的高、中、低劑量組各血液生化指標(biāo)與陰性對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），詳見(jiàn)表12。

2.4.4 霍山石斛對(duì)大鼠臟器重量及臟體比的影響

大鼠30天喂養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果表明，以6.0、13.0、20.0 g/kg·bw劑量霍山石斛給大鼠灌胃30 d，各劑量組雌雄大鼠的肝臟、腎臟、脾臟、睪丸、卵巢的重量及臟體比與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），結(jié)果見(jiàn)表13。

表11 霍山石斛對(duì)大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響（±SD）Table 11 Influence of Dendrobium huoshanense effect on rat hematology indexes（±SD）

表11 霍山石斛對(duì)大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響（±SD）Table 11 Influence of Dendrobium huoshanense effect on rat hematology indexes（±SD）

性別劑量/（g/kg·bw）動(dòng)物數(shù)白細(xì)胞計(jì)數(shù)（×109/L）嗜堿性細(xì)胞/%雄0 10 6.9±1.9 7.2±0.3 151±4 77.4±4.3 15.6±3.1 6.1±1.7 0.6±0.4 0.2±0.1紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（×1012/L）血紅蛋白/（g/L）淋巴細(xì)胞/%中性細(xì)胞/%單核細(xì)胞/%嗜酸性細(xì)胞/%6.0 10 8.7±1.6 7.1±0.3 149±4 80.5±3.0 13.2±2.9 5.7±2.1 0.4±0.2 0.2±0.1 13.0 10 8.3±1.3 7.1±0.3 148±5 79.3±6.1 14.9±5.0 5.9±2.5 0.7±0.5 0.3±0.2 20.0 10 6.7±0.9 7.4±0.3 152±5 76.8±3.5 15.6±3.3 6.7±2.2 0.7±0.6 0.3±0.2雌0 10 7.6±1.6 7.4±0.3 153±6 83.9±3.8 10.8±2.8 4.6±1.5 0.6±0.7 0.2±0.1 6.0 10 7.5±2.7 7.2±0.2 150±3 82.4±4.0 13.0±4.4 3.9±1.2 0.6±0.7 0.1±0.1 13.0 10 6.3±0.8 7.3±0.3 151±6 83.5±4.1 10.9±4.3 4.8±1.8 0.6±0.6 0.2±0.1 20.0 10 7.5±0.8 7.2±0.3 148±7 83.2±3.7 11.0±3.0 5.1±1.2 0.5±0.6 0.2±0.1

表12 霍山石斛對(duì)大鼠血液生化指標(biāo)的影響（±SD）Table 12 Influence of Dendrobium huoshanense on rat blood biochemical indicators（±SD）

表12 霍山石斛對(duì)大鼠血液生化指標(biāo)的影響（±SD）Table 12 Influence of Dendrobium huoshanense on rat blood biochemical indicators（±SD）

性別 劑量/血糖/（mmol/L）雄0 10 25±6 133±21 52.3±1.6 29.7±0.8 4.94±0.78 49±4 1.69±0.30 0.69±0.29 7.49±1.21 6.0 10 29±7 130±32 53.6±1.7 30.2±0.9 4.48±0.57 50±9 1.61±0.54 0.98±0.32 7.32±1.16 13.0 10 31±22 140 47 53.1±1.9 30.2±0.9 4.98±0.77 52±6 1.57±0.33 0.68±0.27 7.65±1.30 20.0 10 24±4 128 14 52.2±1.6 29.2±0.9 5.38±0.39 50±5 1.62±0.22 0.68±0.38 7.71±0.68雌0 10 24±7 107±21 58.5±1.8 33.2±1.5 6.66±1.27 58±9 1.99±0.30 0.50±0.27 7.11±0.95 6.0 10 23±4 102±9 59.3±2.2 33.4±1.2 6.93±1.70 56±7 2.07±0.36 0.39±0.11 7.31±0.79 13.0 10 20±3 101±17 59.1±2.3 34.1±1.4 6.26±0.82 57±6 2.11±0.28 0.55±0.23 7.16±0.94 20.0 10 20±3 100±13 59.6±3.4 34.2±2.2 7.13±1.21 61±7 1.95±0.24 0.46±0.21 7.41±1.27（g/kg·bw） 動(dòng)物數(shù) 谷丙轉(zhuǎn)氨酶/（U/L）谷草轉(zhuǎn)氨酶/（U/L）總蛋白/（g/L）白蛋白/（g/L）尿素氮/（mmol/L）肌酐/（μmol/L）總膽固醇/（mmol/L）甘油三酯/（mmol/L）

