核桃不同品種（系）對細(xì)菌性黑斑病的抗性鑒定

孫俊

摘要：選取遼寧地區(qū)12個核桃（Juglans regia）主栽品種（系）的兩年生嫁接苗，采用5種方法分別接種核桃細(xì)菌性黑斑病菌（Xanthomonas campestris）進(jìn)行抗病鑒定，并比較各品種（系）苗期抗性差異，同時(shí)比較及篩選接種方法。

關(guān)鍵詞：核桃（Juglans regia）；抗性；細(xì)菌性黑斑病病菌（Xanthomonas campestris）

中圖分類號：S664.1；S436.612.14 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）05-1058-03

胡桃（Juglans regial） 原產(chǎn)中亞，又叫核桃、羌桃、合桃等。是胡桃科（Juglandaceae）胡桃屬（Juglans）多年生落葉喬木。中國的核桃栽培歷史悠久，種質(zhì)資源豐富。核桃仁中含有豐富的脂肪、蛋白質(zhì)、碳水化合物及微量元素，具有較高的營養(yǎng)價(jià)值。中醫(yī)認(rèn)為核桃性溫、味甘、無毒，有健胃、補(bǔ)血、潤肺、養(yǎng)神等功效[1]。20世紀(jì)90年代以來，各國科學(xué)家通過營養(yǎng)學(xué)和病理學(xué)研究認(rèn)為，核桃對于心血管疾病、Ⅱ型糖尿病、癌癥和神經(jīng)系統(tǒng)疾病有一定的康復(fù)治療和預(yù)防效果。隨核桃的種植面積擴(kuò)大，核桃病害發(fā)生越來越嚴(yán)重，核桃細(xì)菌性黑斑病的發(fā)生最為嚴(yán)重，尤其是在遼寧地區(qū)，造成大量的落葉、落果，引起巨大的經(jīng)濟(jì)損失。藥劑試驗(yàn)證明用鋅銅波爾多液和細(xì)菌靈防治效果較好。

本研究對我國核桃黑斑病的研究現(xiàn)狀進(jìn)行了分析，選取遼寧地區(qū)12個核桃主栽品種（系），采用5種接種方法，系統(tǒng)地測定了不同核桃品種（系）對細(xì)菌性黑斑病菌（Xanthomonas campestris）的抗性差異，從而為核桃的抗病育種及科學(xué)防治提供一定的理論基礎(chǔ)。

核桃在幼果期受害后，果面上出現(xiàn)黑色小斑點(diǎn)，病斑擴(kuò)大，呈不規(guī)則下陷斑，并深入果肉，果實(shí)黑腐早落。成熟果實(shí)發(fā)病后，外果皮變黑，果仁呈現(xiàn)不同程度的干癟和黑斑，出油率和食用價(jià)值大大降低。葉片受害后，在葉脈處形成多角形病斑，嚴(yán)重時(shí)病斑相互融合，病葉皺縮畸形。嫩梢受害后，病斑長條形、褐色稍凹陷，病斑包圍枝條一圈時(shí)，病斑以上枝條枯死[2]。

病菌在病枝、芽內(nèi)及病斑內(nèi)越冬，翌年春季核桃展葉期借雨水和昆蟲活動進(jìn)行傳播。先感染葉片，病芽初展開時(shí)嫩葉極易受害，然后由葉片傳播到果實(shí)和枝條上。花序也易受侵染而產(chǎn)生水漬狀斑。雄花受侵染時(shí)，花粉也可以傳病。蚜蟲、蜜蜂、壁虱、螞蟻和舉肢蛾也能傳播病害。氣溫在4～30 ℃時(shí)對葉片感病，5～27 ℃對果實(shí)能感病、潛育期10～15 d，侵入的細(xì)菌主要破壞柔膜組織。發(fā)病的輕重與雨水有關(guān)。溫度高濕度大的雨季發(fā)病高峰期一般在核桃展葉期至開花期 [3]。

陳善義等[4]采用針刺法接種健康核桃枝條和葉片進(jìn)行致病性測定，并通過對病原菌的分離、致病性測定和16S rDNA序列分析，確定其病原菌分類地位，分析證明該病原細(xì)菌為Xanthomonas campestris。

