新疆維、漢民族P450arom、ER-β在宮頸鱗癌及癌前病變中的表達(dá)研究

沈谷群， 袁建林， 程靜新， 張國慶, 熊廷川

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院婦外三科， 烏魯木齊 830011)

新疆是一個多民族聚集的地區(qū)，也是我國宮頸癌高發(fā)地區(qū)之一。在新疆宮頸癌高發(fā)區(qū)維吾爾族婦女宮頸癌的患病率為526/10萬，是北京市婦女宮頸癌患病率的210多倍[1]?？诜茉兴幍呐园l(fā)生子宮頸鱗癌的風(fēng)險增加[2-4]，而宮頸轉(zhuǎn)化區(qū)對雌激素較為敏感，提示雌激素與宮頸鱗癌的發(fā)生有一定的關(guān)聯(lián)，芳香化酶P450(aromatase P450 ，P450arom)與雌激素依賴的疾病相關(guān)。本研究通過對新疆維吾爾族(維族)、漢族等婦女宮頸鱗癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)及正常宮頸組織中P450arom和雌激素β受體(estrogen receptor β ，ER-β)的表達(dá)情況進(jìn)行分析，探討P450arom及ER-β在宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程中的作用，以及在新疆維、漢族間的表達(dá)是否存在差異。

1 對象與方法

1.1研究對象收集2012年6月-2013年6月在新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院就診的宮頸鱗癌(宮頸鱗癌組)、CIN(CIN組)及正常宮頸組織(對照組)的石蠟標(biāo)本180例，3組標(biāo)本各60例，其中每組標(biāo)本維、漢族各30例。研究對象均為初次治療、非化療及放療后的患者，對照組則除外惡性腫瘤及與雌激素相關(guān)的疾患。

1.2方法采用免疫組織化學(xué)法(SP法)，嚴(yán)格按照試劑盒說明操作，判定標(biāo)準(zhǔn)：每張切片隨機(jī)計(jì)數(shù)5～10個高倍視野的1 000個細(xì)胞中陽性細(xì)胞所占百分比。按其數(shù)量及顯色強(qiáng)度分為3級：表達(dá)弱陽性(+)，即陽性細(xì)胞數(shù)<25%，顯色強(qiáng)度為淡黃色或僅個別細(xì)胞呈棕黃色；表達(dá)強(qiáng)陽性(+++), 即陽性細(xì)胞數(shù)>75%，多數(shù)細(xì)胞呈黃或棕黃色；表達(dá)中度陽性(++)，即陽性細(xì)胞數(shù)及顯色強(qiáng)度介于弱陽性和強(qiáng)陽性之間；若陽性細(xì)胞少，但著色較顯色強(qiáng)度上背景無明顯差別者為陰性(-)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)行χ2檢驗(yàn)及秩和檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

在高倍顯微鏡下觀察細(xì)胞著色，可見P450arom表達(dá)陽性表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)染為淡黃色或棕黃色或褐黃色(圖1、2)。ER-β陽性表達(dá)表現(xiàn)為細(xì)胞核呈棕褐色，鱗狀上皮和宮頸的腺體、間質(zhì)中均見陽性細(xì)胞，以腺體及鱗狀上皮旁基底層較多，間質(zhì)中散在(圖3、4)。

CIN的標(biāo)本因多數(shù)為活檢小標(biāo)本，在制片后有部分切片中無上皮組織；同時制片過程中出現(xiàn)掉片現(xiàn)象。故P450arom的標(biāo)本中，宮頸鱗癌60例，維、漢族各30例；CIN 50例，維、漢組各25例；正常宮頸組織56例，維族27例，漢族29例；ER-β的標(biāo)本中，宮頸鱗癌59例，維族29例，漢族30例；CIN 51例，維族25例，漢族26例；正常宮頸組織57例，維族28例，漢族29例。

圖1 P450arom在宮頸鱗癌組織中陽性表達(dá)(SP×400)

圖2 P450arom 在CIN 組織中陽性表達(dá)(SP×200)

圖3 ER-β在宮頸鱗癌組織中陽性表達(dá)(SP×400)

圖4 ER-β在CIN組織中陽性表達(dá)(SP ×400)

2.1P450arom及ER-β在宮頸鱗癌、CIN、正常宮頸組織中的表達(dá)P450arom在對照組陽性表達(dá)率為17.9%(10/56)低于宮頸鱗癌組的55.0%(33/60)及CIN組的48.0%(24/50)，3組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001)。ER-β在對照組陽性表達(dá)率為57.9%(33/57)，CIN組為37.3%(19/51)，宮頸鱗癌組為15.3%(9/59)，隨著宮頸病變程度的增加，其表達(dá)呈遞減的趨勢(P=0.000),見表1。

