HPLC法對(duì)唐古特瑞香中瑞香素和芫花素含量的測(cè)定

文慧，盧永昌

摘要：建立同時(shí)測(cè)定唐古特瑞香（Daphne tangutica）中瑞香素和芫花素的含量的HPLC方法。采用Agilent ZORBAX（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱；檢測(cè)波長為360 nm；柱溫為30 ℃。結(jié)果表明，瑞香素在0.115～0.920 μg內(nèi)線性關(guān)系良好（R2=0.999 9），其平均回收率為99.19%，RSD=1.2%（n=9）。芫花素在0.011～0.088 μg內(nèi)線性關(guān)系良好（R2=0.999 9），其平均回收率為100.25%，RSD=1.5%（n=9）。該方法樣品處理簡單、準(zhǔn)確度高、分離效果好，適用于該藥的成分測(cè)定。

關(guān)鍵詞： 高效液相色譜；瑞香素；芫花素；唐古特瑞香（Daphne tangutica）

中圖分類號(hào)：O657.32 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）07-1654-03

Determination of Daphnetin and Genkwanin in Daphne tangutica by HPLC Method

WEN Hui， LU Yong-chang

（College of Life Science and Chemistry， Qinghai University for Nationalities， Xining 810007， Qinghai， China）

Abstract： The high performance liquid chromatography（HPLC） was used to simultaneously determine daphnetin and genkwanin in Daphne tangutica. The samples were separated on Agilent ZORBAX（4.6 mm×250 mm，5 μm） column. Detection wavelength was 360 nm and column temperature was 30 ℃. The results showed that the linear range of daphnetin was good in 0.115～0.920 μg（R2=0.999 9） with the average recovery of 99.19% and RSD of 1.2%（n=9）. The linear range of genkwanin was good in 0.011～0.088 μg（R2=0.999 9） with the average recovery of 100.25% and RSD of 1.5%（n=9）. This method was simple， accurate，and suitable for determining components and quantities of daphnetin and genkwanin in Daphne tangutica.

Key words： HPLC； daphnetin； genkwanin； Daphne tangutica

唐古特瑞香（Daphne tangutica）為瑞香科植物的干燥根及莖[1]，主要分布在青海果洛、玉樹、黃南、海北等藏族自治州，生長在海拔2 700～3 100 m的林緣及灌叢中[2]，系傳統(tǒng)藏藥省相那瑪。常用于治療風(fēng)濕痹痛、跌打損傷、風(fēng)濕及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病[3]。其主要化學(xué)成分為棕櫚酸、月桂酸、 β-谷甾醇、7-甲氧基-8-羥基香豆素、瑞香素、芫花素、羥基芫花素、對(duì)羥基苯甲酸等[4，5]。

對(duì)于唐古特瑞香中含量分析僅見瑞香素的報(bào)道[5]，芫花素尚未見報(bào)道，本研究采用HPLC梯度洗脫法同時(shí)檢測(cè)唐古特瑞香中的瑞香素和芫花素的含量。試驗(yàn)結(jié)果證明，該方法可操作性強(qiáng)、檢測(cè)靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確可靠、重現(xiàn)性好，能有效地控制藥品質(zhì)量。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 1200 型高效液相色譜儀（配備自動(dòng)進(jìn)樣器、在線脫氣機(jī)、四元梯度泵、柱溫箱、DAD檢測(cè)器、Agilent 1200色譜工作站）；KQ-300B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；瑞香素對(duì)照品（成都曼思特生物科技有限公司，批號(hào)MUST-12071104，純度≥98%），芫花素對(duì)照品（成都曼思特生物科技有限公司，批號(hào)MUST-12073001，純度≥98%），甲醇為色譜純?cè)噭?，其他試劑均為分析純，水為去離子水。

1.2 色譜條件[6-8]

Agilent ZORBAX柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相：甲醇（A）-0.04%磷酸水溶液（B）進(jìn)行梯度洗脫：0～10 min，A∶B（39∶61，V/V）；10～15 min，調(diào)節(jié)流動(dòng)相A∶B（40∶60，V/V）；15～18 min，調(diào)節(jié)流動(dòng)相A∶B （69∶31，V/V）；18～23 min，調(diào)節(jié)流動(dòng)相A∶B （72∶28，V/V）；23～40 min，調(diào)節(jié)流動(dòng)相A∶B （90∶10，V/V）；檢測(cè)波長為360 nm，柱溫為30 ℃，流速為1 mL/min。

