針葉櫻桃提取物增強(qiáng)小鼠細(xì)胞與體液免疫功能

鐘義紅，孫杰，李世芬，胡奇，秦珩，張成香，王玉邦，*，周建偉

（1.南京醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，職業(yè)與環(huán)境衛(wèi)生學(xué)系，江蘇南京210029；2.南京醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，江蘇省醫(yī)藥農(nóng)藥獸藥安全性評(píng)價(jià)與研究中心，江蘇南京210029）

針葉櫻桃原產(chǎn)于西印度群島加勒比海地區(qū)，為黃褥花科（Malpighiaceae）黃褥花屬阿西羅拉種櫻桃（Malpighia glabra L.），也稱西印度櫻桃。針葉櫻桃果實(shí)的碳水化合物（35.7 mg/g～78 mg/g）、蛋白質(zhì)（2.1 mg/g～8 mg/g）與脂肪（2.3 mg/g～8 mg/g）含量相對較低，富含VC（6.32mg/g～46mg/g）、膳食纖維（30mg/g），VB6（87μg/g）、以及包括玉米黃質(zhì)（0.163 μg/g～0.565μg/g）、葉黃素（0.376μg/g～1.007μg/g）、α-胡蘿卜素（0.078 μg/g～0.593 μg/g）、β-胡蘿卜素（2.655 μg/g～16.694 μg/g）在內(nèi)的類胡蘿卜素成分[1-5]。由于針葉櫻桃果實(shí)是L-抗壞血酸（8 mg/g～40 mg/g）含量最高的天然資源之一[4，6]，而L-抗壞血酸是VC四種異構(gòu)體中生物活性最高的構(gòu)型，因此，針葉櫻桃凍干粉、果汁及其衍生產(chǎn)品一直在歐亞地區(qū)作為功能性食品銷售，具有很好的抗貧血、抗真菌、抗遺傳毒性與抗氧化活性，且其生物活性與果實(shí)中的L-抗壞血酸含量高低呈正相關(guān)[3，7]。

VC可以增強(qiáng)人類免疫功能，具有很強(qiáng)的抗氧化抗衰老能力，對預(yù)防癌癥的發(fā)生也具有一定作用[8]，目前，國內(nèi)已對針葉櫻桃干粉提取物的抗氧化活性進(jìn)行研究[9-10]，尚無對富含L-抗壞血酸的針葉櫻桃進(jìn)行免疫學(xué)研究的報(bào)道。本研究采用ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、NK活性細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)、抗體生成細(xì)胞檢測、小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)等多種免疫功能研究方法，探討了針葉櫻桃提取物對小鼠細(xì)胞免疫、體液免疫、小鼠巨噬細(xì)胞以及NK細(xì)胞活性的影響。

1 材料與方法

1.1 材料、動(dòng)物與試劑

針葉櫻桃提取物委托南京中科藥業(yè)有限公司制備提供，采用優(yōu)質(zhì)針葉櫻桃果實(shí)干粉，以純蒸水提取，經(jīng)兩次濃縮結(jié)晶純化，活性炭脫色法去除雜質(zhì)，噴霧干燥法制備，密封干燥儲(chǔ)存。所得針葉櫻桃果實(shí)提取物的VC含量≥150 mg/g，符合現(xiàn)有針葉櫻桃食品提取工藝技術(shù)文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)[10-11]，水分、灰分、菌落總數(shù)與重金屬含量均低于食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)規(guī)定。

SPF級(jí)BI/F1代健康雌性小鼠200只，體重19.0～21.9 g，購自上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（滬）2008-0016，合格證號(hào)：2008001632626。

2，4-二硝基氟苯（DNFB）：中國醫(yī)藥（集團(tuán)）上?；瘜W(xué)試劑公司；印度墨汁：北京篤信精細(xì)制劑廠；RPMI1640培養(yǎng)基：GIBCOTMInvitrogen Corporation公司；ConcanvalinA（ConA）：華美生物工程公司；噻唑藍(lán)（MTT）：韓國BIOSHARP公司；異丙醇：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。羊紅細(xì)胞（SRBC）、豚鼠血清、雞紅細(xì)胞為江蘇省醫(yī)藥農(nóng)藥獸藥安全性評(píng)價(jià)與研究中心自采制備，YAC-1細(xì)胞購自上海派通生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

