慢病毒介導(dǎo)的LKB1基因在子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞中的表達(dá)

唐喬喬宋 玥龍 穎 張潔清 宋紅林 趙冰冰

作者單位：530021 南寧 廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院婦瘤科；△廣西醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院

基礎(chǔ)研究

慢病毒介導(dǎo)的LKB1基因在子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞中的表達(dá)

唐喬喬△宋 玥△龍 穎 張潔清 宋紅林 趙冰冰

作者單位：530021 南寧 廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院婦瘤科；△廣西醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院

目的 探討慢病毒系統(tǒng)介導(dǎo)的LKB1基因在子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞中的過表達(dá)，為進(jìn)一步研究LKB1基因在子宮內(nèi)膜癌的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法 以PCR擴(kuò)增LKB1克隆質(zhì)粒獲得全長cDNA，將LKB1 cDNA鏈接到慢病毒載體pWPI，構(gòu)建慢病毒表達(dá)質(zhì)粒LKB1/pWPI。通過與包裝質(zhì)粒pCMV-Dr8.74和pMD2.G共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞進(jìn)行病毒包裝，用包裝成功后的病毒液感染子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞，以熒光定量PCR、Western blot法檢測HEC-1A細(xì)胞中LKB1的相對表達(dá)量。結(jié)果 成功擴(kuò)增LKB1全長cDNA和構(gòu)建LKB1重組慢病毒表達(dá)載體LKB1/pWPI。轉(zhuǎn)染包裝293T細(xì)胞后能產(chǎn)生慢病毒顆粒并能有效感染靶細(xì)胞HEC-1A。轉(zhuǎn)染后HEC-1A-LKB1-pWPI細(xì)胞中LKB1的表達(dá)率明顯高于親本細(xì)胞和空白對照細(xì)胞（P＜0.01）。結(jié)論 成功構(gòu)建攜帶LKB1基因的慢病毒表達(dá)載體，包裝病毒后能有效地感染子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞，為進(jìn)一步探討LKB1基因在子宮內(nèi)膜癌中的生物學(xué)效應(yīng)奠定了基礎(chǔ)。

子宮腫瘤；子宮內(nèi)膜癌；LKB1；慢病毒

LKB1基因又稱STK11（serine threonine kinase）基因，目前認(rèn)為是一種腫瘤抑制基因［1］。1998年由Hemminki等［2］采用定位候選克隆的方法從Peutz-Jeghers syndrome（PJS）患者血液細(xì)胞中克隆出來。以往的實驗研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜癌從正常組織到癌變的過程中，存在LKB1的表達(dá)缺失［3］。LKB1作為一種抑癌基因，其表達(dá)缺失與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展是否存在密切相關(guān)？是否可以作為子宮內(nèi)膜癌基因治療的一個新靶點？為進(jìn)一步探討兩者的關(guān)系，本實驗構(gòu)建高拷貝的LKB1/pWPI重組慢病毒表達(dá)質(zhì)粒，并將其轉(zhuǎn)染到該基因表達(dá)缺失的子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞中，進(jìn)一步觀察LKB1對腫瘤細(xì)胞增殖的影響，為研究LKB1與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。

1.1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 質(zhì)粒、細(xì)菌及細(xì)胞株 慢病毒系統(tǒng)表達(dá)質(zhì)粒pWPI、包裝質(zhì)粒pCMV-Dr8.74、包膜質(zhì)粒pMD2.G、人子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞、人胚胎腎上皮293T細(xì)胞及感受態(tài)大腸桿菌DH-5α均為廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院實驗室保存。

1.1.2 主要試劑及儀器 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RTPCR）試劑盒、羥乙基哌（HEPSE）和Trizol試劑均購自美國Sigma公司，限制性內(nèi)切酶PmeI和快速鏈接試劑盒購自紐英侖生物技術(shù)公司，蝦堿性磷酸酶（SAP）購自日本 Tataka公司，T4DNA Polymerase和 First STRAND cDNA Synthesis Kit逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自加拿大MBI Fermentas公司，Lipofectamin 2000購自美國Invitrogen公司，無內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒購自北京Tiangen公司，補平試劑盒購自上海Genestar公司。引物合成和測序由美國Ivitrogen公司（上海英杰生物工程有限公司）完成。

