異育銀鯽胚胎發(fā)育的觀察與不同溫度對其影響的研究

白小寧 張 荷

（1.鳳翔縣水利局 陜西 寶雞 721400）（2.貴陽市烏當(dāng)區(qū)畜牧技術(shù)服務(wù)中心 貴州 貴陽 550018）

異育銀鯽（Allogynogenetic silver Crucian Carp）是以黑龍江省方正縣雙風(fēng)水庫的天然雌核發(fā)育銀鯽（♀）與江西省興國縣產(chǎn)的紅鯉（♂）雜交，刺激卵子雌核發(fā)育產(chǎn)生的全雌性后代。這些后代由異源精子刺激銀鯽卵子雌核發(fā)育而來，并且有促進(jìn)生長等異精效應(yīng)，因而稱其為異育銀鯽。異育銀鯽自20世紀(jì)80年代初在全國開始推廣養(yǎng)殖后，目前已成為淡水養(yǎng)殖中的重要品種，其產(chǎn)量約占常規(guī)養(yǎng)殖魚類總產(chǎn)量的15℅以上，產(chǎn)值占常規(guī)養(yǎng)殖魚類總產(chǎn)值的75℅以上。水溫與魚類的生長和繁殖有著極密切的關(guān)系，本實驗通過觀察異育銀鯽胚胎發(fā)育各個階段的特征，以及不同溫度環(huán)境下對胚胎發(fā)育的影響，以期尋找最適的胚胎發(fā)育溫度，提高孵化率。

1 材料與方法

1.1 試驗的時間與地點

試驗于2014年3月份至8月份在陜西省安康市水產(chǎn)基地完成。

1.2 親魚的選擇與培育

選擇體質(zhì)健壯，體重在250g以上的異育銀鯽和興國紅鯉雄魚，分池培育，至各自性腺發(fā)育良好。即母本銀鯽腹部膨大柔軟卵巢輪廓明顯，生殖孔突出微紅，輕壓腹部時有少量卵粒流出；父本興國紅鯉選擇第二特征明顯，輕壓腹部時有乳白色精液流出的親魚。

1.3 實驗方法

1.3.1 試驗分組及親魚的繁殖

按不同溫度區(qū)域分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組，Ⅰ組溫度為13～17℃；Ⅱ組溫度為18～22℃；Ⅲ組溫度為23～25℃，每組試驗設(shè)置三個平行組，平均每組試驗約用親魚20kg、25尾左右，共用親魚60kg、80尾。對三組培育的親魚進(jìn)行繁殖試驗，繁殖均按常規(guī)技術(shù)進(jìn)行，一次性注射催產(chǎn)劑，自然授精，微流水孵化。觀察催產(chǎn)后親本發(fā)情時間及親本流產(chǎn)、順產(chǎn)、和難產(chǎn)情況；共進(jìn)行9次繁殖試驗。

1.3.2 胚胎發(fā)育觀察與記錄

親魚催產(chǎn)達(dá)到效應(yīng)時間后母本親魚產(chǎn)卵，同時父本親魚排精，精卵結(jié)合后黏附于事先鋪設(shè)魚巢上。胚胎發(fā)育期間繼續(xù)進(jìn)行微流水刺激，每隔2h測量并記錄催產(chǎn)池水溫。受精卵孵化期間，抽樣計算受精率，并定時抽取100個樣品進(jìn)行目測和鏡檢，觀察胚胎發(fā)育進(jìn)程并選擇典型時期的胚胎作圖并拍照記錄，計算孵化率。

1.4 實驗儀器與設(shè)施

催產(chǎn)劑：LRH-A2激素，PG激素，HCG激素；，連續(xù)變倍解剖鏡（XTZ-E）；顯微鏡（YSI.55.DISSOLVEO.OXYGEN Model#55112FT.SW:03A0858.AV）數(shù)碼攝象系統(tǒng)（Nikon E4500）。

2 結(jié)果

2.1 異育銀鯽胚胎發(fā)育期

異育銀鯽胚胎發(fā)育過程的分期及各期典型特征如下：

受精卵：卵質(zhì)分布較均勻，極性不明顯。（見圖1，正面觀。）

卵裂期：首先胚盤突起，原生質(zhì)集中于卵子的動物極而形成隆起的胚盤，同時受精膜與圍卵周隙形成。之后經(jīng)過多次分裂，將胚盤分成32個卵裂球。（見圖2，側(cè)面觀。）

囊胚期：胚盾經(jīng)多次卵裂，細(xì)胞越分越小，最后形成囊胚。胚盤處的細(xì)胞界線不清，高高隆起在植物極上，形成囊胚層。之后囊胚層逐漸變低，其表層細(xì)胞開始向卵黃部分下包。卵黃部位的植物極開始有節(jié)奏的變形運動，時而突出，時而凹陷，最后恢復(fù)為圓形，每一周期需60～90s。（見圖3，側(cè)面觀。）

原腸期：胚盤下包，胚盾明顯延長，卵黃部分變相運動十分明顯，卵黃部位的中間部分有時收縮而使卵黃分成兩部分，猶如分成兩葉，之后胚盤繼續(xù)下包至4/5，胚盾變狹窄，神經(jīng)板形成，胚體轉(zhuǎn)成側(cè)臥，卵黃部分變形運動仍十分明顯。最后胚盤完全包圍了卵黃部分，胚體開始形成，胚孔開始封閉，卵黃部位變形運動消逝，神經(jīng)板中線略下凹，脊索呈柱狀。（見圖4，正面觀。）

