• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    在線(xiàn)測(cè)量發(fā)酵液葡萄糖濃度的過(guò)濾取樣探頭的研制

    2014-07-10 21:51:05薛吉星等
    分析化學(xué) 2014年6期
    關(guān)鍵詞:葡萄糖

    薛吉星等

    摘 要 設(shè)計(jì)了一種罐內(nèi)快速過(guò)濾取樣探頭,以解決在線(xiàn)測(cè)量發(fā)酵參數(shù)過(guò)程中的發(fā)酵液連續(xù)取樣問(wèn)題。此探頭由支撐體、旋塞閥、O型圈、過(guò)濾膜管、管蓋組成,可以直接插入發(fā)酵罐內(nèi),能夠承受發(fā)酵前期的滅菌高溫,并能避免取樣時(shí)雜菌入侵發(fā)酵液。過(guò)濾膜采用筒狀陶瓷膜,罐內(nèi)發(fā)酵液經(jīng)錯(cuò)流過(guò)濾,可由蠕動(dòng)泵抽取適量無(wú)菌的滲透液給分析儀。利用此裝置對(duì)葡萄糖溶液進(jìn)行了取樣測(cè)試,結(jié)果表明,此裝置適用于發(fā)酵液在線(xiàn)取樣,取樣速率為

    關(guān)鍵詞 發(fā)酵過(guò)程; 在線(xiàn)測(cè)量; 取樣探頭; 葡萄糖

    1 引 言

    為實(shí)現(xiàn)發(fā)酵過(guò)程的優(yōu)化和控制,開(kāi)發(fā)適用于該過(guò)程的新型傳感器和在線(xiàn)檢測(cè)技術(shù)十分關(guān)鍵[1]。例如,葡萄糖生物傳感器是實(shí)現(xiàn)發(fā)酵液中葡萄糖濃度實(shí)時(shí)在線(xiàn)檢測(cè)的主要手段。生物傳感器工作時(shí)需要有生物活性物質(zhì)的參與,這些活性物質(zhì)不能經(jīng)受高溫滅菌等無(wú)菌化處理。因此,如果沒(méi)有特殊裝置,生物傳感器不能直接連接反應(yīng)器進(jìn)行發(fā)酵液的在線(xiàn)測(cè)量,這是限制生物傳感器在線(xiàn)應(yīng)用的主要技術(shù)障礙。目前,葡萄糖濃度檢測(cè)主要采用離線(xiàn)方式,實(shí)現(xiàn)在線(xiàn)測(cè)定或聯(lián)機(jī)測(cè)定主要有兩種技術(shù)手段:原位測(cè)定和引流測(cè)定。原位測(cè)定將酶電極直接插入生物反應(yīng)器,其優(yōu)點(diǎn)是無(wú)時(shí)間延遲,無(wú)樣品損耗,儀器成本低,但傳感器極易受發(fā)酵液理化因素干擾[2],而且固定化酶無(wú)法經(jīng)受高溫滅菌。引流測(cè)定技術(shù)是目前研究的熱點(diǎn)。

    近20年來(lái),已有多人設(shè)計(jì)過(guò)發(fā)酵液在線(xiàn)引流取樣裝置,并嘗試進(jìn)行在線(xiàn)檢測(cè),都存在一些問(wèn)題。如張先恩等[3]設(shè)計(jì)了盤(pán)式膜透析分離取樣裝置,采用醋酸纖維素濾膜透析法,由于受到透析膜兩邊壓差、液體停留時(shí)間、溫度等因素影響,不利于在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)用。同樣是透析原理的TRACE Analytics GmbH生產(chǎn)的透析探頭要穩(wěn)定一些,但仍然存在類(lèi)似問(wèn)題。 van de Merbel在做在線(xiàn)檢測(cè)發(fā)酵液的嘗試時(shí),采用發(fā)酵罐外過(guò)濾取樣系統(tǒng)[4],其需要多路回流,系統(tǒng)復(fù)雜,且在發(fā)酵罐外,不利于滅菌。楊海麟等[5]研制一套生物反應(yīng)過(guò)程在線(xiàn)檢測(cè)系統(tǒng),其取樣裝置采用膜過(guò)濾,其取樣速率過(guò)低(小于1 mL/min),若分析儀對(duì)樣品量要求較高,則不易滿(mǎn)足;與其類(lèi)似的還有Flownamics公司開(kāi)發(fā)的FISP系列取樣探頭和TRACE Analytics GmbH生產(chǎn)的過(guò)濾探頭,兩者價(jià)格昂貴,取樣速率亦過(guò)低。本研究組設(shè)計(jì)了一種透析取樣裝置,并用于發(fā)酵過(guò)程葡萄糖在線(xiàn)檢測(cè)系統(tǒng)[6],實(shí)驗(yàn)過(guò)程中亦發(fā)現(xiàn)葡萄糖通透性受溫度、壓差等因素干擾,不利于實(shí)際測(cè)量。

