HPLC 法測(cè)定協(xié)日嘎四味湯散中姜黃素的含量

丁 紅 趙俊蘋(píng)

(1.呼市藥品不良反應(yīng)和藥物濫用監(jiān)測(cè)中心，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020；2.呼市食品藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

協(xié)日嘎四味湯散收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》蒙藥分冊(cè)，是由姜黃、黃柏、梔子、蒺藜4 味藥組成的散劑，姜黃在處方中所占比例較大，為主藥，查找有關(guān)文獻(xiàn)［1］，參照《中國(guó)藥典》2010 年版一部［2］“姜黃”項(xiàng)下的含量測(cè)定方法，以姜黃素作為指標(biāo)成分，進(jìn)行含量測(cè)定方法研究，進(jìn)行了HPLC 含量測(cè)定方法研究。經(jīng)方法學(xué)考察及陰性對(duì)照試驗(yàn)，表明此法專(zhuān)屬性較強(qiáng)，得到了比較滿意的分析結(jié)果。

1 儀器與試藥

1.1 儀器: 島津LC-20A，SPD-M20A 型檢測(cè)器，LCsolution 色譜工作站。

1.2 試劑與試藥及樣品: 姜黃素對(duì)照品(批號(hào)11637 -201205)中國(guó)藥品生物制品檢定所;協(xié)日嘎四味湯散由內(nèi)蒙古蒙醫(yī)醫(yī)院提供。乙腈為色譜純，水為高純水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件: 色譜柱: 色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，本實(shí)驗(yàn)研究采用AlltimaTMC18 柱(4.6 ×250mm)及資生堂MGⅡC18 柱(4.6 ×250mm);流動(dòng)相: 乙腈-4%冰乙酸溶液(48∶ 52);流速: 1.0mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng): 430nm;理論板數(shù)按姜黃素峰計(jì)不得低于5000。

2.2 供試品溶液的制備: 取本品約0.7g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20mL，密塞，稱(chēng)定重量，加熱回流30min，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心，精密量取上清液1mL，置20mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 對(duì)照品溶液的制備: 精密稱(chēng)取姜黃素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL 含10μg 的溶液，即得。

2.4 陰性對(duì)照試驗(yàn): 取按處方量并以相同工藝制備的陰性對(duì)照(缺姜黃)0.7g，按含量測(cè)定項(xiàng)下的方法操作，進(jìn)樣量10L。測(cè)得結(jié)果為: 陰性對(duì)照色譜圖中在與姜黃素對(duì)照品色譜圖中相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)色譜峰出現(xiàn)。表明其它成分對(duì)姜黃素的測(cè)定無(wú)干擾，見(jiàn)圖1、2、4。

2.5 線性關(guān)系考察: 精密稱(chēng)取姜黃素對(duì)照品2.5012mg，置25mL 量瓶中，加甲醇使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，再精密吸取1mL，置10mL 量瓶中，搖勻，即得。(姜黃素為0.0100048mg/mL)分別取1、2、5、10、15、20μL 進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行回歸分析，結(jié)果姜黃素在10.0048μg ～200.096μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。回歸方程為y=8900x-1744 r2 =1

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn): 取同一份供試品溶液，分別于0h、2h、4h、8h、12h、24h 進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果表明姜黃素在24h 內(nèi)的面積積分值基本穩(wěn)定不變。RSD 為0.18(%)。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn): 取同一批號(hào)(批號(hào): 20131105 -1)供試品6 份，各取約0.7g，分別按含量測(cè)定項(xiàng)下方法操作，測(cè)定每份含量，結(jié)果平均含量為5. 1420mg/g，RSD 為0.82%。

2.8 加樣回收試驗(yàn): 取供試品(批號(hào)20131105 -1，含量5.1420mg/g)6 份，各約0.35g，精密稱(chēng)定，置6 個(gè)具塞錐形瓶中，分別依次精密加入姜黃素對(duì)照品溶液(姜黃素0.9012mg/mL)2.0mL，再分別精密加甲醇使成20mL，搖勻，按供試品溶液制備項(xiàng)下方法操作，測(cè)定每份含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 姜黃素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品含量測(cè)定: 取本品按［含量測(cè)定］項(xiàng)下的方法處理并測(cè)定，4 批樣品的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定

3 討 論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇: 采用UV-2450 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)檢測(cè)器，在190 ～700nm 波長(zhǎng)范圍掃描。結(jié)果姜黃素在430nm 處有最大吸收。結(jié)合《中國(guó)藥典》2010 年版一部“姜黃”藥材項(xiàng)下含量測(cè)定方法，選擇430nm 作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 研究表明，采用此方法操作簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性好，可作為該品種的質(zhì)量控制內(nèi)在指標(biāo)。

［1］常新全，丁麗霞. 中藥活形成分分析手冊(cè)［M］. 上冊(cè).學(xué)苑出版社，2002：895.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典［S］. 一部.2010.