1.2 實驗方法

1.2.1 LKB1基因引物設(shè)計及合成 根據(jù)Genebank人類LKB1（STK11）mRNA（NM_000455.4）序列設(shè)計引物，送上海英杰生物工程公司合成。檢測LKB1基因mRNA表達(dá)引物的上游引物為5′TGTGGCTATGAGGATGTTTGG 3′，下游引物為5′TTGGTCGTGTTGTCTGGTTGAT 3′，長度為118 bp；LKB1基因全長cDNA引物上游引物為5′ATGGCAGGTGAAGAAATTAAT 3′，下游引物為5′TTAACTTTTACTTTTTCCTTTATTG 3′，長度為1 302bp；β-actin內(nèi)參引物的上游引物為5′AAAAGCCACCCCACTTCTCT 3′，下游引物為3′GACCAAAAGCCTTCATACATCTCA 5′，長度為221bp；PWPI載體通用引物的上游引物為5′TCAAGCCTCAGACAGTGGTTC 3′，下游引物為5′CGTCGCCGTCCAGCTCGACCAG 3′，長度為904 bp。

1.2.2 LKB1重組慢病毒表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建 采用LKB1基因的cDNA作為模板，PCR反應(yīng)體系：10× buffer 2.5 μl，dNTP1.5 μl，上下游引物各1 μl，Taq酶0.2 μl，模板1 μl，ddH2O 25 μl。反應(yīng)條件為94℃5 min，94℃ 30 s，61℃ 30 s，72℃ 30 s，共30個循環(huán)，72℃10 min延伸，4℃保存。將產(chǎn)物按照說明書進(jìn)行回收和純化，取1 μl DNA加149 μl DEPC水，混勻后測A260值，按照DNA濃度（μg/μl）=（A260×50×稀釋倍數(shù)）/ 1 000計算純化的DNA濃度。PmeI酶切pWPI載體質(zhì)粒pWPI，SAP去磷酸化后回收。鏈接LKB1與pWPI，LKB1∶pWPI濃度比為3∶1，鏈接體系為T4 buffer 1 μl，T4 DNA Ligase 1 μl，LKB1 DNA 1 μl，10×Ligation Buffer 1 μl，ddH2O 10 μl，16℃反應(yīng)16 h后將鏈接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌DH-5α，取適量轉(zhuǎn)化后的菌液涂布AMP（+）的瓊脂糖平板培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)20～24 h后挑選陽性克隆，將其接種于3 ml AMP（+）的LB中，37℃振蕩培養(yǎng)16～20 h后采用質(zhì)粒DNA提取試劑盒提取質(zhì)粒DNA。取每管菌液1 μl為模板，用pWPI載體的通用引物進(jìn)行PCR反應(yīng)，將可以擴(kuò)增出目的條帶的重組質(zhì)粒送上海英杰生物工程公司測序。

1.2.3 LKB1重組慢病毒表達(dá)質(zhì)粒的包裝及滴度測定 將293T細(xì)胞以1×105個細(xì)胞的密度接種到12孔板，采用LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑盒，按照說明書的方法進(jìn)行操作，將LKB1/pWPI質(zhì)粒、pCMV包膜質(zhì)粒、pMD2.G包裝質(zhì)粒按照3∶2∶2的比例共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，24 h及48 h后用熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率。將293T細(xì)胞按照每孔100 μl含有1×104個細(xì)胞接種到24孔板中，用不含抗生素的DMEM培養(yǎng)液將病毒液稀釋為1倍、2倍、4倍、8倍、16倍和32倍，分別加入到24孔板的細(xì)胞中，輕輕混勻，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h后在熒光顯微鏡下計數(shù)有熒光的細(xì)胞數(shù)，取5個視野取平均值計算病毒滴度。病毒滴度（IU/ml）=（熒光細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分比×接種細(xì)胞數(shù)/100×接種細(xì)胞體積）×1/稀釋倍數(shù)。

1.2.4 重組慢病毒轉(zhuǎn)染HEC-1A細(xì)胞及流式細(xì)胞儀分選 取對數(shù)生長期的HEC-1A細(xì)胞，以4×105個細(xì)胞/孔接種于6孔板，每組設(shè)置3個平行孔。37℃、5% CO2培養(yǎng)24 h后棄去上清液，加入800 μl病毒液，培養(yǎng)96～120 h。將準(zhǔn)備好需要分選的帶有綠色熒光的細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞計數(shù)為1×107～1×108個，PBS洗2～3遍后以1 000 r/min離心5 min，取1～2 ml轉(zhuǎn)染后的HEC-1A細(xì)胞，以300目的細(xì)胞篩過濾，用綠色熒光蛋白標(biāo)記進(jìn)行流式分選。