表13 霍山石斛對(duì)大鼠臟器重量及臟體比的影響Table 13 Influence of Dendrobium huoshanense on rat than the organ weight and dirty rat body

2.4.5 大體解剖及組織學(xué)檢查結(jié)果

30 d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，檢查對(duì)照組和各劑量組共80只大鼠，雌、雄各半。剖檢后肉眼觀(guān)察，心、肺、肝、脾、腎、胃、腸、翠丸（卵巢）等主要臟器的色澤、大小、形態(tài)結(jié)構(gòu)等均未見(jiàn)明顯異常。

3 討論

霍山石斛作為藥食同源藥材在最早的藥學(xué)專(zhuān)著《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有記載，在當(dāng)?shù)孛耖g更被當(dāng)做是救命良藥，有很長(zhǎng)的食用歷史；且現(xiàn)代研究表明，霍山石斛具有增強(qiáng)免疫力、清咽、明目、保肝、抗癌等多種功效，具目前研究最熱門(mén)的保健食品新原料之一。本文從外源性毒素和動(dòng)物毒理兩方面評(píng)價(jià)霍山石斛的安全性。為霍山石斛的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)提供安全性依據(jù)。

通過(guò)測(cè)定霍山石斛有機(jī)氯農(nóng)藥殘留和重金屬含量，確定原料的外源性毒素符合國(guó)家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)；依據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年版）中保健食品安全性毒理學(xué)檢測(cè)方法對(duì)霍山石斛進(jìn)行動(dòng)物安全性評(píng)價(jià)結(jié)果顯示：

1）霍山石斛的小鼠急性經(jīng)口MTD大于30g/kg·bw，屬無(wú)毒級(jí)。

2）霍山石斛的Ames試驗(yàn)結(jié)果為陰性。

3）霍山石斛小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)結(jié)果為陰性。

4）霍山石斛小鼠精子畸形試驗(yàn)結(jié)果為陰性。

5）霍山石斛30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果顯示受試動(dòng)物一般情況良好，各項(xiàng)指標(biāo)檢查均正常，從而說(shuō)明霍山石斛最大為觀(guān)察到有害作用劑量（NOAEL）為20.0 g/kg·bw。

上述結(jié)果表明，霍山石斛在本研究劑量范圍內(nèi)作為食品和保健食品原料是安全可靠的，非常廣闊的市場(chǎng)前景。

[1]崔田,馬洪怡.霍山石斛的研究概況[J].吉林中醫(yī)藥,2007,27(10):66-68

[2]林萍,畢志明,徐紅,等.石斛屬植物藥理活性研究進(jìn)展[J].中草藥,2003,34(11):19-22

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010版[S].一部.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2011

[4]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部,中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB/T 5009.19-2008食品中有機(jī)氯農(nóng)藥多組分殘留量的測(cè)定[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2008:1-3

[5]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部,中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB/T 5009.12-2010食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中鉛的測(cè)定[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2010:8-12

[6]衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)所,中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB/T 5009.11-2003食品中總砷及無(wú)機(jī)砷的測(cè)定[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2003:70-76

[7]衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)所,中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB/T 5009.17-2003食品中總汞及有機(jī)汞的測(cè)定[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2003:119-132

[8]衛(wèi)生部.保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范[M].北京:清華同方電子出版社,2003

[9]傅穎,梅松,劉冬英,等.鐵皮楓斗膠囊的毒性研究及安全性評(píng)價(jià)[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2010,20(11):2789-2790

[10]賓捷.金釵石解膠囊內(nèi)容物毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)研究[D].長(zhǎng)沙:公共衛(wèi)生學(xué)院,2010

[11]解國(guó)梁,王莉,尹幸念,等.骨蠣膠囊毒理學(xué)安全性實(shí)驗(yàn)研究[J].北方藥學(xué),2010,7(6):9-12

[12]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部,中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB 16740-1997保健(功能)食品通用標(biāo)準(zhǔn)[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,1997:516-520

[13]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部,中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB 2763-2005食品中農(nóng)藥最大殘留限量[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2005:15-27