T1000型電子天平：常熟市雙杰測試廠；Spectra Max M2e多功能酶標(biāo)儀：美國Molecular Devices公司；二氧化碳培養(yǎng)箱：美國Thermo Forma公司。

1.3 方法

1.3.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

小鼠按體重隨機(jī)分為 I、II、III、IV、V 5 個(gè)大組，每大組40只小鼠，每大組再分為4個(gè)劑量組，每個(gè)劑量組10只。I組小鼠進(jìn)行ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、NK細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)；II組小鼠進(jìn)行耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)；III組小鼠進(jìn)行抗體生成細(xì)胞檢測和半數(shù)溶血值HC50測定；IV組小鼠進(jìn)行小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)；V組小鼠進(jìn)行小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。

受試樣品的人體推薦劑量為0.70 g/人/日（以60 kg體重計(jì)），按照國標(biāo)相關(guān)規(guī)定[12]，以相當(dāng)于受試樣品人體推薦攝入量的5倍、10倍、30倍，設(shè)0.06、0.12、0.35 g/kg·bw/d3個(gè)劑量組，另以無菌水代替受試物設(shè)0 g/kg·bw/d組為陰性對照。各劑量組受試樣品及無菌水陰性對照每日1次經(jīng)口給予小鼠，灌胃量0.1 mL/10 g·bw，連續(xù)灌胃 30 d。

1.3.2 ConA誘導(dǎo)小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)

I組連續(xù)灌胃30 d后，頸椎脫臼法處死小鼠，無菌取脾并研磨為單細(xì)胞懸液，過200目篩，以無菌Hank's液洗滌兩次，1 000 r/min離心10 min收集細(xì)胞，使用RPMI1640完全培養(yǎng)液重懸為濃度3×106個(gè)/mL濃度的單細(xì)胞懸液，1 mL/孔接種于24孔培養(yǎng)板中，加入75 μL 100 μg/mL 的 ConA 液于 37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h，不加ConA液孔為對照。培養(yǎng)結(jié)束前4 h，每孔移除0.7 mL完全細(xì)胞培養(yǎng)液，加入0.7 mL不含小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液與50 μL 5 mg/mL的MTT，繼續(xù)培養(yǎng)4 h。培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入1 mL酸性異丙醇終止反應(yīng)，吹打混勻后移入96孔培養(yǎng)板中，每孔3個(gè)平行對照，酶標(biāo)儀于570 nm下測定各樣品光密度值。淋巴細(xì)胞增殖能力=加ConA的光密度值-不加ConA的光密度值。

1.3.3 NK細(xì)胞活性測定

試驗(yàn)方法1.3.2所制備無菌脾單細(xì)胞懸液，Hank's洗滌2次后，加入0.5 mL無菌水20秒裂解紅細(xì)胞，加入0.5 mL 2×Hank's及8 mL Hank's液1 000 r/min離心10 min，使用RPMI1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為2×107個(gè)/mL。取4×105個(gè)/mL濃度的YAC-1靶細(xì)胞與脾細(xì)胞各100 μL接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，以YAC-1細(xì)胞100 μL+培養(yǎng)液100 μL為YAC-1細(xì)胞自然釋放孔，以 YAC-1 細(xì)胞 100 μL+2.5%Triton 100 μL 為YAC-1細(xì)胞最大釋放孔，每個(gè)檢測樣品設(shè)三個(gè)平行孔，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 h。1 500 r/min離心96孔培養(yǎng)板5 min，每孔吸取100 μL上清，加入LDH基質(zhì)液100 μL反應(yīng)10 min，每孔加入1 mol/L的HCl 30 μL，于酶標(biāo)儀490nm處測定光密度值。NK細(xì)胞活性（%）=（反應(yīng)孔OD值-自然釋放孔OD值）×100/（最大釋放孔OD值-自然釋放孔OD值）。