眼基出現(xiàn)期：胚體前端膨大形成腦部，在前腦兩側(cè)，出現(xiàn)一對橢圓形的突起，即眼的原基。體節(jié)出現(xiàn)四到五對，神經(jīng)板頭端隆起。之后圓錐狀尾部的邊緣生長出透明膜狀的鰭，胚體有十五到十六對肌節(jié)，眼囊清楚，中間出現(xiàn)凹陷，在腦后方兩側(cè)各形成一橢圓形淡色的耳囊。胚體肌肉開始微微收縮，眼囊中出現(xiàn)晶體且清晰為形，體節(jié)二十對左右。在耳囊下方出現(xiàn)鰓板，為長圓形隆起，尾與胚體長軸成銳角。在卵黃囊前端眼的下方出現(xiàn)一管狀心臟，心臟搏動由微弱至有力，心跳每分鐘可達(dá)35～58次。（見圖5，側(cè)面觀。）

出膜期：由于尾部不斷擺動和頭部孵化酶的作用，仔魚從尾部脫膜而出，肌節(jié)三十五對以上，卵黃囊大，形似梨狀。第一對鰓裂形成。（見圖6，側(cè)面觀。）

2.2 不同溫度對異育銀鯽催產(chǎn)和魚卵孵化的影響

2.2.1 適宜溫度范圍

從三個溫度區(qū)間的試驗結(jié)果可以看出，適宜的繁殖水溫為18～22℃之間，效應(yīng)時間14～16h，發(fā)情后2～4h產(chǎn)卵結(jié)束。催產(chǎn)率96.4%，平均絕對產(chǎn)卵量1.2萬粒，相對產(chǎn)卵量為4.62萬粒/kg。

2.2.2 低溫對催產(chǎn)和孵化的影響

Ⅰ組催產(chǎn)試驗，水溫一直在13～17℃，盡管催產(chǎn)藥物劑量加大30～50%，效應(yīng)時間仍達(dá)22～30h，產(chǎn)卵過程持續(xù)8～15h，催產(chǎn)率75.3%，平均絕對產(chǎn)卵量0.68萬粒，相對產(chǎn)卵量2.72萬粒/kg。魚卵受精率為72%，低于一般情況80%的受精率。孵化率為71%，分別比Ⅱ、Ⅲ兩組低20%和16%。

2.2.3 高溫對催產(chǎn)和孵化的影響

Ⅲ組催產(chǎn)試驗，水溫一直在22～27℃，效應(yīng)時間12～14h，產(chǎn)卵過程持續(xù)2～4h。催產(chǎn)率82.3%，平均絕對產(chǎn)卵量1.16萬粒，相對產(chǎn)卵量4.46萬粒/kg。受精率93%，孵化率87%，接近正常溫度的水平。

3 討論

在18～22℃這一溫度范圍內(nèi)異育銀鯽性腺發(fā)育正常且較為一致，雌魚產(chǎn)卵順利，極少發(fā)生難產(chǎn)，卵子受精率94%，孵化率91%。在13～17℃的低溫情況下不僅催產(chǎn)的效應(yīng)時間加長，雌魚卵巢發(fā)育進(jìn)程極不一致，導(dǎo)致產(chǎn)卵時間延遲8～15h，很大一部分應(yīng)發(fā)育到第Ⅴ期的卵子停留在Ⅳ末，致使產(chǎn)卵量只有正常溫度的一半，難產(chǎn)和流產(chǎn)親魚較多。

在13～17℃低溫催產(chǎn)條件下，受精率比較低是由部分魚卵不夠完全成熟導(dǎo)致。孵化率低的原因是，除觀察到胚胎發(fā)育過程夭折之外，還觀察到部分發(fā)育成魚苗，在卵膜中活動，若不用解剖針剖開卵膜，則始終不能破膜而出。一些研究魚類和兩棲類胚胎發(fā)育的專家認(rèn)為，這是由于低溫影響，胚體有一種孵化腺體不能分泌卵膜溶解酶而造成的[8]。低于適宜溫度下限，溫度影響較大，不僅影響產(chǎn)卵、受精和孵化，而且孵出的魚苗體質(zhì)較弱，抗病力較低。

在23～25℃的高溫下對催產(chǎn)影響不十分嚴(yán)重，主要表現(xiàn)在卵子發(fā)育時速加快，較易造成少數(shù)魚卵子過熟而難產(chǎn)，即由Ⅴ期轉(zhuǎn)化成Ⅳ期，或因拉網(wǎng)操作和人工授精不及時而流產(chǎn)，催產(chǎn)率和產(chǎn)卵率稍低于正常溫度。說明高于適宜溫度上限，溫度的影響不十分嚴(yán)重。

表1 不同水溫對異育銀鯽催產(chǎn)和孵化的影響

因此，人工催產(chǎn)應(yīng)掌握天氣變化規(guī)律，選擇好繁殖日期，防止寒流侵襲。據(jù)報道，在自然條件下，隨著溫度的變化，銀鯽的繁殖時間有所提前或推遲，一般在水溫17℃左右開始自然繁殖。一般認(rèn)為這是銀鯽開始繁殖的臨界溫度，但是在試驗過程中，我們發(fā)現(xiàn)異育銀鯽開始產(chǎn)卵的時間最早可在13～16℃。