1.2.5 熒光定量PCR檢測LKB1的表達(dá)量 從6孔板中收集轉(zhuǎn)染的HEC-1A細(xì)胞，采用Trizol法提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為總cDNA，檢測轉(zhuǎn)染靶細(xì)胞LKB1的表達(dá)量。熒光定量-PCR反應(yīng)條件為：94℃5 min，94℃30 s，60℃30 s，72℃20 s，30個循環(huán)，72℃10 min。實驗分為3組：HEC-1A-LKB1-pWPI組（轉(zhuǎn)染帶有LKB1基因的病毒顆粒）、HEC-1A-pWPI（轉(zhuǎn)染空病毒顆粒對照）以及HCE-1A組（空白對照）。熒光定量PCR擴(kuò)增反應(yīng)完成后，儀器自行進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，分別給出各個樣品的Ct值與SQ值。利用2-△△Ct法計算實驗組與對照組目標(biāo)基因mRNA模板的相對差異。△Ct實驗組= Ct（實驗組目標(biāo)基因）-Ct（實驗組內(nèi)參基因），△Ct對照組=Ct（對照組目標(biāo)基因）-Ct（對照組內(nèi)參基因）?！鳌鰿t=△Ct實驗組-△Ct對照組。最后，計算目的基因模板水平比率：2-△△Ct=mRNA模板量的比值。

1.2.6 Western blot法檢測3組細(xì)胞中LKB1蛋白的表達(dá) 將準(zhǔn)備好3組培養(yǎng)好的細(xì)胞棄去培養(yǎng)液后加入2～3 ml預(yù)冷4℃的PBS洗滌3次，棄掉PBS后每瓶加入200～400 μl含PMSF的裂解液（1 ml蛋白裂解液加入10 μl PMSF），冰上裂解30 min，然后用干凈的細(xì)胞刮棒將細(xì)胞刮于培養(yǎng)瓶的一側(cè)，再用移液槍將裂解液和細(xì)胞碎片移至1.5 ml離心管中。以14 000 r/min、4℃離心30 min，將離心后的上清液分裝到0.6 ml的離心管中，用BAC法測定蛋白濃度。體積按4∶1加1×上樣緩沖液混勻，根據(jù)測算的濃度確定50 μg為上樣量，換算出各自的實際上樣體積。用普通PCR儀煮沸5 min變性，進(jìn)行SDS-PAGE電泳分離蛋白（5%濃縮膠，12%分離膠），濃縮膠跑80 V的恒壓，分離膠跑120 V的恒壓，總時間為2 h左右，按照蛋白質(zhì)Marker切下LKB1和GAPDH膠段，轉(zhuǎn)移至PVDF膜上（恒100 mA，42 min），5%脫脂牛奶封閉非特異抗原2.5 h，PBS-T洗滌1次，將一抗用PBS-T稀釋至適當(dāng)濃度為1∶2 000，GAPDH為1∶5 000，放入培養(yǎng)皿中；從封閉液中取出膜，用濾紙吸去殘留液后，將膜蛋白面朝下置于抗體液面上，4℃孵育過夜，用PBS-T在室溫下脫色搖床上洗滌兩次，每次10 min；再用PBS洗滌一次，10 min。同上法準(zhǔn)備二抗稀釋液（1∶10 000），并與膜接觸，室溫下孵育2 h后，用PBS-T在室溫下脫色搖床上洗滌兩次，每次10 min；再用PBS洗滌一次，10 min，進(jìn)行化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。凝膠圖像分析：將膠片進(jìn)行掃描或拍照，用凝膠圖像處理系統(tǒng)分析目標(biāo)帶的分子量和凈光密度值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析。3組樣本LKB1基因相對表達(dá)量采用多個樣本兩兩比較的配對資料t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 重組表達(dá)質(zhì)粒LKB1/PWPI的PCR鑒定

采用1.5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測，結(jié)果顯示1 302 bp左右的條帶的質(zhì)粒為含有目的基因的重組質(zhì)粒。見圖1。送上海英杰生物工程公司測序，結(jié)果在NCBI進(jìn)行BLAST結(jié)果序列進(jìn)行對比分析，顯示在295 bp和1 256 bp位置的基因發(fā)生突變，但是編碼的氨基酸并不改變，可以進(jìn)行后續(xù)實驗。

圖1 PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果注：M.Marker；1、2.膠回收LKB1 PCR產(chǎn)物。