1.3.4 DNFB誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（DTH）

II組連續(xù)灌胃30 d后，剃除小鼠腹部3×3 cm鼠毛，均勻涂抹50 μL 10 mg/mL DNFB溶液致敏。5 d后以10 μL 10 mg/mL DNFB溶液均勻涂抹于小鼠右耳兩面進(jìn)行攻擊，24 h后頸椎脫臼處死小鼠，剪下左右耳殼，以打孔器取下8 mm耳片稱重。DTH程度（mg）=右耳重（mg）-左耳重（mg）。

1.3.5 抗體生成細(xì)胞檢測試驗(yàn)

III組連續(xù)灌胃30 d后，每鼠腹腔注射2%的SRBC懸液0.2 mL進(jìn)行免疫，4 d后頸椎脫臼法處死小鼠，無菌取脾，按照1.3.2方法制備5×106個(gè)/mL脾細(xì)胞懸液。

將表層培養(yǎng)基與2×Hank's液1∶1混勻分裝為0.5 mL每管，加入50 μL以SA緩沖液配制的10%SRBC，20 μL新鮮制備的脾細(xì)胞懸液，混勻傾倒于已刷瓊脂糖薄層的玻片上，每個(gè)樣品做兩個(gè)平行片，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1.5 h，將新鮮豚鼠血清補(bǔ)體1∶8稀釋后加入玻片架凹槽內(nèi)，繼續(xù)孵育1.5 h后，計(jì)數(shù)溶血空斑數(shù)。

1.3.6 血清溶血素測定試驗(yàn)

試驗(yàn)方法1.3.4中III組小鼠腹腔注射SRBC懸液免疫4 d后，摘眼球法取血，全血靜置1 h，2 000 r/min離心10 min收集血清。血清200倍稀釋后，加入5%雞紅細(xì)胞懸液0.5 mL，0.5 mL補(bǔ)體，37℃溫育30 min，離心取上清1 mL加入3 mL都氏試劑中，靜置10 min后540 nm波長下測定樣品管及SRBC半數(shù)溶血時(shí)的光密度值。溶血素的量以半數(shù)溶血值（HC50）表示，HC50=（樣品光密度值/SRBC半數(shù)溶血時(shí)的光密度值）×稀釋倍數(shù)。

1.3.7 小鼠碳廓清試驗(yàn)

IV組小鼠連續(xù)灌胃30d后，每鼠按0.1mL/10g·bw尾靜脈注射4倍稀釋的印度墨汁，墨汁注入后立即計(jì)時(shí)。注射墨汁后2 min及10 min分別從眼內(nèi)眥靜脈叢取血20 μL，加入2 mL 0.1%Na2CO3溶液中，用酶標(biāo)儀在600 nm波長處測光密度值。吞噬指數(shù)=體重×K1/3/（肝重+脾重），K=（lgOD1-lgOD2）/（t2-t1）。

1.3.8 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)

V組小鼠連續(xù)灌胃30 d后，每鼠腹腔注射1 mL 20%雞紅細(xì)胞懸液，30 min后頸椎脫臼法處死小鼠，腹腔注入2 mL生理鹽水潤洗1 min，吸出腹腔洗液于37℃恒溫培養(yǎng)箱孵育30 min，于生理鹽水中漂洗晾干，1∶1丙酮-甲醇溶液固定，4%Giemsa=磷酸緩沖液染色3 min，蒸餾水漂洗晾干，封片，光鏡下觀察。吞噬百分率（%）=吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)×100/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)，吞噬指數(shù)=被吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)。

1.4 數(shù)據(jù)分析

各組實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)使用SPSS10.0軟件進(jìn)行分析，滿足方差齊性的數(shù)據(jù)使用單因素方差分析中多個(gè)試驗(yàn)組與一個(gè)對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理；對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)資料進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，滿足方差齊要求后進(jìn)行t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)處理，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

