十二卷屬花卉糯玉露組培體系建立試驗(yàn)初報(bào)

李曉 王婷婷 陳惠哲 廖智慧 于蘭芳 陳志軍

摘 要 以十二卷屬花卉糯玉露葉片、基部分株葉片、花序做為外植體，以MS為基本培養(yǎng)基，研究植物激素組合和濃度對(duì)其誘導(dǎo)分化、增殖培養(yǎng)、生根的影響，試圖建立起糯玉露組培快繁體系。結(jié)果表明，最佳外植體為其花序，其誘導(dǎo)率最高為74%;最佳增殖培養(yǎng)基為MS+0.7 mg·L-16-BA+0.1 ?mg·L-1NAA，增殖率為650%;最適的生根培養(yǎng)基為MS+0.3 mg·L-16-BA+0.3 mg·L-1NAA，平均生根數(shù)為5.36條，生根率為100.00%。

關(guān)鍵詞 十二卷屬;多肉植物;組織培養(yǎng);快繁體系

中圖分類號(hào)：S682 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2021.27.025

玉露（Hamworthia cooperi M. B. Bayer）為天門冬目阿福花科十二卷屬下的中小型、多年生多肉植物[1]。糯玉露作為栽培品種，植株矮小、緊湊扁平、葉片肉質(zhì)、粗短飽滿、頂端半透明且窗型巨大，深受廣大消費(fèi)者的喜愛。糯玉露生長(zhǎng)周期長(zhǎng)，自交不親和，種子繁殖困難，傳統(tǒng)采用分株繁殖和種子繁殖，繁殖系數(shù)低、擴(kuò)繁速度慢，難以滿足龐大的市場(chǎng)需求。其他栽培品種，如“姬玉露”“冰燈玉露”“毛玉露”“帝玉露”及“宮燈玉露”等的組織培養(yǎng)已有報(bào)道，但是關(guān)于糯玉露的相關(guān)報(bào)道較少。

通過不同外植體的選擇、不同培養(yǎng)階段、不同激素的組合的研究，探索糯玉露組培與快繁體系，以滿足鄉(xiāng)村振興和農(nóng)業(yè)供給側(cè)改革的技術(shù)需求。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)時(shí)間、地點(diǎn)和材料

實(shí)驗(yàn)在2020年7月開始，實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)在衡水職業(yè)技術(shù)學(xué)院花藝實(shí)訓(xùn)室。供試材料來(lái)自衡水市鄧莊農(nóng)業(yè)科技示范園溫室。選擇株型好、無(wú)病蟲害、生長(zhǎng)健壯具有花序的糯玉露植株為母本，選取糯玉露葉片、基部分株葉片、花序3種器官組織作為外植體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 培養(yǎng)材料的選擇與準(zhǔn)備

將糯玉露整個(gè)植株從基部小心切下，在流水下沖洗20 min，無(wú)菌操作下，將葉片、基部分株葉片和花序從植株上切下，用75%酒精浸泡20 s，再用0.1%HgCl2進(jìn)行10 min振蕩消毒處理，并在無(wú)菌培養(yǎng)皿中分割成適宜接種的小塊，然后用無(wú)菌水沖洗5次，將3種組織分別接種于MS培養(yǎng)基上，每個(gè)組織接種25瓶，每瓶1個(gè)外植體。接種后15 d統(tǒng)計(jì)外植體的污染率和成活率，分析外植體的最優(yōu)選擇。

1.2.2 愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)

選取未污染的糯玉露愈傷組織，接種至1～6號(hào)培養(yǎng)基中（見表2），研究細(xì)胞分裂素（6-BA，KT）和生長(zhǎng)素NAA對(duì)糯玉露誘導(dǎo)愈傷組織的影響。每個(gè)處理設(shè)置50個(gè)外植體開展實(shí)驗(yàn)。接種15 d后觀察愈傷組織誘導(dǎo)情況，統(tǒng)計(jì)愈傷組織數(shù)目。

1.2.3 增殖培養(yǎng)

糯玉露花序在不同激素組合的培養(yǎng)基上進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，15 d表現(xiàn)為花序一端開始膨大為愈傷組織;愈傷組織在形成后，繼續(xù)在原培養(yǎng)基中培養(yǎng)，20 d開始，表面上方或周圍出現(xiàn)綠色芽點(diǎn)，之后在突起處形成1～2個(gè)葉形不定芽，45 d時(shí)長(zhǎng)成可分為3～10枝的叢生小苗。將誘導(dǎo)形成的不定芽取出并分割成單個(gè)芽苗，轉(zhuǎn)入7～12號(hào)6種培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，分別統(tǒng)計(jì)數(shù)量。

1.2.4 生根培養(yǎng)

將增殖培養(yǎng)的叢生芽進(jìn)行分割，選取較健壯的芽苗插入13～21號(hào)9種培養(yǎng)基中，置光照培養(yǎng)架上培養(yǎng)30 d，觀察不定根的生長(zhǎng)情況。

1.2.5 培養(yǎng)條件及培養(yǎng)基

培養(yǎng)室條件為：溫度25（±2） ℃，濕度50%～

60%，照度2 500 lx，每天光照時(shí)間12 h[2];培養(yǎng)基除特別注明外均為MS培養(yǎng)基，蔗糖0.3%，瓊脂0.8%，pH值5.8±0.1。

