體內(nèi)D酸性氨基酸分析的自動二維手性高效液相色譜法的建立及應用

韓海等

摘 要 D酸性氨基酸的生理功能和疾病標志物作用已逐漸成為代謝組學和創(chuàng)新藥物開發(fā)的研究熱點，本研究利用硅膠基質(zhì)ODS整體柱為第一維分離色譜柱，乙腈三氟醋酸

1 引 言

2 實驗部分

2.1 儀器與試劑

References

1 Fujii N. Orig. Life Evol. Biosph.， 2002， 32（2）： 103-127

2 Aniello A D. Brain Res. Rev.， 2007， 53（2）： 215-234

3 Dudel J. Eur. J. Neurosci.， 2004， 20（1）： 161-166

4 Ptzold R， Schieber A， Brückner H. Biomed. Chromatogr.， 2005， 19（6）： 466-473

5 Han H， Miyoshi Y， Ueno K， Okamura C， Tojo Y， Mita M， Lindner W， Zaitsu K， Hamase K. J. Chromatogr. B， 2011， 879（29）： 3196-3202

6 LU Xin， LU Jie， LIU ChengWei， ZHAO ShuLin. Chinese J. Anal Chem.， 2007， 35（8）： 1151-1154.

盧 昕， 盧 潔， 劉承偉， 趙書林. 分析化學， 2007， 35（8）： 1151-1154

7 Tsesarskaia M， Galindo E； Szokan G. Biomed. Chromatogr.， 2009， 23（6） ：581-587

8 Morikawa A， Hamase K， Inoue T， Konno R， Niwa A， Zaitsu K. J. Chromatogr. B， 2001， 757（1）： 119-125

9 SHEN HanXi， YANG GuoSheng， GAO RuYu，WANG QinSun. Chem. J. Chinese Universities， 1995， 16（7）： 1072-1074

沈含熙， 楊國生， 高如瑜， 王琴孫. 高等學?；瘜W學報， 1995， 29（7）： 1072-1074

10 Song Y， Feng Y， LeBlanc MH， Zhao SL， Liu YM. Anal. Chem.， 2006， 78（23）： 8121-8128

11 Huang Y， Shi M， Zhao SL. J. Sep. Sci.， 2009， 32（17）： 3001-3006

12 Thorsen G， Bergquist J. J. Chromatogr. B， 2000， 745（2） ： 389-397

13 Fujii N， Kaji Y， Fujii N. J Chromatogr B， 2011， 879（29）： 3141-3147

14 Toichi E， Hanada K， Hosokawa T， Higuchi K， Hosokawa M， Imamura S， Hosono M. Mech. Ageing. Dev.， 1997， 99（3）： 199-217

Establishment and Application of an Automated Chiral Two

dimensional High Performance Liquid Chromatography

for Bioanalysis of DAcidic Amino Acids

HAN Hai*， WANG QiQin， WU HuiHui， WANG Huan

（College of Pharmacy， Jinan University， Guangzhou 510632， China）

Abstract The physiological and biomarker function of Dacidic amino acids is now becoming the hot topic on metabolomics study and new drug discovery. A fully automated twodimensional high performance liquid chromatography （2DHPLC） system was established by using monolithic ODS column as the first dimension column， acetonitriletrifluoro acetic acidwater （9∶0.05∶92， V/V） as the mobile phase； micro Chiralpak QD1AX column as the enantiomer separation column， 10 mmol/L citric acid in methanolacetonitrile （50∶50， V/V） as the mobile phase for the second dimension， 4fluoro7nitro2，1，3benzoxadiazole （NBDF） as the fluorometrical derivative reagent. The separation efficiency （Rs>2.5）， determination sensitivity （LOD=1 fmol） of acidic amino acids enantiomers were higher than those of existing methods， and an online confirmation of the enantiomers amounts was also achieved using this system. The recoveries were around 97104%， RSD values for intraday and interday precision were less than 5% for the acidic amino acids enantiomers in the biological samples. Furthermore， by analyzing the aging model senescence accelerated mouse prone 1 （SAMP1） mice which have low immunocompetence， the amounts of Daspartic acid in thymus and spleen were determined as （206±18） and （264±21） nmol/g， respectively. It is the first time that an obvious trend of the increasement of Daspartic acid （p<0.01） was observed in thymus and spleen of SAMP1 mice compare to senescence accelerated mouse resistant 1 （SAMR1） mice.