小鼠經(jīng)口給予不同劑量針葉櫻桃提取物30 d后，0.06、0.12、0.35 g/kg·bw/d 組小鼠平均終末體重及體重增長值與0 g/kg·bw/d組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。取小鼠胸腺與脾臟計(jì)算臟體比，結(jié)果可見（表1），0.06、0.12、0.35 g/kg·bw/d 組與 0 g/kg·bw/d 組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 針葉櫻桃提取物對小鼠胸腺、脾臟臟體比的影響（±SD）Table 1 Effects of Acerola cherry extracts on the ratio of mice thymus/spleen to body weight（±SD）

表1 針葉櫻桃提取物對小鼠胸腺、脾臟臟體比的影響（±SD）Table 1 Effects of Acerola cherry extracts on the ratio of mice thymus/spleen to body weight（±SD）

劑量/（g/kg·bw/d） 樣本數(shù)/n 胸腺/體重/% P值 脾臟/體重/% P值10 0.240±0.031 0.483±0.062 0.06 10 0.222±0.027 0.566 0.497±0.052 0.879 0.12 10 0.222±0.052 0.576 0.480±0.050 0.999 0.35 10 0.226±0.030 0.728 0.493±0.051 0.946 0

使用MTT法進(jìn)行ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)，結(jié)果證實(shí)（表2），0.35 g/kg·bw/d組加 ConA孔與不加ConA孔吸光度的差值高于0 g/kg·bw/d組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 針葉櫻桃提取物對小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響（±SD）Table 2 Effects of Acerola cherry extracts on lymphocyte transformation in mice（±SD）

表2 針葉櫻桃提取物對小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響（±SD）Table 2 Effects of Acerola cherry extracts on lymphocyte transformation in mice（±SD）

注：a，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著（P＜0.05）。

劑量/（g/kg·bw/d）樣本數(shù)/n淋巴細(xì)胞增殖能力P值0 10 0.015±0.007 0.06 10 0.015±0.009 1.000 0.12 10 0.017±0.009 0.914 0.35 10 0.026±0.007 0.011a

采用乳酸脫氫酶測定法進(jìn)行小鼠NK細(xì)胞活性測定，將NK細(xì)胞經(jīng)sin-1P1/2（P為NK細(xì)胞活性）轉(zhuǎn)化后進(jìn)行組間 t檢驗(yàn)比較，結(jié)果可見（表3），0.06、0.12、0.35 g/kg·bw/d組NK細(xì)胞活性與0 g/kg·bw/d組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表3 針葉櫻桃提取物對小鼠NK細(xì)胞活性的影響（±SD）Table 3 Effects of Acerola cherry extracts on NK cytoactive in mice（±SD）

表3 針葉櫻桃提取物對小鼠NK細(xì)胞活性的影響（±SD）Table 3 Effects of Acerola cherry extracts on NK cytoactive in mice（±SD）

劑量/（g/kg·bw/d）樣本數(shù)/nNK細(xì)胞活性/%P值0 10 20.6±4.4 0.06 10 19.1±7.0 0.936 0.12 10 23.3±14.9 0.930 0.35 10 25.9±6.4 0.409

使用耳腫脹法進(jìn)行DNFB誘導(dǎo)小鼠DTH試驗(yàn)，計(jì)算耳殼重量，結(jié)果可見（表4），0.35 g/kg·bw/d組耳殼增重高于 0 g/kg·bw/d組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表4 針葉櫻桃提取物對DNFB誘導(dǎo)小鼠DTH的影響（±SD）Table 4 Effects of Acerola cherry extracts on DTH induced by DNFB in mice（±SD）

表4 針葉櫻桃提取物對DNFB誘導(dǎo)小鼠DTH的影響（±SD）Table 4 Effects of Acerola cherry extracts on DTH induced by DNFB in mice（±SD）

注：a，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著（P＜0.05）。

劑量/（g/kg·bw/d）樣本數(shù)/nDTH程度/mgP值0 10 10.7±3.3 0.06 10 13.5±4.1 0.370 0.12 10 15.3±5.5 0.069 0.35 10 16.2±4.5 0.024a

