復方參花搽劑的體外抑菌試驗及初步臨床觀察*

高 云 周慶秋

(泰山醫(yī)學院附屬泰山醫(yī)院，山東 泰安 271000)

復方參花搽劑是泰安市中心醫(yī)院在原制劑參花搽劑基礎上改進處方及工藝而成的新制劑，主要有苦參、金銀花、黃柏、白鮮皮、蛇床子、白芷、地膚子、龍膽草等八味藥材組成，有清熱燥濕、抗菌止癢之功效，臨床上可用于治療蕁麻疹、濕疹、滲出性皮炎、皮膚瘙癢癥、皮癬等多種皮膚病。本文通過體外抑菌試驗及臨床療效觀察兩個方面進行初步研究，比較兩種制劑的藥效。

1 體外抑菌試驗

1.1儀器與試劑 標準菌株金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸桿菌ATCC25922、銅綠假單胞菌ATCC27853各6株，山東省臨床檢驗中心提供。試驗菌株變形桿菌6株由泰安市中心醫(yī)院院臨床標本分離，鑒定按照NCCLS文件方法進行。游標卡尺，規(guī)格(0～150 mm)×0.02 mm：安徽桐城量具廠。恒溫培養(yǎng)箱，規(guī)格GI6-2，美國SHELLAB。LB培養(yǎng)基粉，上海紀寧實業(yè)有限公司。LB營養(yǎng)瓊脂, 上海紀寧實業(yè)有限公司。恒溫氣浴搖床,規(guī)格THZ-82B，金壇市國旺實驗儀器廠。復方參花搽劑(自制，批號20130805)。參花搽劑(泰安市中心醫(yī)院提供，批號20130709)。

1.2方法與結(jié)果

1.2.1菌種保存 將取得的金黃色葡萄球菌、變形桿菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌分別進行菌種的保存。在超凈臺下，用經(jīng)過酒精燈反復灼燒的取菌環(huán)，選取一個生長良好的菌落，輕輕刮取菌落表面，再將取菌環(huán)在培養(yǎng)液中輕輕震蕩，使刮取的細菌充分散落在3 ml LB培養(yǎng)液中，置于37 ℃恒溫搖床，170 r/min培養(yǎng)6小時。取出后用移液器反復吹打混勻，取700 μl菌液，加入高壓過的甘油200 μl，放置于-20℃冰箱中封存。

1.2.2細菌培養(yǎng) 在超凈臺下，進行接種培養(yǎng)。用無菌接種環(huán)，挑取菌種冰晶，在3 ml LB培養(yǎng)液中輕輕震蕩，使菌種均勻分布于培養(yǎng)液中，37℃恒溫搖床170 r/min過夜培養(yǎng)16小時。隔日早晨進行轉(zhuǎn)種，無菌條件下，取過夜培養(yǎng)16 h后的細菌，以1∶100的比例加入新鮮LB培養(yǎng)液中次代培養(yǎng)，置轉(zhuǎn)速為170 r/min，37℃恒溫搖床培養(yǎng)2.5～3 h，使細菌達到對數(shù)生長期。

1.2.3抑菌活性測定 采用K-B紙片擴散法[1-3]，用移液器輕輕吹打混勻菌液，無菌涂抹棒沾取菌液，均勻涂抹在LB 瓊脂培養(yǎng)基表面，再分別將經(jīng)過浸泡的含復方參花搽劑、參花搽劑藥液的濾紙片(直徑0.4 cm)，輕輕放置在培養(yǎng)基表面。將培養(yǎng)皿放置于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)48 h，觀察并測量抑菌環(huán)直徑(d/mm)。用0.9%的生理鹽水浸泡的濾紙片作為陽性對照，用空白細菌培養(yǎng)皿作陰性對照。重復5次，取平均值(d/mm)。

1.2.5試驗結(jié)果 由表1結(jié)果可見，復方參花搽劑對金黃色葡萄球菌、變形桿菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌有明顯的抑制作用。金黃色葡萄球菌對復方參花搽劑有較強的敏感性，抑菌圈大于19 mm, 變形桿菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌對復方參花搽劑中度敏感。