1 材料與方法

1.1 栽培品種（系）

核桃品種（系）遼寧1號、遼寧4號、遼寧5號、遼寧6號、遼寧7號、禮品1號、禮品2號、寒豐、薄殼香、“30301”、“19-12”、“19-21”共計(jì)12個，均為兩年生嫁接苗，由遼寧省經(jīng)濟(jì)林研究所核桃研究室提供。其中“30301”、“19-12”、“19-21”為選育的優(yōu)系；遼寧5號、“30301”、“19-12”以核桃楸為砧木，其他品種（系）是以核桃為砧木。4月定植于溫室大棚中，5月底進(jìn)行接種試驗(yàn)。

1.2 菌株準(zhǔn)備

采用常規(guī)分離法進(jìn)行病原菌分離和純化[5]。在肉汁胨培養(yǎng)基平板上劃線并于28 ℃下培養(yǎng)。分離純化后所得菌株于斜面中4 ℃保存。挑取單菌落用肉汁胨培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)，4 d后接種，菌體懸浮液接種，濃度為108 CFU/mL。

1.3 接種方法

采用5種方法進(jìn)行接種。（A）噴霧接種葉片。接種前24 h噴霧保濕，以保證葉片氣孔張開，每棵植株隨機(jī)選取20片葉片做好標(biāo)記并用菌體懸浮液噴霧接種，重復(fù)3次（共60片）；（B）針刺噴霧接種葉片。每棵植株隨機(jī)選取10片葉片做好標(biāo)記并針刺后用菌體懸浮液噴霧接種，重復(fù)3次（共30片）；（C）針刺涂抹接種葉片。每棵植株隨機(jī)選取10片葉片做好標(biāo)記并針刺后以棉簽涂抹接種，重復(fù)3次（共30片）；（D）針刺噴霧接種新梢。每棵植株上隨機(jī)選取5個新梢做好標(biāo)記并針刺后用菌體懸浮液噴霧接種，重復(fù)3次（共15枝）；（E）針刺涂抹接種新梢。每棵植株上隨機(jī)選取5個新梢做好標(biāo)記并針刺后以棉簽涂抹接種，重復(fù)3次（共計(jì)15枝）。以上每種處理以不接種病原菌為對照。接種后48 h內(nèi)控制濕度90%，接種后15～17 d調(diào)查各處理的發(fā)病率。

發(fā)病率=■×100%

2 結(jié)果與分析

不同核桃品種（系）對核桃細(xì)菌性黑斑病菌抗性鑒定結(jié)果見表1。由表1可知，12個品種（系）的核桃苗接種后感病情況差異較大。由于A、B兩種方法最接近田間自然發(fā)病條件，因此苗期核桃抗性以方法A和B的平均值作為主要參考。其中遼寧7號發(fā)病率最低，抗性最好；其次是禮品1號和遼寧4號也表現(xiàn)出較高的抗性。而“30301”發(fā)病率高達(dá)74.17%，抗性最低，其次是遼寧1號，發(fā)病率為55.00%。新梢發(fā)病率也有差異，其中接種后遼寧7號和寒豐未發(fā)現(xiàn)病斑，而薄殼香新梢發(fā)病率較高。

各品種（系）的發(fā)病癥狀見圖1，其中遼寧7號癥狀最輕，在葉片上僅表現(xiàn)出輕微的退綠斑，禮品1號的病斑也極小，表現(xiàn)為針尖狀褐色斑點(diǎn)；最嚴(yán)重為“30301”，病斑最多且逐漸融合，遼寧1號病斑較大。

3 小結(jié)與討論

國內(nèi)外關(guān)于核桃細(xì)菌性黑斑病的病原、發(fā)病規(guī)律等均已有較系統(tǒng)的研究，而關(guān)于病害的防治中多為藥劑防治的篩選等，關(guān)于品種（系）抗病性的研究較少。鑒于此，本研究就遼寧省核桃苗期主栽品種（系）對細(xì)菌性黑斑病的抗性做了初步試驗(yàn)，并對接種方法做了比較，結(jié)果顯示，人工接種條件下不同栽培品種（系）表現(xiàn)明顯的抗性差異，其中遼寧7號、禮品1號和遼寧4號抗性較強(qiáng)； “30301”、遼寧1號和“19-21”抗性較弱。