    本研究設(shè)計(jì)了一種結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,牢固耐用的陶瓷膜取樣探頭,用此探頭進(jìn)行了發(fā)酵液的取樣測(cè)試,并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析。

    2 實(shí)驗(yàn)部分

    2.1 過(guò)濾取樣裝置的設(shè)計(jì)

    2.1.1 工作原理 引流測(cè)定是在發(fā)酵過(guò)程中將少許發(fā)酵液引出發(fā)酵罐,在罐外用酶電極、色譜法或光譜法等[7]進(jìn)行測(cè)定。如果葡萄糖分析儀采用生物傳感器,則生物傳感器不需要放在發(fā)酵罐內(nèi),避免了高溫滅菌對(duì)生物傳感器的破壞。為了防止在發(fā)酵過(guò)程中發(fā)酵液染菌,需要有膜隔離措施。常見(jiàn)的取樣方法有透析法、過(guò)濾法、電萃取法、膜萃取法等[8],其中只有前兩種比較適用于發(fā)酵過(guò)程。透析取樣是將發(fā)酵液中的葡萄糖分子通過(guò)透析膜擴(kuò)散入存有緩沖液的擴(kuò)散池內(nèi),然后將擴(kuò)散池內(nèi)含有葡萄糖的緩沖液引流出發(fā)酵罐進(jìn)行測(cè)試。透析取樣的透過(guò)率受透析膜兩邊壓差、緩沖液停留時(shí)間、溫度等因素影響[3,4],難以確定葡萄糖在得到的樣品中的稀釋程度,不利于準(zhǔn)確測(cè)量。過(guò)濾取樣,采用錯(cuò)流過(guò)濾技術(shù),利用膜件實(shí)現(xiàn)發(fā)酵液與細(xì)胞的分離,同時(shí)將分離后的液體樣品引出發(fā)酵罐進(jìn)行分析檢測(cè)。

    2.2.2 裝置結(jié)構(gòu) 設(shè)計(jì)的用于發(fā)酵過(guò)程在線(xiàn)檢測(cè)的發(fā)酵液快速過(guò)濾取樣裝置包括支撐體、旋塞閥、O型圈、過(guò)濾膜管、管蓋,其中支撐體和管蓋用螺紋結(jié)構(gòu)連接,兩者共同固定了過(guò)濾膜管,零件間采用密封膠密封;旋塞閥通過(guò)卡套連接支撐體的出液口,O型圈卡在支撐體相應(yīng)的O型圈溝槽中。其結(jié)構(gòu)如圖1所示。支撐體采用不銹鋼制作,可直接安裝在發(fā)酵罐上,其與發(fā)酵罐之間由O型圈密封。支撐體中心有導(dǎo)流孔,濾出液可以由此流出該裝置,經(jīng)過(guò)旋塞閥進(jìn)入測(cè)量分析儀器。使用時(shí),先將支撐體固定在發(fā)酵罐上,然后連接旋塞閥。過(guò)濾膜管為圓管狀,套在支撐體較細(xì)一端的圓柱體外,兩者之間存在薄的縫隙。工作時(shí),發(fā)酵液在過(guò)濾膜管的外邊流動(dòng),經(jīng)錯(cuò)流過(guò)濾滲透進(jìn)縫隙中,然后流入支撐體中心的導(dǎo)流孔。過(guò)濾膜管可采用耐高溫、孔徑0.1~0.2 μm的陶瓷膜材料,發(fā)酵液經(jīng)過(guò)過(guò)濾膜管的過(guò)濾,分離出了罐內(nèi)微生物和固體顆粒,但過(guò)濾液和發(fā)酵液中葡萄糖、無(wú)機(jī)鹽等物質(zhì)的濃度是一致的。同時(shí),過(guò)濾膜管也阻斷了發(fā)酵罐外部的細(xì)菌等微生物通過(guò)取樣口進(jìn)入發(fā)酵罐里的發(fā)酵液中,達(dá)到防止染菌的目的。管蓋采用不銹鋼制作,通過(guò)螺紋連接支撐體。使用本裝置時(shí),可以安裝在發(fā)酵罐上,取樣口直接連接分析儀器的進(jìn)樣口(儀器內(nèi)有泵裝置),取樣速率由分析儀控制,也可以進(jìn)行離線(xiàn)取樣。取樣裝置僅有5個(gè)零部件,其中支撐體和管蓋的結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,易于加工和批量化生產(chǎn),其余零件均為標(biāo)準(zhǔn)件或可以直接購(gòu)買(mǎi)選取,且價(jià)格低廉。因此裝置整體結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,易于裝配和批量化生產(chǎn),制作成本低。過(guò)濾膜管卡在支撐體與管蓋之間,又有密封膠粘緊密封,這樣的結(jié)構(gòu)確保裝置整體牢固。過(guò)濾膜管可采用陶瓷膜,密封膠可采用耐高溫的環(huán)氧樹(shù)脂結(jié)構(gòu)膠,選材能夠方便地達(dá)到耐高溫、耐腐蝕的要求,可以經(jīng)受高溫高壓滅菌。過(guò)濾膜管套在支撐體外,過(guò)濾的有效面積較大,保證了在同樣壓力下,可以達(dá)到較高的取樣速度,當(dāng)要求一定的取樣速率時(shí),由分析儀根據(jù)需要調(diào)節(jié)蠕動(dòng)泵即可。采用的過(guò)濾膜可以有效防止取樣時(shí)染菌,目前陶瓷膜孔徑可低于0.1 μm。