采用Jerne改良玻片法進(jìn)行小鼠抗體生成細(xì)胞試驗(yàn)，計(jì)算溶血空斑數(shù)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果可見（表5），0.35 g/kg·bw/d組溶血空斑數(shù)高于0 g/kg·bw/d組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表5 針葉櫻桃提取物對小鼠溶血空斑數(shù)的影響（±SD）Table 5 Effect of Acerola cherry extracts on hemolytic plaque numbers in mice（±SD）

表5 針葉櫻桃提取物對小鼠溶血空斑數(shù)的影響（±SD）Table 5 Effect of Acerola cherry extracts on hemolytic plaque numbers in mice（±SD）

注：a，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著（P＜0.05）。

劑量/（g/kg·bw/d）樣本數(shù)/n溶血空斑數(shù)/（個(gè)/106脾細(xì)胞）P值0 10 41±19 0.06 10 57±18 0.215 0.12 10 56±23 0.260 0.35 10 66±22 0.027a

用半數(shù)溶血值法測定小鼠血清半數(shù)溶血值（HC50），由表 6結(jié)果可見，0.35 g/kg·bw/d組血清半數(shù)溶血值（HC50）高于0 g/kg·bw/d組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表6 針葉櫻桃提取物對小鼠HC50的影響（±SD）Table 6 Effects of Acerola cherry extracts on HC50in mice（±SD）

表6 針葉櫻桃提取物對小鼠HC50的影響（±SD）Table 6 Effects of Acerola cherry extracts on HC50in mice（±SD）

注：a，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著（P＜0.05）。

劑量/（g/kg·bw/d）樣本數(shù)/nHC50P值0 10 94±19 0.06 10 101±15 0.721 0.12 10 111±14 0.078 0.35 10 113±18 0.040a

小鼠碳廓清試驗(yàn)結(jié)果，由表7可見，0.06、0.12、0.35 g/kg·bw/d組小鼠吞噬指數(shù)與0 g/kg·bw/d組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表7 針葉櫻桃提取物對小鼠碳廓清能力的影響（±SD）Table 7 Effects of Acerola cherry extracts on carbon clearance ability in mice（±SD）

表7 針葉櫻桃提取物對小鼠碳廓清能力的影響（±SD）Table 7 Effects of Acerola cherry extracts on carbon clearance ability in mice（±SD）

劑量/（g/kg·bw/d）樣本數(shù)/n吞噬指數(shù)P值0 10 5.22±0.65 0.06 10 5.53±1.56 0.831 0.12 10 5.62±0.51 0.695 0.35 10 5.73±0.95 0.528

用半體內(nèi)法進(jìn)行小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)，計(jì)算吞噬指數(shù)及吞噬百分率，并將吞噬百分率經(jīng)sin-1P1/2（P為吞噬百分率）轉(zhuǎn)化后進(jìn)行組間t檢驗(yàn)比較，由表 8 結(jié)果可見，0.06、0.12、0.35 g/kg·bw/d 組小鼠吞噬百分率與吞噬指數(shù)與0 g/kg·bw/d組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表8 針葉櫻桃提取物對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞吞噬率及吞噬指數(shù)的影響（±SD）Table 8 Effects of Acerola cherry extracts on phagocytosis ratio and phagocytic count of mouse peritoneal macrophages（±SD）

表8 針葉櫻桃提取物對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞吞噬率及吞噬指數(shù)的影響（±SD）Table 8 Effects of Acerola cherry extracts on phagocytosis ratio and phagocytic count of mouse peritoneal macrophages（±SD）

/（g/kg·bw/d）樣本數(shù)/n吞噬百分率/% P值 吞噬指數(shù) P值劑量10 21.2±2.3 0.26±0.02 0.06 10 21.5±3.8 0.995 0.28±0.05 0.673 0.12 10 22.3±2.5 0.722 0.29±0.03 0.208 0.35 10 23.3±2.5 0.255 0.29±0.04 0.134 0

