反相HPLC 法測定酸梨干中山梨醇的含量

楊沫銀 宋廣瑩 韓塔娜

(1.內(nèi)蒙古食品藥品檢驗所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020； 2.內(nèi)蒙古商貿(mào)職業(yè)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

酸梨干作為蒙藥“阿格力格-阿力瑪”(別名: 花蓋梨、山梨、野梨)。原植物名: 秋子梨，為薔薇科植物花蓋梨Pyrus ussuriensis Maxim 的干燥成熟果實。祛“巴達干”熱、止瀉。用于“巴達干寶日”病、耳病、燒心、泛酸［1］。喬木高10 ～15m，樹皮粗糙，暗灰色，枝黃灰色或褐色，常有刺，無毛;芽寬卵形，有數(shù)片褐色鱗片，鱗片邊緣稍被毛。葉片近圓形、寬卵形或卵形，長3 ～7cm，寬2.5 ～5cm，先端長尾狀漸尖，或銳尖，基部圓形或近心形，邊緣具刺芒的尖銳鋸齒，兩面近無毛，或幼嫩時稍被毛;葉柄長2 ～5cm，稍被毛，托葉條狀披針形，早落。傘房花序有花5 ～7 朵;花梗長1 ～2cm，近無毛，花直徑2.5 ～3.5cm;萼片三角狀披針形，外面無毛，里面密被絨毛;花瓣倒卵形，長約1.8cm，寬1 ～1.2cm，基部有短抓，白色;雄蕊20，短于花瓣，花藥紫色;花柱5，離生，長于雄蕊，近基部有稀疏柔。果實近球形，直徑2～5cm，黃色或綠黃色，有褐色斑點，果肉含多數(shù)石細胞，味酸甜，經(jīng)后熟果肉變軟，有香氣;果梗粗短，長1 ～2cm，花萼宿存?；ㄆ? 月，果熟期9 ～10 月。

酸梨干含有可溶性糖主要由果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇組成，果實有機酸的組分包括蘋果酸、檸檬酸、奎尼酸、莽草酸和草酸［2］，本研究建立了其有效成分山梨醇的HPLC含量測定方法。

1 儀器與試劑

日本島津LC-20 泵，CBM-20A 型控制器，島津RID-10A 型示差檢測器，LCsolution 色譜工作站。山梨醇對照品: 美國(批號: 47841 LB78111)。水為離子交換高純水。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 色譜條件: 色譜柱: 磺化交聯(lián)的苯乙烯二乙烯基苯共聚物為填充劑的強陽離子鈣型交換柱(賽分Carbomix Ca-NP 7.8 ×300mm、安捷倫Hi-Plex Ca 7.8 ×300mm);流動相: 水;柱溫: 85℃;流速1.0mL·min-1。

2.2 對照品溶液的制備: 精密稱取山梨醇對照品適量，加水制成每1mL 各含2.5mg 的溶液，即得。

2.3 供試品溶液制備: 供試品溶液的制備: 取本品粉末(過三號篩)約2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入水20mL，密塞，稱定重量，分別超聲處理(功率為400W，頻率為40KHz)20min，取出，放冷，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，離心(5000 轉(zhuǎn)/min，10min)，上清液用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 專屬性考察: 精密吸取水空白溶劑，山梨醇對照品溶液，供試品溶液各10μL 注入液相色譜儀。供試品溶液中色譜峰保留時間與山梨醇對照品一致，且水空白溶劑無吸收。表明該含量測定方法專屬性好，空白溶劑無干擾。(色譜圖見圖1、2、3)

2.5 線性關(guān)系考察: 取山梨醇對照品5.334mg 置2mL 量瓶中加水使溶解，并稀釋至刻度，搖勻(山梨醇2.667mg /mL、)，分別取2、5、10、15、20、25、30、35、40L 進樣，按上述色譜條件進行測定，以峰面積對進樣量進行回歸分析，結(jié)果山梨醇在5.334μg ～106.68μg 范圍內(nèi)分別呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程為Y=11396X -2958.4，r =0.9999。結(jié)果表明，山梨醇在5.334g ～106.68g 范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線形關(guān)系。

2.6 穩(wěn)定性試驗: 取同一供試品溶液，分別于0h、2h、4h、6h、8h、12h、16h、24h 進行測定，RSD 為0.71%。

2.7 精密度試驗: 取同一供試品6 份，各取約2.0g，精密稱定，分別按上述供試品溶液的制備和色譜條件進行測定，進樣量各10μL，RSD 為0.75%。

2.8 回收率試驗: 取同一批已知含量供試品(含量23.187mg/g)6 份，各約0.5g，精密稱定，再分別依次精密加入山梨醇對照品11.5mg;再取供試品6 份，各約2.0g，精密稱定，再分別依次精密加入山梨醇對照品46mg，分別按準(zhǔn)確度試驗方法操作，計算回收率及高低濃度點6 份樣品的RSD%，結(jié)果見表1、2。

表1 山梨醇回收率試驗結(jié)果表(低濃度)

表2 山梨醇回收率試驗結(jié)果表(高濃度)

2.9 樣品測定: 取本品粉末按上述方法處理并測定，不同產(chǎn)地(赤峰林東罕山、赤峰白塔子)的4 批樣品的測定山梨醇含量(按干燥品計算)計算，結(jié)果分別為2.38%;2.50%;5.83%;6.10%。

3 小 結(jié)

從上述實驗結(jié)果中可以看出，該實驗方法所測定的酸梨干中山梨醇有效成分的分離效果好，結(jié)果穩(wěn)定，可以用于酸梨干中山梨醇成分的測定方法。

［1］衛(wèi)生部藥典委員會. 衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn). 蒙藥分冊［S］.1998.203.

［2］姚改芳，等.10 個不同系統(tǒng)梨品種的可溶性糖與有機酸組分含量分析［J］.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2011，34(5) ：25-31.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典( 一部) ［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010