    2.2 材料與儀器

    由山東省科學(xué)院生物研究所SBA系列分析儀專(zhuān)用緩沖劑添加蒸餾水配制的檢測(cè)用緩沖液。由市售分析純葡萄糖配制并在室溫下靜置6 h的葡萄糖溶液。工業(yè)現(xiàn)場(chǎng)大腸桿菌發(fā)酵液樣品,在發(fā)酵期間臨時(shí)采集并水浴滅活。

    OEMBJ6001型蠕動(dòng)泵(保定蘭格恒流泵有限公司)。過(guò)濾取樣裝置由本實(shí)驗(yàn)組設(shè)計(jì)加工,過(guò)濾膜管采用凈易CM011775型濾芯(廣州凈易環(huán)??萍加邢薰荆?,支撐體和管蓋由不銹鋼加工,O型圈等零件為標(biāo)準(zhǔn)件,密封膠采用7102型耐高溫環(huán)氧樹(shù)脂結(jié)構(gòu)膠,引流管采用特氟龍材料。SBA40E葡萄糖生物傳感分析儀(山東省科學(xué)院生物研究所)。

    3 結(jié)果與討論

    3.1 取樣速率測(cè)試

    分析儀對(duì)樣品的取樣量有限定,在單位時(shí)間內(nèi)通過(guò)該裝置獲取的樣品量即為取樣速率。取樣速率與濾膜的通透性和液體的粘度、濃度及膜兩邊的壓差等有關(guān)。在測(cè)試取樣速率時(shí),分別選用發(fā)酵液和不同濃度的葡萄糖溶液在不同的蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速下測(cè)試裝配取樣探頭時(shí)的取樣速率

    3.4 過(guò)濾取樣裝置的特點(diǎn)

    從取樣速率測(cè)試的結(jié)果可知,蠕動(dòng)泵在不同轉(zhuǎn)速時(shí),取樣速率會(huì)隨之線(xiàn)性變化,無(wú)論是否連接取樣探頭,或是改變葡萄糖溶液的濃度,其影響都不大??梢哉J(rèn)為在蠕動(dòng)泵的不同轉(zhuǎn)速條件下,取樣探頭對(duì)不同濃度的葡萄糖溶液的阻礙作用均不明顯。這樣可根據(jù)需要調(diào)節(jié)蠕動(dòng)泵的轉(zhuǎn)速來(lái)控制檢測(cè)時(shí)的取樣速率。傳統(tǒng)透析取樣的透過(guò)率受葡萄糖濃度、溫度、停留時(shí)間等影響很大[8],本裝置的葡萄糖透過(guò)率基本為100%,對(duì)測(cè)試的誤差的貢獻(xiàn)幾乎為零。在對(duì)隨機(jī)選取的發(fā)酵液進(jìn)行取樣測(cè)試時(shí),雖然發(fā)酵液的組分、濃度和雜質(zhì)含量較葡萄糖溶液復(fù)雜得多,但其測(cè)試結(jié)果與葡萄糖溶液測(cè)試結(jié)果十分相似,因此可以認(rèn)為短期內(nèi)取樣速率和透過(guò)率幾乎不受溶液的組分、濃度和雜質(zhì)狀況的干擾。

    在線(xiàn)引流測(cè)定,無(wú)論是透析取樣還是過(guò)濾取樣都會(huì)增加額外的時(shí)延,這主要是由于增加了管路,液體從發(fā)酵罐到儀器之間需要傳送時(shí)間,而透析取樣方法還需要額外的透析停留時(shí)間,以保證葡萄糖的通過(guò)率。0~1.5 min所測(cè)的結(jié)果一直為零,這段時(shí)間是引流管造成的新樣本傳送時(shí)間。3~4 min所測(cè)的結(jié)果已經(jīng)接近實(shí)際值,之所以還略小于實(shí)際值,是由于在陶瓷膜管和支撐體之間所留的空間過(guò)大,一部分空間內(nèi)殘存微量的上一時(shí)刻的液體稀釋了當(dāng)前溶液,減小陶瓷膜管和支撐體之間所留的空間,可以使這段時(shí)間縮短。不考慮引流管造成的傳送時(shí)間,則取樣探頭的延時(shí)為2 min(第1.5 min到第3.5 min)。