本試驗(yàn)存在一定的局限性，接種材料為兩年生的嫁接苗，與成株期相比樹勢、樹體各方面均存在較大的差異；試驗(yàn)在溫室大棚中進(jìn)行并且人工接種，與露地自然發(fā)病條件相比有較大差異。但試驗(yàn)結(jié)論能對抗病育種起到一定的指導(dǎo)作用。

參考文獻(xiàn)：

[1] 李時(shí)珍.本草綱目（下冊）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1982.

[2] 張永強(qiáng)，朱惠英，馮 強(qiáng)，等.核桃黑斑病病原研究與防治試驗(yàn)初

報(bào)[J].甘肅林業(yè)科技，2004，29（2）：41-42.

[3] 李海菊，郝新科，牛 卿，等.核桃黑斑病發(fā)生與防治[J].河北果樹，2004（5）：44-45.

[4] 陳善義，陶萬強(qiáng)，王 合，等.北京地區(qū)核桃黑斑病病原菌的分離、致病性測定和16S rDNA序列分析[J].果樹學(xué)報(bào)，2011， 28（3）：469-473.

[5] 方中達(dá).植病研究方法[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1998.193-194.

摘要：選取遼寧地區(qū)12個核桃（Juglans regia）主栽品種（系）的兩年生嫁接苗，采用5種方法分別接種核桃細(xì)菌性黑斑病菌（Xanthomonas campestris）進(jìn)行抗病鑒定，并比較各品種（系）苗期抗性差異，同時(shí)比較及篩選接種方法。

關(guān)鍵詞：核桃（Juglans regia）；抗性；細(xì)菌性黑斑病病菌（Xanthomonas campestris）

中圖分類號：S664.1；S436.612.14 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）05-1058-03

胡桃（Juglans regial） 原產(chǎn)中亞，又叫核桃、羌桃、合桃等。是胡桃科（Juglandaceae）胡桃屬（Juglans）多年生落葉喬木。中國的核桃栽培歷史悠久，種質(zhì)資源豐富。核桃仁中含有豐富的脂肪、蛋白質(zhì)、碳水化合物及微量元素，具有較高的營養(yǎng)價(jià)值。中醫(yī)認(rèn)為核桃性溫、味甘、無毒，有健胃、補(bǔ)血、潤肺、養(yǎng)神等功效[1]。20世紀(jì)90年代以來，各國科學(xué)家通過營養(yǎng)學(xué)和病理學(xué)研究認(rèn)為，核桃對于心血管疾病、Ⅱ型糖尿病、癌癥和神經(jīng)系統(tǒng)疾病有一定的康復(fù)治療和預(yù)防效果。隨核桃的種植面積擴(kuò)大，核桃病害發(fā)生越來越嚴(yán)重，核桃細(xì)菌性黑斑病的發(fā)生最為嚴(yán)重，尤其是在遼寧地區(qū)，造成大量的落葉、落果，引起巨大的經(jīng)濟(jì)損失。藥劑試驗(yàn)證明用鋅銅波爾多液和細(xì)菌靈防治效果較好。

本研究對我國核桃黑斑病的研究現(xiàn)狀進(jìn)行了分析，選取遼寧地區(qū)12個核桃主栽品種（系），采用5種接種方法，系統(tǒng)地測定了不同核桃品種（系）對細(xì)菌性黑斑病菌（Xanthomonas campestris）的抗性差異，從而為核桃的抗病育種及科學(xué)防治提供一定的理論基礎(chǔ)。

核桃在幼果期受害后，果面上出現(xiàn)黑色小斑點(diǎn)，病斑擴(kuò)大，呈不規(guī)則下陷斑，并深入果肉，果實(shí)黑腐早落。成熟果實(shí)發(fā)病后，外果皮變黑，果仁呈現(xiàn)不同程度的干癟和黑斑，出油率和食用價(jià)值大大降低。葉片受害后，在葉脈處形成多角形病斑，嚴(yán)重時(shí)病斑相互融合，病葉皺縮畸形。嫩梢受害后，病斑長條形、褐色稍凹陷，病斑包圍枝條一圈時(shí)，病斑以上枝條枯死[2]。