3 結(jié)論

針葉櫻桃提取物以 0.06、0.12、0.35 g/kg·bw/d 連續(xù)給樣一個(gè)月，沒有對小鼠的攝食、體重增長、主要免疫器官的臟體比產(chǎn)生影響（P＞0.05）。免疫功能研究結(jié)果顯示，在細(xì)胞免疫方面，0.35 g/kg·bw/d組與0 g/kg·bw/d組相比，在ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)與DNFB誘導(dǎo)的小鼠DTH實(shí)驗(yàn)中，針葉櫻桃提取物顯著增強(qiáng)小鼠的脾細(xì)胞免疫功能（P＜0.05）；在體液免疫功能方面，針葉櫻桃提取物的抗體生成細(xì)胞檢測實(shí)驗(yàn)與血清半數(shù)溶血值實(shí)驗(yàn)中，0.35 g/kg·bw/d組溶血空斑數(shù)與血清半數(shù)溶血值高于0 g/kg·bw/d組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而在單核-巨噬細(xì)胞功能與NK細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)中，0.06、0.12、0.35 g/kg·bw/d 組與 0 g/kg·bw/d組相比，吞噬指數(shù)、吞噬百分率以及NK細(xì)胞活性結(jié)果均未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。綜上所述，針葉櫻桃提取物可以有效增強(qiáng)小鼠的細(xì)胞與體液免疫功能，但在增強(qiáng)巨噬細(xì)胞與NK細(xì)胞活性方面，生物活性并不顯著。

[1]MEZADRI T,FERNANDEZ-PACHON M S,VILLANO D,et al.The acerola fruit:composition,productive characteristics and economic importance[J].Archivos Latinoamericanos de Nutricion,2006,56(2):101-109

[2]VENDRAMINI A L,TRUGO L C.Chemical composition of acerola fruit(Malpighia punicifolia L.)at three stages of maturity[J].Food Chemistry,2000,71(2):195-198

[3]MEZADRI T,VILLANO D,FERNANDEZ-PACHON M S,et al.Antioxidantcompounds and antioxidantactivity in acerola(Malpighia emarginata DC.)fruits and derivatives[J].Journal of Food Composition and Analysis,2008,21(4):282-290

[4]JOHNSON P D.Acerola(Malpighia glabra L.,M.punicifolia L.,M.emarginata D.C.):agriculture,production and nutrition[J].Plants in Human Health and Nutrition Policy,2003,91:67-75

[5]DE ROSSO V V,MERCADANTE A Z.Carotenoid composition of two Brazilian genotypes of acerola(Malpighia punicifolia L.)from two harvests[J].Food Research International,2005,38(8/9):1073-1077

[6]BADEJOA A A,JEONGB S T,GOTO-YAMAMOTOB N,et al.Cloning and expression of GDP-D-mannose pyrophosphorylase gene and ascorbic acid content of acerola(Malpighia glabra L.)fruit at ripening stages[J].Plant Physiology and Biochemistry,2007,45(9):665-672

[7]Nunes R S,Kahl V F S,Sarmento M S,et al.Antigenotoxicity and Antioxidant Activity of Acerola Fruit(Malpighia glabra L.)at Two Stages of Ripeness[J].Plant Foods Hum Nutr,2011,66(2):129-135

[8]曾翔云.維生素C的生理功能與膳食保障[J].中國食物與營養(yǎng),2005(4):52-54

[9]王領(lǐng),何聰芬,董銀卯,等.西印度櫻桃凍干粉水提取液抗氧化性的研究[J].香料香精化妝品,2009(6):14-16

[10]王領(lǐng),何聰芬,董銀卯,等.西印度櫻桃凍干粉提取液中VC穩(wěn)定性及美容功效初步研究[J].香料香精化妝品,2011(4):29-32

[11]陳政.西印度櫻桃果汁飲料工藝研究[J].食品工業(yè)科技,2007,28(7):137-138

[12]衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司.衛(wèi)生部關(guān)于印發(fā)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003年版)衛(wèi)生部文件[S].2003