    由于裝置所用材料均是耐高溫材料,在蒸氣滅菌環(huán)節(jié)不會(huì)被破壞。陶瓷膜的孔徑為0.1 μm,絕大多數(shù)細(xì)菌的直徑在0.5~5.0 μm之間,因此裝置能夠阻斷罐內(nèi)和罐外的菌體來(lái)往,即使在發(fā)生故障出現(xiàn)液體逆流,外界細(xì)菌也無(wú)法侵入發(fā)酵罐。探頭外有大量的流動(dòng)發(fā)酵液不斷沖洗過(guò)濾膜,并且蠕動(dòng)泵所帶來(lái)的壓差并不大,故濃度極化層的影響很小,可以忽略,在一定程度上避免了濾膜的阻塞。

    本研究設(shè)計(jì)的快速過(guò)濾取樣裝置能很好地應(yīng)用于酶注射式葡萄糖生物傳感分析儀及其它類(lèi)型的在線(xiàn)發(fā)酵液分析儀器,具有結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,成本低廉,取樣速度快,取樣時(shí)無(wú)需太大壓差的特點(diǎn)。此裝置取樣速率較大,并可根據(jù)需要調(diào)節(jié),葡萄糖透過(guò)率一直穩(wěn)定在100%,時(shí)間延遲約2 min,解決了染菌等問(wèn)題,適于在發(fā)酵過(guò)程在線(xiàn)監(jiān)控中應(yīng)用。

    References

    1 SHI ZhongPing, PAN Feng. Fermentation Process Analysis, Control and Detection Technology (Edith 2) . Beijing Chemical Industry Press, 2010: 5

    史仲平, 潘 豐. 發(fā)酵過(guò)程解析、控制與檢測(cè)技術(shù)(第二版). 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2010: 5

    2 ZHANG XianEn. Biosensor, Beijing: Chemical Industry Press, 2006: 327

    張先恩. 生物傳感器,北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2006: 327

    3 ZHANG XianEn, HU WeiPing, ZHAO GuoQiang, ZHANG ZhiPing, ZHANG XiaoMei, GUI YiQun, ZHANG Xing, WEI HongPing. Chinese Journal of Biotechnology, 1993, 9(3): 210-215

    張先恩, 胡偉平, 趙國(guó)強(qiáng), 張治平, 張曉梅, 桂益群, 張 興, 危宏平. 生物工程學(xué)報(bào), 1993, 9(3): 210-215

    4 van de Merbel N C. Trends in Analytical Chemistry, 1997, 16(3): 162-173

    5 YANG HaiLin, L XiaFu, WANG LongGang, YANG ShengLi, WANG Wu. Journal of Wuxi University of Light Industry, 2003, 22(1): 33-42

    楊海麟, 呂霞付, 王龍剛, 楊勝利, 王 武. 無(wú)錫輕工大學(xué)學(xué)報(bào), 2003, 22(1): 33-42

    6 GAO XueJin, LIU GuangSheng, CHENG Li, GENG LingXiao, XUE JiXing, JIA ZhiYang, QI YongSheng, WANG Pu. Chinese J. Anal. Chem., 2012, 40(12): 1945-1949

    高學(xué)金, 劉廣生, 程 麗, 耿凌霄, 薛吉星, 賈之陽(yáng), 齊詠生, 王 普. 分析化學(xué), 2012, 40(12): 1945-1949

    7 Selin U R, Acar S E, Hakki B I, Ali T. Food Chemistry, 2013, 141(4): 4333-4343

    8 van de Merbel N C. J. Chromatogr., 1999, 856(12): 55-82

    A Rapid Filtration Sampling Probe for Fermentation

    Broth Online Measurement

    GAO XueJin*, XUE JiXing, ZHANG Peng, WANG Pu

    (School of Electronic Information and Control Engineering, Beijing University of Technology, Beijing 100124, China)

    Abstract An innerbioreactor rapid filtration sampling probe was designed to resolve the problems of continuous sampling the fermentation broth in online measurement the fermentation process. The probe consists of a support, a plug valve, an Oring, a filter membrane and a pipe cover. It can be inserted directly into the bioreactor withstanding hightemperature sterilization before fermentation, or preventing the bacteria's invasion during sampling. Fermentation broth in tank is crossflow filtrated by a cylindrical ceramic membrane which is used as filtration membrane, and then the sterile permeated liquid is transported to the analyzer by a peristaltic pump. The sampling experiments using this device was described for sampling glucose solution indicating it is suitable for fermentation online sampling. The sampling rate is up to 3.0 mL/min, glucose permeability maintains 100%, and the delay time caused by the probe is about 2 min.

    Keywords Fermentation process; Online measurement; Sampling probe; Glucose.

    (Received 10 December 2013; accepted 28 February 2014)

    This work was supported by the National Natural Science Foundation of China (No.61174109)

    GAO XueJin*, XUE JiXing, ZHANG Peng, WANG Pu

    (School of Electronic Information and Control Engineering, Beijing University of Technology, Beijing 100124, China)

    Abstract An innerbioreactor rapid filtration sampling probe was designed to resolve the problems of continuous sampling the fermentation broth in online measurement the fermentation process. The probe consists of a support, a plug valve, an Oring, a filter membrane and a pipe cover. It can be inserted directly into the bioreactor withstanding hightemperature sterilization before fermentation, or preventing the bacteria's invasion during sampling. Fermentation broth in tank is crossflow filtrated by a cylindrical ceramic membrane which is used as filtration membrane, and then the sterile permeated liquid is transported to the analyzer by a peristaltic pump. The sampling experiments using this device was described for sampling glucose solution indicating it is suitable for fermentation online sampling. The sampling rate is up to 3.0 mL/min, glucose permeability maintains 100%, and the delay time caused by the probe is about 2 min.