2.2 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞及陽性克隆的篩選

按照最佳轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后分別于轉(zhuǎn)染24 h、36 h、48 h后觀察293T細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率。如圖2所示，細(xì)胞轉(zhuǎn)染48 h的轉(zhuǎn)染效率最高，達(dá)到92%左右。根據(jù)公式計算得出，包裝的病毒滴度約為5.0×107IU/ml。吸取病毒上清液感染HEC-1A細(xì)胞后96～120 h于熒光顯微鏡下觀察，見綠色熒光細(xì)胞占總細(xì)胞平均數(shù)的70%～80%，如圖3所示，說明攜帶LKB1基因的慢病毒能高效感染HEC-1A細(xì)胞。經(jīng)流式細(xì)胞儀分選可獲得感染效率達(dá)95%以上的HEC-1A細(xì)胞。見圖4。

圖2 轉(zhuǎn)染24 h、36 h、48 h熒光顯微鏡觀察293T細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率（×200）注：A.轉(zhuǎn)染24 h；B.轉(zhuǎn)染36h；C.轉(zhuǎn)染48 h。

圖3 吸取病毒上清液感染HEC-1A細(xì)胞后96～120 h檢測綠色熒光蛋白的表達(dá)（×200）

2.3 熒光定量PCR檢測轉(zhuǎn)染HEC-1A細(xì)胞LKB1的相對表達(dá)量

圖4 HEC-1A-LKB1-pWPI感染子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞后分別于熒光顯微鏡（×200）和普通白光顯微鏡下（×200）觀察細(xì)胞感染效率注：A.熒光顯微鏡下觀察；B.普通白光顯微鏡下觀察。

通過熒光定量PCR檢測HEC-1A-LKB1-pWPI、HEC-1A-pWPI及HEC-1A 3組中LKB1的表達(dá)量，結(jié)果轉(zhuǎn)染后HEC-1A-LKB1-pWPI組的細(xì)胞中LKB1的表達(dá)量明顯高于HEC-1A-pWPI組和HEC-1A組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.01）；HEC-1A組和HEC-1A-pWPI組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 HEC-1A-LKB1-pWPI組與HEC-1A-pWPI組和HEC-1A組中LKB1基因的表達(dá)量比較（χ±s）

2.4 Western blot法檢測3組細(xì)胞中LKB1的蛋白表達(dá)

以Western blot法驗證轉(zhuǎn)染后的子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞中LKB1的蛋白表達(dá)。由圖5可見，HEC-1A-LKB1-pWPI組細(xì)胞LKB1的蛋白表達(dá)為陽性，而HEC-1A-pWPI組和HEC-1A組未檢測到LKB1基因蛋白的表達(dá)，說明上調(diào)LKB1基因的表達(dá)成功。見圖5。

3 討論

近年來子宮內(nèi)膜的發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈上升的趨勢，流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，其發(fā)病率與地區(qū)差異及種族有密切的關(guān)系，在北歐及北美地區(qū)的發(fā)病率最高，在某些歐美國家其發(fā)病率占女性生殖道惡性腫瘤的首位［4］。隨著子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率的不斷升高、癌基因及抑癌基因研究的深入開展，目前世界上對于子宮內(nèi)膜癌分子生物學(xué)發(fā)病機(jī)制的研究有了進(jìn)一步的認(rèn)識。迄今研究較多且得到公認(rèn)的主要有ER、PR、p53、DNA含量在子宮內(nèi)膜癌的異常表達(dá)［5］，但國內(nèi)有關(guān)LKB1基因與子宮內(nèi)膜癌分子生物學(xué)的發(fā)病研究尚無報道。

圖5 Western blot法檢測LKB1蛋白的表達(dá)注：A.HEC-1A-LKB1-pWPI組；B.HEC-1A-pWPI組；C.為HEC-1A組。

目前有研究發(fā)現(xiàn)，LKB1由433個氨基酸組成，位于人體基因染色體19p13.3，其編碼產(chǎn)物相對分子量為60 000KD的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，是腺苷酸激酶（AMPK）的上游激酶［6］。LKB1能夠通過激活A(yù)MPK，抑制mTor復(fù)合體，從而達(dá)到降低蛋白翻譯肌細(xì)胞的生長［7］。Contreras等［8］研究發(fā)現(xiàn)，在體內(nèi)或者生殖細(xì)胞中LKB1基因失活的雌性小鼠中，有＞50%的小鼠發(fā)生子宮內(nèi)膜癌，表明LKB1對子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展起到明顯的抑制作用［9］。

LKB1蛋白至少參與兩個不同潛在的重疊的生物學(xué)途徑。大部分研究表明LKB1基因缺失導(dǎo)致腫瘤的產(chǎn)生與細(xì)胞極性的缺失相關(guān)，而細(xì)胞極性的缺失與惡性腫瘤細(xì)胞的浸潤及增殖相關(guān)，這些特征與腺癌包括子宮內(nèi)膜腺癌的特征相符［10］。LKB1是AMPK的上游激酶，直接參與AMPK信號傳導(dǎo)通路的調(diào)控。在腫瘤細(xì)胞中，LKB1基因的缺失促進(jìn)了細(xì)胞的生長、增殖與腫瘤的發(fā)生。LKB1是通過對AMPK及mTOR信號傳導(dǎo)通路的調(diào)控，還可以調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞緊密鏈接，有助于維持上皮細(xì)胞極性。