參花搽劑對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑處于13～19 mm之間，屬于中度敏感，對變形桿菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌的抑菌圈直徑處于8～13 mm之間，屬低度敏感。

復方參花搽劑組F=106.580，P≤0.01，表明復方參花搽劑對四種細菌的抑菌作用差異有顯著統(tǒng)計學意義；參花搽劑組F=5.914，P≤0.01，表明參花搽劑對四種細菌的抑菌作用差異有顯著統(tǒng)計學意義。兩種藥液間對每種細菌的比較采用t檢驗，組間金黃色葡萄球菌t=14.93，P<0.01，說明復方參花搽劑與參花搽劑對金黃色葡萄球菌的抑菌作用差異有顯著統(tǒng)計學意義；組間變形桿菌t=5.946，P<0.01，說明復方參花搽劑與參花搽劑對變形桿菌的抑菌作用差異有顯著統(tǒng)計學意義；組間大腸桿菌t=9.334，P<0.01，說明復方參花搽劑與參花搽劑對大腸桿菌的抑菌作用差異有顯著統(tǒng)計學意義；組間銅綠假單胞菌t=4.306，P<0.01，說明復方參花搽劑與參花搽劑對銅綠假單胞菌的抑菌作用差異有顯著統(tǒng)計學意義。

表1 抑菌試驗結(jié)果

注：-表示無抑菌作用

1.3討論

復方參花搽劑對金黃色葡萄球菌、變形桿菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌有明顯的抑制作用，且對金黃色葡萄球菌的抑菌作用較強于對變形桿菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌的抑菌作用。說明復方參花搽劑對革蘭氏陽性菌(G+)有抑菌活性，對革蘭氏陰性菌(G-)亦有抑菌活性，且對G+菌的活性強于對G-菌的活性。臨床實踐表明，苦參具有清熱燥濕、祛風、殺蟲、止癢，用于濕疹、濕瘡、皮膚瘙癢等癥。金銀花清熱解毒[4]，所含綠原酸及黃酮類化合物同樣具有天然抗菌活性，對金黃色葡萄球菌及變形桿菌也有較強的抑制作用[5]，為瘡瘍要藥；黃柏、蛇床子、地膚子、龍膽草、白芷等可以加強主藥清熱燥濕、祛風殺蟲之功，共為輔藥；全方為伍可用于蕁麻疹、濕疹、滲出性皮炎、濕疹、手足癬的治療。

參花搽劑中主藥同為苦參，制劑同樣具有以上功效，但抑菌效果比復方參花搽劑弱。中藥制劑的抑菌作用原理比較復雜，但究其原因應與有效成分的濃度有著正相關性。2種藥液對比試驗結(jié)果表現(xiàn)出差異性較大，主要與處方改進及制劑工藝優(yōu)選有關，傳統(tǒng)意義上的經(jīng)驗煎煮法不考慮吸水率及加水倍量、提取次數(shù)、提取時間的科學設計等因素導致苦參堿、綠原酸等成分提取率較低，而復方參花搽劑系經(jīng)過正交試驗設計優(yōu)選的最佳工藝進行提取，有效成分提取率高，隨著有效成分濃度的增大細菌敏感度提高，抑菌效果明顯增強，為下一步的臨床應用提供了依據(jù)。

2 臨床療效觀察

濕疹與皮炎是臨床上皮膚科非常常見的疾病，發(fā)病初期病人皮膚紅腫，出現(xiàn)皮疹、丘疹，病程持續(xù)進展的病人皮膚表面通常會出現(xiàn)糜爛、水皰、血痂等癥狀，同時伴劇烈腫痛，極劇瘙癢，病人難以克制反復抓撓，進而加速病情進展，影響了患者的正常生活質(zhì)量，甚至影響到患者的心理。

2.1資料與方法

2.1.1一般資料 選擇2013年8月中旬至2013年11月之間的在泰安市中心醫(yī)院皮膚科就診的患濕疹的58例病患志愿者，診斷標準參照《臨床皮膚病學》[6]判定。病程3天～3個月。病例資料年齡2歲～63歲，男30例，女28例，每組29例。治療組，男14例，女15例，平均年齡38.5歲；對照組，男15例，女14例，平均年齡40.3歲。兩組間性別、癥狀、年齡、病情均無明顯差異，具有可比性。