2.2P450arom和ER-β在3組維、族不同宮頸組織中的表達(dá)比較P450arom和ER-β在維吾爾族及漢族女性宮頸組織中表達(dá)無差異，見表2。

表1 P450arom和ER-β在不同宮頸組織中的表達(dá)

表2 P450arom和ER-β在3組維、漢民族的不同宮頸組織中表達(dá)比較

3 討論

P450arom 是細(xì)胞色素P450的一種，在生物體內(nèi)廣泛分布，是雌激素合成中關(guān)鍵的限速酶，局部組織微環(huán)境中的高雌激素水平，是發(fā)生雌激素依賴性腫瘤的重要原因。目前研究發(fā)現(xiàn)[5-7]，芳香化酶與乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌及子宮內(nèi)膜異位癥等雌激素依賴性疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。腫瘤上皮細(xì)胞可通過自分泌的方式，分泌芳香化酶而合成雌激素，其周圍間質(zhì)細(xì)胞通過增加合成或釋放生長因子以旁分泌方式產(chǎn)生雌激素，從而促進(jìn)腫瘤的生長。宮頸轉(zhuǎn)化區(qū)是激素依賴性組織，是HPV 感染和宮頸癌的好發(fā)部位，35%宮頸癌組織中有P450arom的表達(dá)。正常子宮頸組織中P450arom的表達(dá)活性低，但是宮頸炎時，尤其是HPV感染時，局部組織中產(chǎn)生較高的前列腺素E2，誘導(dǎo)并激活P450arom的表達(dá)，增加雌激素的產(chǎn)生；而雌激素本身又能刺激環(huán)氧化酶，并通過環(huán)氧化酶激活，促進(jìn)了子宮局部前列腺素E2的形成。這種正反饋循環(huán)可能在促進(jìn)宮頸癌形成與發(fā)展的過程中起到重要作用。本研究表明P450arom在宮頸鱗癌組及CIN組中的表達(dá)顯著高于對照組(P=0.001)，而CIN組與宮頸鱗癌組的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.765)，提示其可能在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮了一定的作用。

雌激素發(fā)揮生理效應(yīng)的物質(zhì)基礎(chǔ)是雌激素受體。雌激素與受體結(jié)合后，導(dǎo)致多種細(xì)胞水平的變化。宮頸為性激素的靶器官，Au等[8]研究顯示，增加與腫瘤生長相關(guān)的雌激素受體、芳香化酶和Cycline D1的表達(dá)，可促進(jìn)宮頸腫瘤的生長。正常宮頸上皮中ER的表達(dá)為100%，隨著病變程度的增加，其表達(dá)率及表達(dá)強(qiáng)度逐漸降低,在宮頸癌組表達(dá)最低[9-10]。Dillner等[11]通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)阻斷宮頸癌細(xì)胞中雌激素受體通路，從而阻斷雌激素的功能，引起細(xì)胞大范圍的變化，如HPVE6與E7 mRNA的減少、細(xì)胞集落形態(tài)學(xué)被打亂、細(xì)胞繁殖中斷、宮頸癌細(xì)胞的凋亡等。這些研究表明，宮頸癌細(xì)胞的生長可能與局部雌激素受體相關(guān)。在一項(xiàng)HPV陽性的宮頸癌的體外實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)，宮頸癌的發(fā)生與P450arom的增高及ER-β的增高相關(guān)，且表達(dá)高水平ER的婦女更易獲得宮頸的HPV感染[12]。

本研究顯示，ER-β的表達(dá)程度在正常宮頸、CIN、宮頸鱗癌組織中依次降低，根據(jù)ER-β的表達(dá)在乳腺癌的研究，其降低甚至缺失可能起到類似腫瘤抑制基因的作用，ER-β的表達(dá)可能是腫瘤預(yù)后良好的標(biāo)志[13]。因此認(rèn)為在宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程中，ER-β表達(dá)降低可能會促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生。

新疆是一個多民族聚集的地區(qū)，由維吾爾族、漢族、哈薩克族等13個主要民族組成，維吾爾族婦女宮頸癌的患病率明顯高于其他民族，在新疆南部維吾爾族HPV各亞型的分布及頻率體現(xiàn)了維吾爾族HPV感染類型的獨(dú)特性[14]，推測維吾爾族與漢族宮頸鱗癌的發(fā)生機(jī)制可能有不同，但本研究未發(fā)現(xiàn)P450arom及ER-β表達(dá)在維、漢族患者間的差異，也可能與病例數(shù)少有關(guān)。

綜上所述，宮頸局部組織中的芳香化酶P450表達(dá)增高和雌激素β受體表達(dá)降低，可能在促進(jìn)宮頸鱗癌發(fā)生發(fā)展的過程中起到作用，但在新疆維、漢族宮頸鱗癌中的表達(dá)無差別。

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