慢病毒載體來源于人類免疫缺陷病毒-1，具有感染目的細(xì)胞后不會再感染其他細(xì)胞的特性［11］。由于慢病毒屬于假性病毒，其毒性基因已經(jīng)被剔除，并且被外源性目的基因取代。其具有轉(zhuǎn)移基因片段容量大、不容易誘發(fā)宿主免疫反應(yīng)的特效，能夠整合到宿主細(xì)胞的基因組，且不會利用宿主細(xì)胞產(chǎn)生新的病毒顆粒，既能感染分裂細(xì)胞，也能感染不分裂細(xì)胞［12，13］。慢病毒能夠穩(wěn)定持久地表達(dá)目的基因，目前已被廣泛應(yīng)用于基因功能及治療的研究中。pWPI慢病毒載體質(zhì)粒是第二代慢病毒載體，擁有綠色熒光蛋白基因以及氨芐青霉素抗性基因，均可作為篩選標(biāo)記［14］。

本課題組前期的研究結(jié)果表明，在子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞中沒有LKB1基因的表達(dá)，因此我們選用HEC-1A細(xì)胞作為研究對象，構(gòu)建了LKB1/pWPI慢病毒載體表達(dá)質(zhì)粒，與包裝質(zhì)粒、包膜質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞。將轉(zhuǎn)染后的質(zhì)粒在熒光顯微鏡下觀察，能夠看到綠色熒光蛋白的表達(dá)。收集慢病毒顆粒后感染靶細(xì)胞HEC-1A進(jìn)行熒光定量PCR、Western blot法檢測，發(fā)現(xiàn)LKB1在HEC-1A細(xì)胞中呈高表達(dá)狀態(tài)，說明本實驗成功構(gòu)建、包裝慢病毒載體表達(dá)質(zhì)粒，并且能夠有效地感染HEC-1A細(xì)胞。本實驗通過成功構(gòu)建穩(wěn)定、高效的LKB1/pWPI重組慢病毒表達(dá)質(zhì)粒，并以慢病毒載體介導(dǎo)LKB1基因轉(zhuǎn)染到LKB1表達(dá)缺失的子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞中，為進(jìn)一步研究LKB1基因的作用機(jī)制及其與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系、探討子宮內(nèi)膜癌新的治療方法奠定了基礎(chǔ)。

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［2014-04-15收稿］［2014-05-21修回］［編輯 阮萃才］

Lentivirus-mediated LKB1 gene expression in HEC-1A endometrial cancer cells

TANG Qiao-qiao△，SONG Yue△，LONG Yin，ZHANG Jie-qing，SONG Hong-lin，ZHAO Bing-bing（Department of Gynecology Oncology，Affiliated Tumor Hospital of Guangxi Medical University；△Graduate School of Guangxi Medical University，Nanning 530021，P.R. China）
Corresponding auther：SONG Hong-lin.E-mail：gxwskj@163.com

Objective To investigate lentivirus-mediated LKB1 gene overexpression in HEC-1A endometrial cancer cells as a basis for future research.Methods The LKB1 gene was subcloned by RT-PCR from a cDNA plasmid into a lentiviral pWPI expression vector，generating the plasmid LKB1/pWPI.This plasmid was co-transfected into 293T cells together with the packaging plasmid pCMV-Dr8.74 and pMD2.G.The recombinant virus was used to infect HEC-1A cells，and LKB1 expression was measured using realtime quantitative PCR（qRT-PCR）and Western blotting.Results We succeeded in constructing the recombinant plasmid LKB1/ pWPI and packaging it into lentiviral particles in 293T cells.This virus infected HEC-1A cells efficiently，leading to higher LKB1 expression than in the parental cells or untransfected controls（P＜0.01）.Conclusion The LKB1 gene has been incorporated into a lentiviral expression vector，allowing studies of its effects on the development of endometrial cancer.

Uterine neoplasm；Endometrial cancer；LKB1；Lentivirus

R737.33

A

1674-5671（2014）02-06

10.3969/j.issn.1674-5671.2014.02.07

廣西研究生教育創(chuàng)新計劃項目（1059820111002D29）【通信作者】宋紅林。E-mail：shlt03@aliyun.com