病菌在病枝、芽內(nèi)及病斑內(nèi)越冬，翌年春季核桃展葉期借雨水和昆蟲活動進(jìn)行傳播。先感染葉片，病芽初展開時(shí)嫩葉極易受害，然后由葉片傳播到果實(shí)和枝條上?；ㄐ蛞惨资芮秩径a(chǎn)生水漬狀斑。雄花受侵染時(shí)，花粉也可以傳病。蚜蟲、蜜蜂、壁虱、螞蟻和舉肢蛾也能傳播病害。氣溫在4～30 ℃時(shí)對葉片感病，5～27 ℃對果實(shí)能感病、潛育期10～15 d，侵入的細(xì)菌主要破壞柔膜組織。發(fā)病的輕重與雨水有關(guān)。溫度高濕度大的雨季發(fā)病高峰期一般在核桃展葉期至開花期 [3]。

陳善義等[4]采用針刺法接種健康核桃枝條和葉片進(jìn)行致病性測定，并通過對病原菌的分離、致病性測定和16S rDNA序列分析，確定其病原菌分類地位，分析證明該病原細(xì)菌為Xanthomonas campestris。

1 材料與方法

1.1 栽培品種（系）

核桃品種（系）遼寧1號、遼寧4號、遼寧5號、遼寧6號、遼寧7號、禮品1號、禮品2號、寒豐、薄殼香、“30301”、“19-12”、“19-21”共計(jì)12個，均為兩年生嫁接苗，由遼寧省經(jīng)濟(jì)林研究所核桃研究室提供。其中“30301”、“19-12”、“19-21”為選育的優(yōu)系；遼寧5號、“30301”、“19-12”以核桃楸為砧木，其他品種（系）是以核桃為砧木。4月定植于溫室大棚中，5月底進(jìn)行接種試驗(yàn)。

1.2 菌株準(zhǔn)備

采用常規(guī)分離法進(jìn)行病原菌分離和純化[5]。在肉汁胨培養(yǎng)基平板上劃線并于28 ℃下培養(yǎng)。分離純化后所得菌株于斜面中4 ℃保存。挑取單菌落用肉汁胨培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)，4 d后接種，菌體懸浮液接種，濃度為108 CFU/mL。

1.3 接種方法

采用5種方法進(jìn)行接種。（A）噴霧接種葉片。接種前24 h噴霧保濕，以保證葉片氣孔張開，每棵植株隨機(jī)選取20片葉片做好標(biāo)記并用菌體懸浮液噴霧接種，重復(fù)3次（共60片）；（B）針刺噴霧接種葉片。每棵植株隨機(jī)選取10片葉片做好標(biāo)記并針刺后用菌體懸浮液噴霧接種，重復(fù)3次（共30片）；（C）針刺涂抹接種葉片。每棵植株隨機(jī)選取10片葉片做好標(biāo)記并針刺后以棉簽涂抹接種，重復(fù)3次（共30片）；（D）針刺噴霧接種新梢。每棵植株上隨機(jī)選取5個新梢做好標(biāo)記并針刺后用菌體懸浮液噴霧接種，重復(fù)3次（共15枝）；（E）針刺涂抹接種新梢。每棵植株上隨機(jī)選取5個新梢做好標(biāo)記并針刺后以棉簽涂抹接種，重復(fù)3次（共計(jì)15枝）。以上每種處理以不接種病原菌為對照。接種后48 h內(nèi)控制濕度90%，接種后15～17 d調(diào)查各處理的發(fā)病率。