1.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取瑞香素對(duì)照品適量，加甲醇制成0.460 mg/mL的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液；精密稱取芫花素對(duì)照品適量，加甲醇制成0.440 mg/mL的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液；再精密量取瑞香素、芫花素對(duì)照品儲(chǔ)備液，加甲醇稀釋至刻度得混合后瑞香素、芫花素的濃度分別為0.022、0.023 mg/mL。

1.4 供試品溶液的制備[9]

1.4.1 提取溶劑的選擇[10] 取本品粗粉約0.5 g，2份，加入錐形瓶中，分別準(zhǔn)確加入70%乙醇（V/V，下同）25 mL、70%甲醇（V/V）25 mL，分別稱定重量，超聲處理40 min，靜置至室溫，再稱定重量，補(bǔ)足損失的重量，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，精密吸取上述兩種供試品溶液各3 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積為指標(biāo)。結(jié)果表明，用兩種溶劑提取時(shí)，瑞香素的峰面積接近，但是芫花素的峰面積相差較大，所以以芫花素的峰面積為指標(biāo)比較不同溶劑的提取效果。結(jié)果表明，乙醇的提取效果較好。故選用乙醇為提取溶劑。

1.4.2 提取溶劑濃度的選擇 取本品粗粉約0.5 g，2份，加入錐形瓶中，分別準(zhǔn)確加入95%乙醇25 mL、70%乙醇25 mL、50%乙醇25 mL，分別稱定重量，超聲處理40 min，靜置至室溫，再稱定重量，補(bǔ)足損失的重量，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，精密吸取上述供試品溶液各3 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積為指標(biāo)。結(jié)果表明，瑞香素和芫花素峰面積表明用70%濃度的乙醇溶液提取效果最好。故選用70%乙醇為提取溶劑。

1.4.3 提取方法的選擇 取本品粗粉約0.5 g，2份，加入錐形瓶中，分別準(zhǔn)確加入70%乙醇25 mL，稱定重量，分別超聲處理40 min，加熱回流，靜置至室溫，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，精密吸取供試品溶液各3 μL，注入液相色譜儀，以峰面積為指標(biāo)。結(jié)果表明，用加熱超聲方法提取效果最好。故選用加熱超聲為提取方法。

1.4.4 提取時(shí)間的選擇 取本品粗粉約0.5 g，3份，加入錐形瓶中，分別精密加入70%乙醇25 mL，稱定重量，加熱超聲40、30、20 min，靜置至室溫，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，濾過，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，精密吸取供試品溶液3 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，以芫花素和瑞香素峰面積為指標(biāo)，超聲40 min時(shí)，兩者含量最高。故選擇40 min為提取時(shí)間。

1.4.5 供試品溶液的制備 取本品粗粉約0.5 g，加入錐形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，稱定重量，加熱超聲40 min，等至室溫，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，待測(cè)。見圖1。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性范圍的考察

分別精密吸取瑞香素對(duì)照品溶液（0.046 mg/mL）和芫花素對(duì)照品溶液（0.044 mg/mL）各2.5、5.0、10.0、15.0、20.0 μL，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。分別以瑞香素與芫花素的峰面積為縱坐標(biāo)，相對(duì)應(yīng)的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性擬合。瑞香素的回歸方程y=3 262.4x+7.221 7，（R2=0.999 9）；芫花素的回歸方程為y=3 904.2x+2.621 7，（R2=0.999 9）。表明瑞香素在0.115～0.920 μg，芫花素在0.011～0.088 μg內(nèi)線性關(guān)系良好。見圖1。

2.2 精密度

取瑞香素和芫花素的混合對(duì)照品，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣10 μL，瑞香素峰面積的RSD為1.10%，芫花素峰面積的RSD為0.97%，表明儀器精密度良好。

2.3 穩(wěn)定性

精密吸取供試液溶液10 μL，分別在0、2、4、6、12、16 h重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定瑞香素和芫花素峰面積，結(jié)果表明，供試品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定，瑞香素和芫花素峰面積RSD分別為1.25%、1.20%。

2.4 重復(fù)性

取同一批唐古特瑞香樣品，均勻混合后精密稱取6份，每份約0.5 g，按上述方法制備，分別進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積，并計(jì)算含量。瑞香素的平均含量為0.360%，RSD為0.76%，芫花素的平均含量為0.025%，RSD為1.00%，表明方法重現(xiàn)性好。

2.5 加樣回收試驗(yàn)

取已知瑞香素和芫花素含量的唐古特瑞香樣品9份，每份約0.25 g，精密稱定，分別在上述9份藥材中加入瑞香素的對(duì)照品溶液和芫花素對(duì)照品溶液，按以上方法進(jìn)行處理，制得供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，記錄瑞香素和芫花素的峰面積，計(jì)算含量，并計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。瑞香素和芫花素的回收率平均值分別為99.19%、100.25%、RSD分別為1.20%、1.50%，表明加樣回收率好。