    Keywords Fermentation process; Online measurement; Sampling probe; Glucose.

    (Received 10 December 2013; accepted 28 February 2014)

    This work was supported by the National Natural Science Foundation of China (No.61174109)

    GAO XueJin*, XUE JiXing, ZHANG Peng, WANG Pu

    (School of Electronic Information and Control Engineering, Beijing University of Technology, Beijing 100124, China)

    Abstract An innerbioreactor rapid filtration sampling probe was designed to resolve the problems of continuous sampling the fermentation broth in online measurement the fermentation process. The probe consists of a support, a plug valve, an Oring, a filter membrane and a pipe cover. It can be inserted directly into the bioreactor withstanding hightemperature sterilization before fermentation, or preventing the bacteria's invasion during sampling. Fermentation broth in tank is crossflow filtrated by a cylindrical ceramic membrane which is used as filtration membrane, and then the sterile permeated liquid is transported to the analyzer by a peristaltic pump. The sampling experiments using this device was described for sampling glucose solution indicating it is suitable for fermentation online sampling. The sampling rate is up to 3.0 mL/min, glucose permeability maintains 100%, and the delay time caused by the probe is about 2 min.

    Keywords Fermentation process; Online measurement; Sampling probe; Glucose.

    (Received 10 December 2013; accepted 28 February 2014)

    This work was supported by the National Natural Science Foundation of China (No.61174109)