發(fā)病率=■×100%

2 結(jié)果與分析

不同核桃品種（系）對核桃細(xì)菌性黑斑病菌抗性鑒定結(jié)果見表1。由表1可知，12個品種（系）的核桃苗接種后感病情況差異較大。由于A、B兩種方法最接近田間自然發(fā)病條件，因此苗期核桃抗性以方法A和B的平均值作為主要參考。其中遼寧7號發(fā)病率最低，抗性最好；其次是禮品1號和遼寧4號也表現(xiàn)出較高的抗性。而“30301”發(fā)病率高達(dá)74.17%，抗性最低，其次是遼寧1號，發(fā)病率為55.00%。新梢發(fā)病率也有差異，其中接種后遼寧7號和寒豐未發(fā)現(xiàn)病斑，而薄殼香新梢發(fā)病率較高。

各品種（系）的發(fā)病癥狀見圖1，其中遼寧7號癥狀最輕，在葉片上僅表現(xiàn)出輕微的退綠斑，禮品1號的病斑也極小，表現(xiàn)為針尖狀褐色斑點(diǎn)；最嚴(yán)重為“30301”，病斑最多且逐漸融合，遼寧1號病斑較大。

3 小結(jié)與討論

國內(nèi)外關(guān)于核桃細(xì)菌性黑斑病的病原、發(fā)病規(guī)律等均已有較系統(tǒng)的研究，而關(guān)于病害的防治中多為藥劑防治的篩選等，關(guān)于品種（系）抗病性的研究較少。鑒于此，本研究就遼寧省核桃苗期主栽品種（系）對細(xì)菌性黑斑病的抗性做了初步試驗(yàn)，并對接種方法做了比較，結(jié)果顯示，人工接種條件下不同栽培品種（系）表現(xiàn)明顯的抗性差異，其中遼寧7號、禮品1號和遼寧4號抗性較強(qiáng)； “30301”、遼寧1號和“19-21”抗性較弱。

本試驗(yàn)存在一定的局限性，接種材料為兩年生的嫁接苗，與成株期相比樹勢、樹體各方面均存在較大的差異；試驗(yàn)在溫室大棚中進(jìn)行并且人工接種，與露地自然發(fā)病條件相比有較大差異。但試驗(yàn)結(jié)論能對抗病育種起到一定的指導(dǎo)作用。

參考文獻(xiàn)：

[1] 李時(shí)珍.本草綱目（下冊）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1982.

[2] 張永強(qiáng)，朱惠英，馮 強(qiáng)，等.核桃黑斑病病原研究與防治試驗(yàn)初

報(bào)[J].甘肅林業(yè)科技，2004，29（2）：41-42.

[3] 李海菊，郝新科，牛 卿，等.核桃黑斑病發(fā)生與防治[J].河北果樹，2004（5）：44-45.

[4] 陳善義，陶萬強(qiáng)，王 合，等.北京地區(qū)核桃黑斑病病原菌的分離、致病性測定和16S rDNA序列分析[J].果樹學(xué)報(bào)，2011， 28（3）：469-473.

[5] 方中達(dá).植病研究方法[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1998.193-194.

摘要：選取遼寧地區(qū)12個核桃（Juglans regia）主栽品種（系）的兩年生嫁接苗，采用5種方法分別接種核桃細(xì)菌性黑斑病菌（Xanthomonas campestris）進(jìn)行抗病鑒定，并比較各品種（系）苗期抗性差異，同時(shí)比較及篩選接種方法。

關(guān)鍵詞：核桃（Juglans regia）；抗性；細(xì)菌性黑斑病病菌（Xanthomonas campestris）

中圖分類號：S664.1；S436.612.14 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）05-1058-03

胡桃（Juglans regial） 原產(chǎn)中亞，又叫核桃、羌桃、合桃等。是胡桃科（Juglandaceae）胡桃屬（Juglans）多年生落葉喬木。中國的核桃栽培歷史悠久，種質(zhì)資源豐富。核桃仁中含有豐富的脂肪、蛋白質(zhì)、碳水化合物及微量元素，具有較高的營養(yǎng)價(jià)值。中醫(yī)認(rèn)為核桃性溫、味甘、無毒，有健胃、補(bǔ)血、潤肺、養(yǎng)神等功效[1]。20世紀(jì)90年代以來，各國科學(xué)家通過營養(yǎng)學(xué)和病理學(xué)研究認(rèn)為，核桃對于心血管疾病、Ⅱ型糖尿病、癌癥和神經(jīng)系統(tǒng)疾病有一定的康復(fù)治療和預(yù)防效果。隨核桃的種植面積擴(kuò)大，核桃病害發(fā)生越來越嚴(yán)重，核桃細(xì)菌性黑斑病的發(fā)生最為嚴(yán)重，尤其是在遼寧地區(qū)，造成大量的落葉、落果，引起巨大的經(jīng)濟(jì)損失。藥劑試驗(yàn)證明用鋅銅波爾多液和細(xì)菌靈防治效果較好。