2.6 樣品測(cè)定

取各供試品0.5 g，按“1.4.5”項(xiàng)的方法制得樣品溶液，以上述色譜條件對(duì)5個(gè)批次的樣品進(jìn)行瑞香素和芫花素含量測(cè)定，結(jié)果見表2。瑞香素和芫花素的含量平均值分別為0.340%、0.027%。

3 小結(jié)與討論

唐古特瑞香主要分布在青海果洛、玉樹、黃南、海北等藏族自治州。生長在海拔2 700～3 100 m的林緣及灌叢中[2]，系傳統(tǒng)藏藥省相那瑪。具有祛風(fēng)除濕，止痛散瘀等功效，治風(fēng)濕痹痛、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛[3]。

比較了甲醇和乙醇不同溶劑的提取效率，乙醇的提取效果較好。也比較了不同濃度下的乙醇提取，70%的乙醇提取方法較好。同時(shí)運(yùn)用超聲和回流兩種方式進(jìn)行提取，用加熱超聲提取效果較好，所以選取超聲提取法。瑞香素在唐古特瑞香中含量較高，芫花素含量較低。采用HPLC梯度洗脫法同時(shí)測(cè)定瑞香素和芫花素的含量，方法簡便，重現(xiàn)性好，快速分離，有助于藥材質(zhì)量控制更加完善。文獻(xiàn)中鮮見唐古特瑞香中芫花素的含量的測(cè)定的報(bào)道。本研究結(jié)果表明，該植物中總?cè)鹣闼睾蛙净ㄋ氐暮科骄捣謩e為0.340%、0.027%。

參考文獻(xiàn)：

[1] 青海省藥品檢驗(yàn)所，青海省藏醫(yī)藥研究所.中國藏藥（第一卷）[M].上海.上海科技出版社，1996：545-546.

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[3] 張 薇，蘇 娟，扈曉佳，等.中藥祖師麻的三種基源植物的化學(xué)及藥理活性[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2007，38（3）：233.

[4] 袁小紅，徐春霞，周 敏，等.唐古特瑞香化學(xué)成分的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2007（19）：55-58.

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[10] 董嘉德.超聲技術(shù)在中藥提取中的應(yīng)用[J].中國藥業(yè).2002， 11（11）：55.

1.4.2 提取溶劑濃度的選擇 取本品粗粉約0.5 g，2份，加入錐形瓶中，分別準(zhǔn)確加入95%乙醇25 mL、70%乙醇25 mL、50%乙醇25 mL，分別稱定重量，超聲處理40 min，靜置至室溫，再稱定重量，補(bǔ)足損失的重量，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，精密吸取上述供試品溶液各3 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積為指標(biāo)。結(jié)果表明，瑞香素和芫花素峰面積表明用70%濃度的乙醇溶液提取效果最好。故選用70%乙醇為提取溶劑。

1.4.3 提取方法的選擇 取本品粗粉約0.5 g，2份，加入錐形瓶中，分別準(zhǔn)確加入70%乙醇25 mL，稱定重量，分別超聲處理40 min，加熱回流，靜置至室溫，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，精密吸取供試品溶液各3 μL，注入液相色譜儀，以峰面積為指標(biāo)。結(jié)果表明，用加熱超聲方法提取效果最好。故選用加熱超聲為提取方法。

1.4.4 提取時(shí)間的選擇 取本品粗粉約0.5 g，3份，加入錐形瓶中，分別精密加入70%乙醇25 mL，稱定重量，加熱超聲40、30、20 min，靜置至室溫，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，濾過，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，精密吸取供試品溶液3 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，以芫花素和瑞香素峰面積為指標(biāo)，超聲40 min時(shí)，兩者含量最高。故選擇40 min為提取時(shí)間。

1.4.5 供試品溶液的制備 取本品粗粉約0.5 g，加入錐形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，稱定重量，加熱超聲40 min，等至室溫，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，待測(cè)。見圖1。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性范圍的考察

分別精密吸取瑞香素對(duì)照品溶液（0.046 mg/mL）和芫花素對(duì)照品溶液（0.044 mg/mL）各2.5、5.0、10.0、15.0、20.0 μL，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。分別以瑞香素與芫花素的峰面積為縱坐標(biāo)，相對(duì)應(yīng)的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性擬合。瑞香素的回歸方程y=3 262.4x+7.221 7，（R2=0.999 9）；芫花素的回歸方程為y=3 904.2x+2.621 7，（R2=0.999 9）。表明瑞香素在0.115～0.920 μg，芫花素在0.011～0.088 μg內(nèi)線性關(guān)系良好。見圖1。