    猜你喜歡
    葡萄糖
    葡萄糖漫反射三級(jí)近紅外光譜研究
    糖耐量試驗(yàn)對(duì)葡萄糖用量的要求
    葡萄糖對(duì)Lactobacillus casei KDL22發(fā)酵及貯藏性能的影響
    維藥恰瑪古硫代葡萄糖苷的提取純化工藝及其抗腫瘤作用
    中成藥(2016年8期)2016-05-17 06:08:36
    妊娠期糖耐量試驗(yàn)口服葡萄糖用量的分析
    葡萄糖酸鈉發(fā)酵廢棄菌絲體提取殼聚糖的研究
    18~F-脫氧葡萄糖PET/CT在胰腺占位診斷與分期中的價(jià)值
    多發(fā)性肺硬化性血管瘤18~F-脫氧葡萄糖PET/CT顯像1例
    藍(lán)刺頭及藍(lán)紅膠囊中芹菜素-7-O-葡萄糖苷的測(cè)定
    中成藥(2014年9期)2014-02-28 22:28:53
    血清學(xué)試驗(yàn)聯(lián)合葡萄糖檢測(cè)在污染菌判斷中的應(yīng)用
    久久97久久精品| 校园人妻丝袜中文字幕| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 下体分泌物呈黄色| av在线app专区| 99re6热这里在线精品视频| 国产成人精品无人区| 精品久久久久久电影网| 免费观看无遮挡的男女| 纯流量卡能插随身wifi吗| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚洲精品亚洲一区二区| 大码成人一级视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 久久久久久久久久久丰满| 日本黄色日本黄色录像| 精华霜和精华液先用哪个| 欧美另类一区| 99热全是精品| 久久久久久久久久成人| 深夜a级毛片| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 久久久久网色| 高清毛片免费看| 国产探花极品一区二区| av在线观看视频网站免费| 午夜久久久在线观看| 国产亚洲精品久久久com| 乱人伦中国视频| 日本黄色日本黄色录像| 一区二区av电影网| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲欧洲国产日韩| 嫩草影院入口| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产伦理片在线播放av一区| 在线观看免费日韩欧美大片 | 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产精品伦人一区二区| 99国产精品免费福利视频| 久久久午夜欧美精品| 有码 亚洲区| 日本欧美国产在线视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 色5月婷婷丁香| 日韩一本色道免费dvd| 日韩中文字幕视频在线看片| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 91精品国产九色| 亚洲第一av免费看| 中文字幕制服av| 99热这里只有是精品50| 国产精品熟女久久久久浪| 9色porny在线观看| 黄色怎么调成土黄色| 2021少妇久久久久久久久久久| av一本久久久久| av天堂久久9| 日本爱情动作片www.在线观看| 熟妇人妻不卡中文字幕| 亚洲不卡免费看| 人妻 亚洲 视频| 亚洲中文av在线| 亚洲电影在线观看av| 欧美bdsm另类| 两个人的视频大全免费| 久久久午夜欧美精品| 久久久久精品久久久久真实原创| 日本欧美国产在线视频| 我要看黄色一级片免费的| 水蜜桃什么品种好| 国产精品久久久久久久久免| 欧美97在线视频| 一级片'在线观看视频| 久久精品久久精品一区二区三区| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 久久久久国产网址| 精品国产乱码久久久久久小说| 久久精品久久精品一区二区三区| 日本黄大片高清| 国产熟女午夜一区二区三区 | 黄色毛片三级朝国网站 | 亚洲精品乱久久久久久| 精品人妻熟女av久视频| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | freevideosex欧美| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲人成网站在线播| 成人免费观看视频高清| 国产男人的电影天堂91| 久久久久精品性色| 两个人免费观看高清视频 | 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产一区有黄有色的免费视频| 国产有黄有色有爽视频| 日韩制服骚丝袜av| 精品乱码久久久久久99久播| 欧美日韩黄片免| 国产成人欧美| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产日韩欧美在线精品| av线在线观看网站| 日韩免费高清中文字幕av| 久久久久网色| 亚洲精品国产av成人精品| 99国产精品一区二区三区| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久久久精品人妻al黑| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲熟女毛片儿| 午夜福利,免费看| 69av精品久久久久久 | 免费在线观看日本一区| av天堂在线播放| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 少妇的丰满在线观看| 精品少妇久久久久久888优播| 婷婷色av中文字幕| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产黄频视频在线观看| 热re99久久国产66热| 国产亚洲一区二区精品| 啦啦啦 在线观看视频| 精品国产乱码久久久久久小说| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 老汉色∧v一级毛片| 国产高清视频在线播放一区 | 欧美午夜高清在线| 老司机亚洲免费影院| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 99国产精品一区二区三区| 亚洲三区欧美一区| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲中文日韩欧美视频| 精品一区在线观看国产| 久久香蕉激情| 日韩人妻精品一区2区三区| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产成人精品在线电影| 成人免费观看视频高清| 亚洲av电影在线进入| 精品一区二区三卡| 美女视频免费永久观看网站| 国产精品久久久久久精品电影小说| 免费在线观看日本一区| 丰满少妇做爰视频| 一级毛片女人18水好多| 日本vs欧美在线观看视频| 男人操女人黄网站| 老司机影院毛片| av在线老鸭窝| h视频一区二区三区| 91成年电影在线观看| 欧美在线一区亚洲| 亚洲性夜色夜夜综合| 视频在线观看一区二区三区| 国产免费福利视频在线观看| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 亚洲欧美激情在线| 搡老熟女国产l中国老女人| 精品国内亚洲2022精品成人 | 一级毛片女人18水好多| 久久ye,这里只有精品| 中文字幕最新亚洲高清| 国精品久久久久久国模美| av电影中文网址| 免费日韩欧美在线观看| 国产精品免费视频内射| 久久久久久久大尺度免费视频| 久久人人97超碰香蕉20202| 久久精品国产a三级三级三级| 亚洲欧美色中文字幕在线| 国产av一区二区精品久久| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 国产免费现黄频在线看| 亚洲七黄色美女视频| 国产成人影院久久av| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| av福利片在线| 国产男人的电影天堂91| svipshipincom国产片| 精品国产乱子伦一区二区三区 | 国产在线视频一区二区| 中文字幕人妻丝袜制服| 在线看a的网站| 大型av网站在线播放| 亚洲美女黄色视频免费看| 精品久久久久久电影网| 国产高清videossex| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 婷婷丁香在线五月| 搡老乐熟女国产| av电影中文网址| 热99re8久久精品国产| 精品国产乱码久久久久久小说| 国产97色在线日韩免费| 日韩中文字幕视频在线看片| 两个人看的免费小视频| a级毛片黄视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产亚洲精品第一综合不卡| 午夜福利视频在线观看免费| 久久国产精品大桥未久av| 一进一出抽搐动态| 久久 成人 亚洲| 久久久久久人人人人人| 在线精品无人区一区二区三| 国产精品偷伦视频观看了| 伦理电影免费视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 午夜福利在线观看吧| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 一本久久精品| 精品亚洲成国产av| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 一区二区三区四区激情视频| 美女国产高潮福利片在线看| 免费黄频网站在线观看国产| 午夜福利免费观看在线| 中文欧美无线码| 婷婷丁香在线五月| 老司机深夜福利视频在线观看 | 欧美日韩一级在线毛片| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 咕卡用的链子| videos熟女内射| 99国产综合亚洲精品| 最新在线观看一区二区三区| 午夜精品久久久久久毛片777| 淫妇啪啪啪对白视频 | 日韩,欧美,国产一区二区三区| 成人手机av| 国产99久久九九免费精品| 91字幕亚洲| 大香蕉久久网| 一本色道久久久久久精品综合| 一区二区三区激情视频| 99国产精品一区二区蜜桃av | 一本色道久久久久久精品综合| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 中文字幕人妻丝袜制服| 在线观看免费高清a一片| 国产av一区二区精品久久| 99久久精品国产亚洲精品| 亚洲三区欧美一区| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 人妻人人澡人人爽人人| 女人久久www免费人成看片| 亚洲欧洲日产国产| 国产一区有黄有色的免费视频| 免费人妻精品一区二区三区视频| 下体分泌物呈黄色| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 9色porny在线观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 亚洲精品国产精品久久久不卡| 狂野欧美激情性xxxx| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 久久久久久久久久久久大奶| 国精品久久久久久国模美| 欧美变态另类bdsm刘玥| 老司机福利观看| 婷婷成人精品国产| 中国美女看黄片| 搡老熟女国产l中国老女人| 99精品欧美一区二区三区四区| 老司机午夜福利在线观看视频 | 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| av电影中文网址| 日韩三级视频一区二区三区| 久久综合国产亚洲精品| 日韩欧美一区视频在线观看| 操出白浆在线播放| 悠悠久久av| 天天操日日干夜夜撸| 天堂8中文在线网| avwww免费| 黄色片一级片一级黄色片| 国产精品一二三区在线看| 永久免费av网站大全| 亚洲av片天天在线观看| 五月开心婷婷网| 黑人欧美特级aaaaaa片| 一区二区日韩欧美中文字幕| 精品国产乱子伦一区二区三区 | 久久99热这里只频精品6学生| 久久亚洲精品不卡| 老司机福利观看| av在线app专区| 精品熟女少妇八av免费久了| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产成人精品无人区| 9191精品国产免费久久| 国产在线视频一区二区| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 日本五十路高清| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产亚洲一区二区精品| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 色老头精品视频在线观看| 国产男女超爽视频在线观看| 一级毛片精品| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 青春草亚洲视频在线观看| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产色视频综合| 久久精品国产综合久久久| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 国产成人啪精品午夜网站| 飞空精品影院首页| 中文欧美无线码| 久久久久国产精品人妻一区二区| 啪啪无遮挡十八禁网站| 美女国产高潮福利片在线看| 国产成人精品无人区| 午夜福利影视在线免费观看| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 男女床上黄色一级片免费看| 久久国产精品人妻蜜桃| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 午夜精品国产一区二区电影| 日本a在线网址| 精品少妇内射三级| 啦啦啦免费观看视频1| 99精品久久久久人妻精品| 又紧又爽又黄一区二区| 色精品久久人妻99蜜桃| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 天天添夜夜摸| 色视频在线一区二区三区| 在线永久观看黄色视频| 国产亚洲欧美精品永久| 在线观看人妻少妇| 99热网站在线观看| 99国产极品粉嫩在线观看| 精品国产乱码久久久久久小说| 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲七黄色美女视频| 一本大道久久a久久精品| 91成年电影在线观看| 国产成人免费无遮挡视频| 国产精品二区激情视频| 天堂8中文在线网| 男女无遮挡免费网站观看| 成年女人毛片免费观看观看9 | 免费av中文字幕在线| 国产又爽黄色视频| 2018国产大陆天天弄谢| 波多野结衣av一区二区av| 99热网站在线观看| 新久久久久国产一级毛片| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 欧美+亚洲+日韩+国产| 久久精品亚洲av国产电影网| 丰满饥渴人妻一区二区三| 男女之事视频高清在线观看| 国产在视频线精品| 国产亚洲精品久久久久5区| 99九九在线精品视频| videosex国产| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 亚洲av电影在线进入| 精品高清国产在线一区| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲精品国产色婷婷电影| 人妻 亚洲 视频| 精品欧美一区二区三区在线| 在线观看一区二区三区激情| 老司机福利观看| av线在线观看网站| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 久久久久久免费高清国产稀缺| 日本a在线网址| 高清欧美精品videossex| 黄频高清免费视频| 老司机影院成人| 在线看a的网站| 成年人午夜在线观看视频| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产免费一区二区三区四区乱码| 午夜福利免费观看在线| 亚洲av成人一区二区三| 岛国毛片在线播放| 国产精品一区二区免费欧美 | 色播在线永久视频| 91av网站免费观看| 下体分泌物呈黄色| 一级,二级,三级黄色视频| 