本研究對我國核桃黑斑病的研究現(xiàn)狀進(jìn)行了分析，選取遼寧地區(qū)12個核桃主栽品種（系），采用5種接種方法，系統(tǒng)地測定了不同核桃品種（系）對細(xì)菌性黑斑病菌（Xanthomonas campestris）的抗性差異，從而為核桃的抗病育種及科學(xué)防治提供一定的理論基礎(chǔ)。

核桃在幼果期受害后，果面上出現(xiàn)黑色小斑點(diǎn)，病斑擴(kuò)大，呈不規(guī)則下陷斑，并深入果肉，果實(shí)黑腐早落。成熟果實(shí)發(fā)病后，外果皮變黑，果仁呈現(xiàn)不同程度的干癟和黑斑，出油率和食用價(jià)值大大降低。葉片受害后，在葉脈處形成多角形病斑，嚴(yán)重時(shí)病斑相互融合，病葉皺縮畸形。嫩梢受害后，病斑長條形、褐色稍凹陷，病斑包圍枝條一圈時(shí)，病斑以上枝條枯死[2]。

病菌在病枝、芽內(nèi)及病斑內(nèi)越冬，翌年春季核桃展葉期借雨水和昆蟲活動進(jìn)行傳播。先感染葉片，病芽初展開時(shí)嫩葉極易受害，然后由葉片傳播到果實(shí)和枝條上?；ㄐ蛞惨资芮秩径a(chǎn)生水漬狀斑。雄花受侵染時(shí)，花粉也可以傳病。蚜蟲、蜜蜂、壁虱、螞蟻和舉肢蛾也能傳播病害。氣溫在4～30 ℃時(shí)對葉片感病，5～27 ℃對果實(shí)能感病、潛育期10～15 d，侵入的細(xì)菌主要破壞柔膜組織。發(fā)病的輕重與雨水有關(guān)。溫度高濕度大的雨季發(fā)病高峰期一般在核桃展葉期至開花期 [3]。

陳善義等[4]采用針刺法接種健康核桃枝條和葉片進(jìn)行致病性測定，并通過對病原菌的分離、致病性測定和16S rDNA序列分析，確定其病原菌分類地位，分析證明該病原細(xì)菌為Xanthomonas campestris。

1 材料與方法

1.1 栽培品種（系）

核桃品種（系）遼寧1號、遼寧4號、遼寧5號、遼寧6號、遼寧7號、禮品1號、禮品2號、寒豐、薄殼香、“30301”、“19-12”、“19-21”共計(jì)12個，均為兩年生嫁接苗，由遼寧省經(jīng)濟(jì)林研究所核桃研究室提供。其中“30301”、“19-12”、“19-21”為選育的優(yōu)系；遼寧5號、“30301”、“19-12”以核桃楸為砧木，其他品種（系）是以核桃為砧木。4月定植于溫室大棚中，5月底進(jìn)行接種試驗(yàn)。

1.2 菌株準(zhǔn)備

采用常規(guī)分離法進(jìn)行病原菌分離和純化[5]。在肉汁胨培養(yǎng)基平板上劃線并于28 ℃下培養(yǎng)。分離純化后所得菌株于斜面中4 ℃保存。挑取單菌落用肉汁胨培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)，4 d后接種，菌體懸浮液接種，濃度為108 CFU/mL。