2.1.2方法

2.1.2.1治療方法 用藥前將患處用生理鹽水清洗干凈，晾干后搽用藥液。治療組使用復方參花搽劑，批號20130805，對照組使用參花搽劑，批號20130709。用藥方法為用棉簽蘸取藥液輕搽濕疹部位，每日2次，早晚各用藥1次。連續(xù)使用5天為1個療程，根據(jù)病人恢復情況使用1～3個療程，2個療程間隔1～2天。注意事項為禁忌辛辣刺激飲食，禁忌用熱水清潔患處。

2.1.2.1療效標準 痊愈：全部皮疹消失, 病人無瘙癢感。顯效：80%的皮疹消退, 病人瘙癢癥狀明顯減輕。有效：50%的皮疹消退, 病人瘙癢感覺稍減輕。無效：用藥后濕疹未發(fā)生變化或病情進一步進展。復發(fā)：痊愈病人4周內(nèi)又出現(xiàn)皮疹、瘙癢感現(xiàn)象。有效率以痊愈+顯效+有效計。

2.2結(jié)果

2.1.1治療結(jié)果 治療組與對照組各觀察了3個療程，療程期間兩組均無明顯不良反應。治療組總有效率為96.4%，對照組總有效率為86.2%，治療組的總有效率比對照組的總有效率高10.2%。見表2。

表2 兩組療效比較

2.1.2隨訪結(jié)果 以上兩組病例治療結(jié)束后，對痊愈者41人進行了4周以內(nèi)的隨訪。治療組痊愈志愿者22人中，1～4周內(nèi)復發(fā)病人5人，復發(fā)率22.7%。對照組痊愈病人19人中，1～4周內(nèi)復發(fā)病人8人，復發(fā)率42.1%。治療組的復發(fā)率比對照組的復發(fā)率低20%。

2.3討論

臨床對照觀察結(jié)果表明，復方參花搽劑作為純中藥制劑對濕疹總有效率近100%，療效確切，且無明顯不良反應；改進后的復方參花搽劑與原制劑參花搽劑相比，具有有效率高尤其是治愈率高、復發(fā)率低的優(yōu)點，這與苦參堿等藥理成分的綜合提取率增加有直接關系。臨床觀察結(jié)果與體外抑菌試驗結(jié)果一致，驗證了經(jīng)處方及工藝優(yōu)化之后的復方參花搽劑提取工藝合理、質(zhì)量標準穩(wěn)定、治療作用確切，病人使用簡單便捷，無局部刺激，可以在臨床推廣應用。

濕疹屬于變態(tài)反應性疾病，隨著環(huán)境的改變及工作生活壓力的增加，臨床上此類疾病呈現(xiàn)出日趨增長的趨勢，且無年齡、性別選擇性，復發(fā)率極高。濕疹皮炎發(fā)病原因非常復雜，簡單來分有內(nèi)在因素和外在因素，兩因素間互相聯(lián)系，作用協(xié)同。外因如化學制劑、動物毒素、魚蝦、花粉、化妝品、日曬、塵埃等，內(nèi)因包括遺傳因素、免疫因素、代謝因素、精神因素等，心理因素對此類皮膚病的影響越來越受到重視。建議此類病人除藥物治療外，要保持飲食生活規(guī)律，調(diào)整良好的精神心理狀態(tài)及適應能力。中藥制劑可以減少病人因藥物過敏引起的不良反應，在治療過程中優(yōu)勢明顯。

本研究從體外抑菌試驗到臨床試用觀察，從基礎研究與臨床研究兩個方面入手，兩方面結(jié)果一致，證實了經(jīng)處方及工藝改進后的新制劑復方參花搽劑對金黃色葡萄球菌、變形桿菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌有明顯的抑菌效果，對濕疹皮炎的治療有效率高、復發(fā)率低，使用效果優(yōu)良。因時間等原因，臨床采集病例樣本較少，下一步將繼續(xù)觀察復方參花搽劑的長期臨床效果。

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