黄色视频在线播放观看不卡| 交换朋友夫妻互换小说| 国产精品免费视频内射| 中文欧美无线码| 国产精品久久久久久精品古装| 青草久久国产| 亚洲精品国产av蜜桃| 国产色视频综合| 丝袜在线中文字幕| 99香蕉大伊视频| 亚洲精品在线美女| 国产极品粉嫩免费观看在线| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 老熟女久久久| 精品国产一区二区久久| 亚洲专区中文字幕在线| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产日韩欧美在线精品| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产又色又爽无遮挡免| 久久热在线av| 国产一区二区三区综合在线观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 久久人妻熟女aⅴ| 不卡av一区二区三区| 亚洲av日韩在线播放| 成年人午夜在线观看视频| av超薄肉色丝袜交足视频| 又紧又爽又黄一区二区| 波多野结衣一区麻豆| 欧美 日韩 精品 国产| bbb黄色大片| 成人国产一区最新在线观看| 国产麻豆69| 精品人妻1区二区| 欧美黄色淫秽网站| 日韩电影二区| av天堂久久9| 一二三四社区在线视频社区8| 午夜免费鲁丝| 五月开心婷婷网| 一区二区三区乱码不卡18| 中文字幕人妻丝袜制服| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 一本久久精品| 国产成人精品无人区| 又紧又爽又黄一区二区| 激情视频va一区二区三区| 一区在线观看完整版| 国产99久久九九免费精品| 免费在线观看影片大全网站| 欧美在线一区亚洲| 亚洲国产欧美网| 久久亚洲精品不卡| 精品一区二区三区四区五区乱码| 99热全是精品| 51午夜福利影视在线观看| √禁漫天堂资源中文www| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 日本黄色日本黄色录像| 午夜精品久久久久久毛片777| 又紧又爽又黄一区二区| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产一区二区 视频在线| 国产亚洲精品第一综合不卡| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 9色porny在线观看| 久久亚洲精品不卡| 性色av一级| 亚洲av电影在线进入| 天堂8中文在线网| 少妇精品久久久久久久| 性少妇av在线| 12—13女人毛片做爰片一| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 一本大道久久a久久精品| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 久9热在线精品视频| 乱人伦中国视频| 国产男人的电影天堂91| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 男男h啪啪无遮挡| 男女免费视频国产| 天堂俺去俺来也www色官网| 99香蕉大伊视频| 免费黄频网站在线观看国产| 欧美精品av麻豆av| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 一本久久精品| 丝袜人妻中文字幕| 欧美亚洲日本最大视频资源| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 日韩精品免费视频一区二区三区| 欧美精品av麻豆av| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 欧美激情久久久久久爽电影 | 欧美日韩视频精品一区| 久久人人97超碰香蕉20202| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 黄色视频不卡| 午夜福利影视在线免费观看| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲精品在线美女| 亚洲伊人久久精品综合| 考比视频在线观看| 99国产精品99久久久久| 在线看a的网站| 热re99久久精品国产66热6| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 欧美精品高潮呻吟av久久| 中文字幕最新亚洲高清| 久久女婷五月综合色啪小说| 黄色视频在线播放观看不卡| 青草久久国产| 丝袜喷水一区| 丰满迷人的少妇在线观看| 久久久国产精品麻豆| 成年人午夜在线观看视频| 制服诱惑二区| 无遮挡黄片免费观看| 中文字幕最新亚洲高清| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 桃红色精品国产亚洲av| 好男人电影高清在线观看| 欧美一级毛片孕妇| 亚洲久久久国产精品| 亚洲精品国产av成人精品| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产深夜福利视频在线观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 五月开心婷婷网| 黑人操中国人逼视频| 老司机影院毛片| 人妻人人澡人人爽人人| 成在线人永久免费视频| 精品国内亚洲2022精品成人 | 久久这里只有精品19| 老熟妇仑乱视频hdxx| bbb黄色大片| 国产精品影院久久| 日本vs欧美在线观看视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 韩国精品一区二区三区| 黄色片一级片一级黄色片| 久久人人97超碰香蕉20202| 99久久精品国产亚洲精品| 亚洲中文字幕日韩| 又大又爽又粗| 99国产精品一区二区三区| 91成年电影在线观看| 精品第一国产精品| 亚洲第一av免费看| av网站免费在线观看视频| 久久国产精品影院| 色精品久久人妻99蜜桃| 99热全是精品| a级毛片在线看网站| 岛国在线观看网站| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 久久久久久久久久久久大奶| 久久人人爽人人片av| 久久这里只有精品19| 欧美黑人精品巨大| 大片免费播放器 马上看| 又大又爽又粗| 丝袜喷水一区| 人人澡人人妻人| 精品免费久久久久久久清纯 | 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 在线观看www视频免费| 少妇人妻久久综合中文| 国产又色又爽无遮挡免| 国产成+人综合+亚洲专区| 成年人黄色毛片网站| 啦啦啦免费观看视频1| 精品国产乱子伦一区二区三区 | 美女视频免费永久观看网站| 国产亚洲欧美精品永久| 捣出白浆h1v1| av免费在线观看网站| 免费不卡黄色视频| 男女床上黄色一级片免费看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 国产深夜福利视频在线观看| svipshipincom国产片| 大陆偷拍与自拍| 狂野欧美激情性bbbbbb| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 一区二区日韩欧美中文字幕| 午夜91福利影院| 国产一区二区三区av在线| 国产淫语在线视频| 久久 成人 亚洲| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲精品一区蜜桃| 久久ye,这里只有精品| 一二三四社区在线视频社区8| 9热在线视频观看99| 一区二区av电影网| 欧美黄色片欧美黄色片| 无限看片的www在线观看| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| h视频一区二区三区| 丰满少妇做爰视频| 国产欧美日韩一区二区精品| avwww免费| 国产片内射在线| 黄色视频,在线免费观看| 久久久精品区二区三区| 一进一出抽搐动态| 亚洲,欧美精品.| 老司机亚洲免费影院| 热99re8久久精品国产| 在线永久观看黄色视频| 午夜福利影视在线免费观看| av福利片在线| 久久久精品免费免费高清| 窝窝影院91人妻|