2 結(jié)果與分析

2.1 糯玉露組培體系外植體的選擇

由表1可知，在接種15 d后，3種外植體的培養(yǎng)物表現(xiàn)差異很大。其中以花序作為外植體的培養(yǎng)物的污染率最低;而基部分株葉片的滅菌效果最差，容易污染;葉片作為外植體表現(xiàn)居中，其中有2塊葉片外植體未染菌，但是枯萎死亡，可能是由于糯玉露葉片本身水分含量過多導(dǎo)致的[3]。綜合考慮，在建立糯玉露組培快繁體系時(shí)，以其花序作為外植體是相對(duì)最優(yōu)選擇，且不推薦選用基部分株葉片作為快繁外植體。

2.2 不同激素組合及濃度對(duì)愈傷組織形成的影響

糯玉露花序愈傷組織在不同激素組合的培養(yǎng)基上進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，15 d表現(xiàn)為花序一端開始膨大，形成黃綠色不規(guī)則疏松突起;30 d天左右形成大塊愈傷組織。從表2可知，糯玉露花序在6種MS培養(yǎng)基中的5種上都產(chǎn)生了愈傷組織，在MS+1.5 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1NAA培養(yǎng)基上，所有的組織均褐變并死亡，沒有產(chǎn)生足夠強(qiáng)壯的愈傷組織。在其他5種組合中，1號(hào)培養(yǎng)基表現(xiàn)得最好，愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)到74%。所以，MS+0.7 mg·L-16-BA+1.0 mg·L-1KT+0.1 mg·L-1NAA是糯玉露愈傷組織誘導(dǎo)的最適培養(yǎng)基。

2.3 不同激素組合及濃度對(duì)不定芽增殖的影響

從表3可知6-BA對(duì)愈傷組織的刺激作用明顯，添加了6-BA的培養(yǎng)基誘導(dǎo)出了更多的叢生芽，同時(shí)KT對(duì)叢生芽的增殖有抑制作用。從迅速擴(kuò)大種植規(guī)模的角度考慮，MS+0.7 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1NAA是糯玉露花葶愈傷組織分化叢生芽的相對(duì)最優(yōu)培養(yǎng)基[4]。

2.4 不同激素濃度對(duì)糯玉露生根的影響

將增殖培養(yǎng)產(chǎn)生的叢生苗分割，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上（13～21號(hào)，見表4），在15 d后觀察發(fā)現(xiàn)有根萌生，在30 d進(jìn)行生根數(shù)目和植株?duì)顟B(tài)情況統(tǒng)計(jì)，當(dāng)培養(yǎng)基為MS+0.3 mg·L-16-BA+0.3 mg·L-1NAA時(shí)，生根率最高，達(dá)100%，是最佳的生根培養(yǎng)基。在生根苗長(zhǎng)到5片葉子以上，葉片肥厚，根系粗壯時(shí)就可以揭開封口膜，在組培室進(jìn)行煉苗培養(yǎng)。

2.5 馴化移栽

在揭開封口膜5 d后，取出植株，在流動(dòng)的自來(lái)水下洗凈瓊脂培養(yǎng)基。將洗凈的植株放在鋪有滅菌干燥報(bào)紙的搪瓷盤上，放在通風(fēng)陰涼處放置12 h，然后栽種在滅菌好的基質(zhì)中（蛭石和草炭體積比1∶3）[5]。為防止?fàn)€根，應(yīng)避免積水，在保持基質(zhì)濕潤(rùn)的前提下，見干見濕，不干不澆。為防止糯玉露幼苗曬傷，應(yīng)將植株放置在受控光照環(huán)境下，避免陽(yáng)光直射。每月施1次薄肥，滿3個(gè)月即可達(dá)到商品標(biāo)準(zhǔn)，總體馴化成活率在90%以上。

3 結(jié)論與討論

為探索外植體的選擇，在葉片、基部分株葉片和花序中開展了外植體選擇實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，花序作為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)，污染率最低，成活率最高。植物激素是植物細(xì)胞脫分化和再分化的關(guān)鍵因子，在愈傷誘導(dǎo)、不定芽分化、增殖和生根中，本實(shí)驗(yàn)設(shè)置了多種激素組合和不同濃度，探索出了一整套糯玉露的組培快繁體系。

綜上所述，結(jié)合前人研究成果，研究利用組織培養(yǎng)方法成功獲得了糯玉露的組培苗，建立了組培快繁生產(chǎn)程序，也為十二卷屬多肉植物的組培苗規(guī)?；a(chǎn)提供了參考，具有較好應(yīng)用前景。

參考文獻(xiàn)：

[1] 郭生虎，朱永興，關(guān)雅靜.百合科十二卷屬玉露的組培快繁關(guān)鍵技術(shù)研究[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2016，32（34）：85-89.

[2] 郜李彬，曹征宇，顧韻莉，等.玉露增殖培養(yǎng)基配方篩選及光照時(shí)間研究[J].上海農(nóng)業(yè)科技，2017（6）：109.

[3] 陳紅剛，高素芳，楊韜.玉露的組織培養(yǎng)與快速擴(kuò)繁[J].北方園藝，2011（12）：101-102.

[4] 高越，王婭欣，孫濤，等.毛玉露的組織培養(yǎng)與快速繁殖[J].生物學(xué)通報(bào)，2010，45（6）：54-55.

[5] 張景新，劉艷軍，楊靜慧，等.激素對(duì)冰燈玉露不定芽和不定根分化的影響[J].天津農(nóng)林科技，2016（4）：4-6.

（責(zé)任編輯：趙中正）

收稿日期：2021-08-13

基金項(xiàng)目：衡水市科技計(jì)劃項(xiàng)目（2019014045Z）。

作者簡(jiǎn)介：李曉（1986—），男，河北桃城人，碩士，講師，研究方向?yàn)樯锒鄻有?。E-mail：359617298@qq.com。