1.3 接種方法

采用5種方法進(jìn)行接種。（A）噴霧接種葉片。接種前24 h噴霧保濕，以保證葉片氣孔張開，每棵植株隨機(jī)選取20片葉片做好標(biāo)記并用菌體懸浮液噴霧接種，重復(fù)3次（共60片）；（B）針刺噴霧接種葉片。每棵植株隨機(jī)選取10片葉片做好標(biāo)記并針刺后用菌體懸浮液噴霧接種，重復(fù)3次（共30片）；（C）針刺涂抹接種葉片。每棵植株隨機(jī)選取10片葉片做好標(biāo)記并針刺后以棉簽涂抹接種，重復(fù)3次（共30片）；（D）針刺噴霧接種新梢。每棵植株上隨機(jī)選取5個新梢做好標(biāo)記并針刺后用菌體懸浮液噴霧接種，重復(fù)3次（共15枝）；（E）針刺涂抹接種新梢。每棵植株上隨機(jī)選取5個新梢做好標(biāo)記并針刺后以棉簽涂抹接種，重復(fù)3次（共計(jì)15枝）。以上每種處理以不接種病原菌為對照。接種后48 h內(nèi)控制濕度90%，接種后15～17 d調(diào)查各處理的發(fā)病率。

發(fā)病率=■×100%

2 結(jié)果與分析

不同核桃品種（系）對核桃細(xì)菌性黑斑病菌抗性鑒定結(jié)果見表1。由表1可知，12個品種（系）的核桃苗接種后感病情況差異較大。由于A、B兩種方法最接近田間自然發(fā)病條件，因此苗期核桃抗性以方法A和B的平均值作為主要參考。其中遼寧7號發(fā)病率最低，抗性最好；其次是禮品1號和遼寧4號也表現(xiàn)出較高的抗性。而“30301”發(fā)病率高達(dá)74.17%，抗性最低，其次是遼寧1號，發(fā)病率為55.00%。新梢發(fā)病率也有差異，其中接種后遼寧7號和寒豐未發(fā)現(xiàn)病斑，而薄殼香新梢發(fā)病率較高。

各品種（系）的發(fā)病癥狀見圖1，其中遼寧7號癥狀最輕，在葉片上僅表現(xiàn)出輕微的退綠斑，禮品1號的病斑也極小，表現(xiàn)為針尖狀褐色斑點(diǎn)；最嚴(yán)重為“30301”，病斑最多且逐漸融合，遼寧1號病斑較大。

3 小結(jié)與討論

國內(nèi)外關(guān)于核桃細(xì)菌性黑斑病的病原、發(fā)病規(guī)律等均已有較系統(tǒng)的研究，而關(guān)于病害的防治中多為藥劑防治的篩選等，關(guān)于品種（系）抗病性的研究較少。鑒于此，本研究就遼寧省核桃苗期主栽品種（系）對細(xì)菌性黑斑病的抗性做了初步試驗(yàn)，并對接種方法做了比較，結(jié)果顯示，人工接種條件下不同栽培品種（系）表現(xiàn)明顯的抗性差異，其中遼寧7號、禮品1號和遼寧4號抗性較強(qiáng)； “30301”、遼寧1號和“19-21”抗性較弱。

本試驗(yàn)存在一定的局限性，接種材料為兩年生的嫁接苗，與成株期相比樹勢、樹體各方面均存在較大的差異；試驗(yàn)在溫室大棚中進(jìn)行并且人工接種，與露地自然發(fā)病條件相比有較大差異。但試驗(yàn)結(jié)論能對抗病育種起到一定的指導(dǎo)作用。

參考文獻(xiàn)：

[1] 李時(shí)珍.本草綱目（下冊）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1982.

[2] 張永強(qiáng)，朱惠英，馮 強(qiáng)，等.核桃黑斑病病原研究與防治試驗(yàn)初

報(bào)[J].甘肅林業(yè)科技，2004，29（2）：41-42.

[3] 李海菊，郝新科，牛 卿，等.核桃黑斑病發(fā)生與防治[J].河北果樹，2004（5）：44-45.

[4] 陳善義，陶萬強(qiáng)，王 合，等.北京地區(qū)核桃黑斑病病原菌的分離、致病性測定和16S rDNA序列分析[J].果樹學(xué)報(bào)，2011， 28（3）：469-473.

[5] 方中達(dá).植病研究方法[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1998.193-194.