Keywords DAcidic amino acids； Enantiomers； Fullautomated； Twodimensional high performance liquid chromatography； Senescence accelerated mouse prone 1

（Received 3 January 2014； accepted 6 March 2014）

This work was supported by the National Natural Science Foundation of China （No. 81202499）

摘 要 D酸性氨基酸的生理功能和疾病標志物作用已逐漸成為代謝組學和創(chuàng)新藥物開發(fā)的研究熱點，本研究利用硅膠基質(zhì)ODS整體柱為第一維分離色譜柱，乙腈三氟醋酸

1 引 言

2 實驗部分

2.1 儀器與試劑

References

1 Fujii N. Orig. Life Evol. Biosph.， 2002， 32（2）： 103-127

2 Aniello A D. Brain Res. Rev.， 2007， 53（2）： 215-234

3 Dudel J. Eur. J. Neurosci.， 2004， 20（1）： 161-166

4 Ptzold R， Schieber A， Brückner H. Biomed. Chromatogr.， 2005， 19（6）： 466-473

5 Han H， Miyoshi Y， Ueno K， Okamura C， Tojo Y， Mita M， Lindner W， Zaitsu K， Hamase K. J. Chromatogr. B， 2011， 879（29）： 3196-3202

6 LU Xin， LU Jie， LIU ChengWei， ZHAO ShuLin. Chinese J. Anal Chem.， 2007， 35（8）： 1151-1154.

盧 昕， 盧 潔， 劉承偉， 趙書林. 分析化學， 2007， 35（8）： 1151-1154

7 Tsesarskaia M， Galindo E； Szokan G. Biomed. Chromatogr.， 2009， 23（6） ：581-587

8 Morikawa A， Hamase K， Inoue T， Konno R， Niwa A， Zaitsu K. J. Chromatogr. B， 2001， 757（1）： 119-125

9 SHEN HanXi， YANG GuoSheng， GAO RuYu，WANG QinSun. Chem. J. Chinese Universities， 1995， 16（7）： 1072-1074

沈含熙， 楊國生， 高如瑜， 王琴孫. 高等學校化學學報， 1995， 29（7）： 1072-1074

10 Song Y， Feng Y， LeBlanc MH， Zhao SL， Liu YM. Anal. Chem.， 2006， 78（23）： 8121-8128

11 Huang Y， Shi M， Zhao SL. J. Sep. Sci.， 2009， 32（17）： 3001-3006

12 Thorsen G， Bergquist J. J. Chromatogr. B， 2000， 745（2） ： 389-397

13 Fujii N， Kaji Y， Fujii N. J Chromatogr B， 2011， 879（29）： 3141-3147

14 Toichi E， Hanada K， Hosokawa T， Higuchi K， Hosokawa M， Imamura S， Hosono M. Mech. Ageing. Dev.， 1997， 99（3）： 199-217

Establishment and Application of an Automated Chiral Two

dimensional High Performance Liquid Chromatography

for Bioanalysis of DAcidic Amino Acids

HAN Hai*， WANG QiQin， WU HuiHui， WANG Huan

（College of Pharmacy， Jinan University， Guangzhou 510632， China）

Abstract The physiological and biomarker function of Dacidic amino acids is now becoming the hot topic on metabolomics study and new drug discovery. A fully automated twodimensional high performance liquid chromatography （2DHPLC） system was established by using monolithic ODS column as the first dimension column， acetonitriletrifluoro acetic acidwater （9∶0.05∶92， V/V） as the mobile phase； micro Chiralpak QD1AX column as the enantiomer separation column， 10 mmol/L citric acid in methanolacetonitrile （50∶50， V/V） as the mobile phase for the second dimension， 4fluoro7nitro2，1，3benzoxadiazole （NBDF） as the fluorometrical derivative reagent. The separation efficiency （Rs>2.5）， determination sensitivity （LOD=1 fmol） of acidic amino acids enantiomers were higher than those of existing methods， and an online confirmation of the enantiomers amounts was also achieved using this system. The recoveries were around 97104%， RSD values for intraday and interday precision were less than 5% for the acidic amino acids enantiomers in the biological samples. Furthermore， by analyzing the aging model senescence accelerated mouse prone 1 （SAMP1） mice which have low immunocompetence， the amounts of Daspartic acid in thymus and spleen were determined as （206±18） and （264±21） nmol/g， respectively. It is the first time that an obvious trend of the increasement of Daspartic acid （p<0.01） was observed in thymus and spleen of SAMP1 mice compare to senescence accelerated mouse resistant 1 （SAMR1） mice.