2.2 精密度

取瑞香素和芫花素的混合對(duì)照品，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣10 μL，瑞香素峰面積的RSD為1.10%，芫花素峰面積的RSD為0.97%，表明儀器精密度良好。

2.3 穩(wěn)定性

精密吸取供試液溶液10 μL，分別在0、2、4、6、12、16 h重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定瑞香素和芫花素峰面積，結(jié)果表明，供試品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定，瑞香素和芫花素峰面積RSD分別為1.25%、1.20%。

2.4 重復(fù)性

取同一批唐古特瑞香樣品，均勻混合后精密稱取6份，每份約0.5 g，按上述方法制備，分別進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積，并計(jì)算含量。瑞香素的平均含量為0.360%，RSD為0.76%，芫花素的平均含量為0.025%，RSD為1.00%，表明方法重現(xiàn)性好。

2.5 加樣回收試驗(yàn)

取已知瑞香素和芫花素含量的唐古特瑞香樣品9份，每份約0.25 g，精密稱定，分別在上述9份藥材中加入瑞香素的對(duì)照品溶液和芫花素對(duì)照品溶液，按以上方法進(jìn)行處理，制得供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，記錄瑞香素和芫花素的峰面積，計(jì)算含量，并計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。瑞香素和芫花素的回收率平均值分別為99.19%、100.25%、RSD分別為1.20%、1.50%，表明加樣回收率好。

2.6 樣品測(cè)定

取各供試品0.5 g，按“1.4.5”項(xiàng)的方法制得樣品溶液，以上述色譜條件對(duì)5個(gè)批次的樣品進(jìn)行瑞香素和芫花素含量測(cè)定，結(jié)果見表2。瑞香素和芫花素的含量平均值分別為0.340%、0.027%。

3 小結(jié)與討論

唐古特瑞香主要分布在青海果洛、玉樹、黃南、海北等藏族自治州。生長在海拔2 700～3 100 m的林緣及灌叢中[2]，系傳統(tǒng)藏藥省相那瑪。具有祛風(fēng)除濕，止痛散瘀等功效，治風(fēng)濕痹痛、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛[3]。

比較了甲醇和乙醇不同溶劑的提取效率，乙醇的提取效果較好。也比較了不同濃度下的乙醇提取，70%的乙醇提取方法較好。同時(shí)運(yùn)用超聲和回流兩種方式進(jìn)行提取，用加熱超聲提取效果較好，所以選取超聲提取法。瑞香素在唐古特瑞香中含量較高，芫花素含量較低。采用HPLC梯度洗脫法同時(shí)測(cè)定瑞香素和芫花素的含量，方法簡便，重現(xiàn)性好，快速分離，有助于藥材質(zhì)量控制更加完善。文獻(xiàn)中鮮見唐古特瑞香中芫花素的含量的測(cè)定的報(bào)道。本研究結(jié)果表明，該植物中總?cè)鹣闼睾蛙净ㄋ氐暮科骄捣謩e為0.340%、0.027%。

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[7] 王紅剛.HPLC法測(cè)定沉香葉中芫花素含量[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2008，14（3）：70.

[8] 張保獻(xiàn)，原思通，夏 沖.HPLC法測(cè)定芫花中芫花素的含量[J].中國中藥雜志，1996，21（4）：237-253.

[9] 楊秀娟，洪燕龍，吳 飛，等.HPLC測(cè)定鉤藤中鉤藤堿和異鉤藤堿的方法學(xué)探討[J].中國中藥雜志，2013，38（5）：720-724.

[10] 董嘉德.超聲技術(shù)在中藥提取中的應(yīng)用[J].中國藥業(yè).2002， 11（11）：55.

1.4.2 提取溶劑濃度的選擇 取本品粗粉約0.5 g，2份，加入錐形瓶中，分別準(zhǔn)確加入95%乙醇25 mL、70%乙醇25 mL、50%乙醇25 mL，分別稱定重量，超聲處理40 min，靜置至室溫，再稱定重量，補(bǔ)足損失的重量，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，精密吸取上述供試品溶液各3 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積為指標(biāo)。結(jié)果表明，瑞香素和芫花素峰面積表明用70%濃度的乙醇溶液提取效果最好。故選用70%乙醇為提取溶劑。