Keywords DAcidic amino acids； Enantiomers； Fullautomated； Twodimensional high performance liquid chromatography； Senescence accelerated mouse prone 1

（Received 3 January 2014； accepted 6 March 2014）

This work was supported by the National Natural Science Foundation of China （No. 81202499）

摘 要 D酸性氨基酸的生理功能和疾病標志物作用已逐漸成為代謝組學和創(chuàng)新藥物開發(fā)的研究熱點，本研究利用硅膠基質(zhì)ODS整體柱為第一維分離色譜柱，乙腈三氟醋酸

1 引 言

2 實驗部分

2.1 儀器與試劑

References

1 Fujii N. Orig. Life Evol. Biosph.， 2002， 32（2）： 103-127

2 Aniello A D. Brain Res. Rev.， 2007， 53（2）： 215-234

3 Dudel J. Eur. J. Neurosci.， 2004， 20（1）： 161-166

4 Ptzold R， Schieber A， Brückner H. Biomed. Chromatogr.， 2005， 19（6）： 466-473

5 Han H， Miyoshi Y， Ueno K， Okamura C， Tojo Y， Mita M， Lindner W， Zaitsu K， Hamase K. J. Chromatogr. B， 2011， 879（29）： 3196-3202

6 LU Xin， LU Jie， LIU ChengWei， ZHAO ShuLin. Chinese J. Anal Chem.， 2007， 35（8）： 1151-1154.

盧 昕， 盧 潔， 劉承偉， 趙書林. 分析化學， 2007， 35（8）： 1151-1154

7 Tsesarskaia M， Galindo E； Szokan G. Biomed. Chromatogr.， 2009， 23（6） ：581-587

8 Morikawa A， Hamase K， Inoue T， Konno R， Niwa A， Zaitsu K. J. Chromatogr. B， 2001， 757（1）： 119-125

9 SHEN HanXi， YANG GuoSheng， GAO RuYu，WANG QinSun. Chem. J. Chinese Universities， 1995， 16（7）： 1072-1074

沈含熙， 楊國生， 高如瑜， 王琴孫. 高等學校化學學報， 1995， 29（7）： 1072-1074

10 Song Y， Feng Y， LeBlanc MH， Zhao SL， Liu YM. Anal. Chem.， 2006， 78（23）： 8121-8128

11 Huang Y， Shi M， Zhao SL. J. Sep. Sci.， 2009， 32（17）： 3001-3006

12 Thorsen G， Bergquist J. J. Chromatogr. B， 2000， 745（2） ： 389-397

13 Fujii N， Kaji Y， Fujii N. J Chromatogr B， 2011， 879（29）： 3141-3147

14 Toichi E， Hanada K， Hosokawa T， Higuchi K， Hosokawa M， Imamura S， Hosono M. Mech. Ageing. Dev.， 1997， 99（3）： 199-217

Establishment and Application of an Automated Chiral Two

dimensional High Performance Liquid Chromatography

for Bioanalysis of DAcidic Amino Acids

HAN Hai*， WANG QiQin， WU HuiHui， WANG Huan

（College of Pharmacy， Jinan University， Guangzhou 510632， China）

Abstract The physiological and biomarker function of Dacidic amino acids is now becoming the hot topic on metabolomics study and new drug discovery. A fully automated twodimensional high performance liquid chromatography （2DHPLC） system was established by using monolithic ODS column as the first dimension column， acetonitriletrifluoro acetic acidwater （9∶0.05∶92， V/V） as the mobile phase； micro Chiralpak QD1AX column as the enantiomer separation column， 10 mmol/L citric acid in methanolacetonitrile （50∶50， V/V） as the mobile phase for the second dimension， 4fluoro7nitro2，1，3benzoxadiazole （NBDF） as the fluorometrical derivative reagent. The separation efficiency （Rs>2.5）， determination sensitivity （LOD=1 fmol） of acidic amino acids enantiomers were higher than those of existing methods， and an online confirmation of the enantiomers amounts was also achieved using this system. The recoveries were around 97104%， RSD values for intraday and interday precision were less than 5% for the acidic amino acids enantiomers in the biological samples. Furthermore， by analyzing the aging model senescence accelerated mouse prone 1 （SAMP1） mice which have low immunocompetence， the amounts of Daspartic acid in thymus and spleen were determined as （206±18） and （264±21） nmol/g， respectively. It is the first time that an obvious trend of the increasement of Daspartic acid （p<0.01） was observed in thymus and spleen of SAMP1 mice compare to senescence accelerated mouse resistant 1 （SAMR1） mice.

Keywords DAcidic amino acids； Enantiomers； Fullautomated； Twodimensional high performance liquid chromatography； Senescence accelerated mouse prone 1

（Received 3 January 2014； accepted 6 March 2014）

This work was supported by the National Natural Science Foundation of China （No. 81202499）