1.4.3 提取方法的選擇 取本品粗粉約0.5 g，2份，加入錐形瓶中，分別準(zhǔn)確加入70%乙醇25 mL，稱定重量，分別超聲處理40 min，加熱回流，靜置至室溫，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，精密吸取供試品溶液各3 μL，注入液相色譜儀，以峰面積為指標(biāo)。結(jié)果表明，用加熱超聲方法提取效果最好。故選用加熱超聲為提取方法。

1.4.4 提取時(shí)間的選擇 取本品粗粉約0.5 g，3份，加入錐形瓶中，分別精密加入70%乙醇25 mL，稱定重量，加熱超聲40、30、20 min，靜置至室溫，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，濾過，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，精密吸取供試品溶液3 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，以芫花素和瑞香素峰面積為指標(biāo)，超聲40 min時(shí)，兩者含量最高。故選擇40 min為提取時(shí)間。

1.4.5 供試品溶液的制備 取本品粗粉約0.5 g，加入錐形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，稱定重量，加熱超聲40 min，等至室溫，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，待測(cè)。見圖1。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性范圍的考察

分別精密吸取瑞香素對(duì)照品溶液（0.046 mg/mL）和芫花素對(duì)照品溶液（0.044 mg/mL）各2.5、5.0、10.0、15.0、20.0 μL，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。分別以瑞香素與芫花素的峰面積為縱坐標(biāo)，相對(duì)應(yīng)的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性擬合。瑞香素的回歸方程y=3 262.4x+7.221 7，（R2=0.999 9）；芫花素的回歸方程為y=3 904.2x+2.621 7，（R2=0.999 9）。表明瑞香素在0.115～0.920 μg，芫花素在0.011～0.088 μg內(nèi)線性關(guān)系良好。見圖1。

2.2 精密度

取瑞香素和芫花素的混合對(duì)照品，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣10 μL，瑞香素峰面積的RSD為1.10%，芫花素峰面積的RSD為0.97%，表明儀器精密度良好。

2.3 穩(wěn)定性

精密吸取供試液溶液10 μL，分別在0、2、4、6、12、16 h重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定瑞香素和芫花素峰面積，結(jié)果表明，供試品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定，瑞香素和芫花素峰面積RSD分別為1.25%、1.20%。

2.4 重復(fù)性

取同一批唐古特瑞香樣品，均勻混合后精密稱取6份，每份約0.5 g，按上述方法制備，分別進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積，并計(jì)算含量。瑞香素的平均含量為0.360%，RSD為0.76%，芫花素的平均含量為0.025%，RSD為1.00%，表明方法重現(xiàn)性好。

2.5 加樣回收試驗(yàn)

取已知瑞香素和芫花素含量的唐古特瑞香樣品9份，每份約0.25 g，精密稱定，分別在上述9份藥材中加入瑞香素的對(duì)照品溶液和芫花素對(duì)照品溶液，按以上方法進(jìn)行處理，制得供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，記錄瑞香素和芫花素的峰面積，計(jì)算含量，并計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。瑞香素和芫花素的回收率平均值分別為99.19%、100.25%、RSD分別為1.20%、1.50%，表明加樣回收率好。

2.6 樣品測(cè)定

取各供試品0.5 g，按“1.4.5”項(xiàng)的方法制得樣品溶液，以上述色譜條件對(duì)5個(gè)批次的樣品進(jìn)行瑞香素和芫花素含量測(cè)定，結(jié)果見表2。瑞香素和芫花素的含量平均值分別為0.340%、0.027%。

3 小結(jié)與討論

唐古特瑞香主要分布在青海果洛、玉樹、黃南、海北等藏族自治州。生長在海拔2 700～3 100 m的林緣及灌叢中[2]，系傳統(tǒng)藏藥省相那瑪。具有祛風(fēng)除濕，止痛散瘀等功效，治風(fēng)濕痹痛、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛[3]。

比較了甲醇和乙醇不同溶劑的提取效率，乙醇的提取效果較好。也比較了不同濃度下的乙醇提取，70%的乙醇提取方法較好。同時(shí)運(yùn)用超聲和回流兩種方式進(jìn)行提取，用加熱超聲提取效果較好，所以選取超聲提取法。瑞香素在唐古特瑞香中含量較高，芫花素含量較低。采用HPLC梯度洗脫法同時(shí)測(cè)定瑞香素和芫花素的含量，方法簡便，重現(xiàn)性好，快速分離，有助于藥材質(zhì)量控制更加完善。文獻(xiàn)中鮮見唐古特瑞香中芫花素的含量的測(cè)定的報(bào)道。本研究結(jié)果表明，該植物中總?cè)鹣闼睾蛙净ㄋ氐暮科骄捣謩e為0.340%、0.027%。

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