• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    鈾酰與多肽和蛋白質(zhì)相互作用研究進(jìn)展

    2014-06-09 12:32:43劉洋肖成梁梅雷屈國普石偉群
    核化學(xué)與放射化學(xué) 2014年3期
    關(guān)鍵詞:鈾酰基團(tuán)配位

    劉洋,肖成梁,梅雷,屈國普,石偉群,*

    1.南華大學(xué)核科學(xué)技術(shù)學(xué)院,湖南衡陽421001;2.中國科學(xué)院高能物理研究所,核輻射與核能技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京100049

    鈾酰與多肽和蛋白質(zhì)相互作用研究進(jìn)展

    劉洋1,2,肖成梁2,梅雷2,屈國普1,*,石偉群2,*

    1.南華大學(xué)核科學(xué)技術(shù)學(xué)院,湖南衡陽421001;2.中國科學(xué)院高能物理研究所,核輻射與核能技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京100049

    隨著核能事業(yè)的快速發(fā)展,人們越來越關(guān)注錒系核素對生態(tài)環(huán)境和生物體所造成的影響,其中錒系元素的生物毒理行為正成為核能基礎(chǔ)研究熱點(diǎn)之一。錒系陽離子與生物分子特別是多肽和蛋白質(zhì)的相互作用研究對于理解其在生物體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)、吸收和沉積等基本毒理學(xué)問題至關(guān)重要。鈾作為核燃料循環(huán)中主要的錒系元素,其毒理學(xué)問題更具研究意義。本文綜述了鈾酰離子(UO22+)在分子水平上與氨基酸、多肽和蛋白質(zhì)之間相互作用機(jī)理的研究進(jìn)展。分析了所形成配合物的配位模式、分子結(jié)構(gòu)以及熱力學(xué)數(shù)據(jù)等;評價(jià)了血漿蛋白對鈾在人體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)、吸收和沉積所起的作用;討論了能特異性識別UO22+的多肽和蛋白質(zhì)的設(shè)計(jì)原理,對本領(lǐng)域今后的發(fā)展動(dòng)向也進(jìn)行了展望。

    鈾酰;氨基酸;多肽;蛋白質(zhì);相互作用;分子水平

    隨著核能事業(yè)的快速發(fā)展、核電產(chǎn)業(yè)的迅速增長,對鈾的需求量也不斷加大。在鈾礦開采、核燃料制造、乏燃料后處理和核廢物處理與處置等核燃料循環(huán)的環(huán)節(jié)中,放射性核素均有可能在工業(yè)活動(dòng)和地質(zhì)運(yùn)動(dòng)中通過遷移、擴(kuò)散、轉(zhuǎn)移和轉(zhuǎn)化等途徑進(jìn)入到環(huán)境中,從而直接或間接對人居環(huán)境和生物體造成嚴(yán)重影響。

    對生物體而言,鈾不僅具有與放射性比活度相關(guān)的放射毒性,且具有重金屬的化學(xué)毒性。毒理學(xué)研究表明:盡管所有鈾的同位素及其衰變子體均具有放射性,會(huì)對人體器官造成內(nèi)照射損傷,但鈾中毒通常不是放射學(xué)效應(yīng)引起的,而是來自于體內(nèi)的生物化學(xué)相互作用[1]。因此人們普遍認(rèn)為內(nèi)污染導(dǎo)致?lián)p傷主要是源于鈾的化學(xué)毒性。鈾的化學(xué)毒性與其在進(jìn)入人體途徑、價(jià)態(tài)、體內(nèi)化合物的形式有密切關(guān)系[2]。通常,鈾元素進(jìn)入人體的暴露途徑主要有吸入、食入和傷口滲入等。大多數(shù)四價(jià)鈾化合物都不溶于水,水溶液中大多以六價(jià)的鈾酰(UO22+)形式存在,因此體液中鈾主要以UO22+形式存在。在人體血液中鈾主要以鈾酰鹽或者鈾酰-蛋白質(zhì)復(fù)合物的形式存在[3],并通過血液循環(huán)迅速分布到各組織器官中,如腎臟、骨骼、肝臟和脾臟等。

    盡管關(guān)于鈾與生物體相互作用的研究工作已有大量的文獻(xiàn)報(bào)道,但是大部分側(cè)重于研究鈾在生物體內(nèi)不同組織中的分布與沉積情況[4-5],以及其毒理效應(yīng)[6]、促排劑[7]等。人們對UO22+生理毒性的分子機(jī)制尚未明確了解。蛋白質(zhì)是UO22+在生物體內(nèi)的主要結(jié)合分子,但是在分子水平上關(guān)于UO22+與多肽及蛋白質(zhì)相互作用的機(jī)理同樣還不明確,定量研究UO22+與多肽及蛋白質(zhì)結(jié)合性能的結(jié)果還很少。因此,在分子水平上從結(jié)構(gòu)特征及熱力學(xué)穩(wěn)定性等因素定量研究鈾與氨基酸、多肽和蛋白質(zhì)的相互作用機(jī)理,對于理解鈾在生物體內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)、吸收和沉積的分子機(jī)制等基本毒理問題至關(guān)重要。同時(shí),該方向的研究將對設(shè)計(jì)高效低毒的錒系元素陽離子促排藥物及研發(fā)能特異性結(jié)合UO22+的分子并用于鈾生物監(jiān)測和修復(fù)亦具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

    1 UO2+2與多肽相互作用研究

    1.1 氨基酸

    氨基酸作為構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本單位,能賦予多肽及蛋白質(zhì)特定的分子結(jié)構(gòu)形態(tài),使其分子具有生化活性。因此,在分子水平上研究氨基酸與鈾的相互作用將為研究多肽及蛋白質(zhì)等更復(fù)雜的生物大分子提供參考依據(jù)。

    從20世紀(jì)50年代開始,UO22+與氨基酸的相互作用研究便已展開,該時(shí)期的研究主要關(guān)注UO22+與氨基酸配合物的結(jié)構(gòu),即確定氨基酸是通過氨基還是羧基或者兩個(gè)基團(tuán)共同參與UO22+的配位。眾所周知,氨基酸屬于兩性電解質(zhì),羧基和氨基都能與UO22+相互作用。而這些功能基團(tuán)屬于Lewis和Bronsted酸堿,其配位形式與pH值相關(guān)。氨基酸的氨基和羧基的lg K值分別為9和2。電位滴定的結(jié)果顯示,在較低的pH值(2~4)下,氨基的質(zhì)子化作用阻止其與UO22+的絡(luò)合,而只是通過羧基上的兩個(gè)氧原子與UO22+雙齒配位。pH較高時(shí),氨基去質(zhì)子作用使得氨基酸的氨基氮原子和羧基氧原子同時(shí)參與配位。在幾乎所有關(guān)于UO22+與氨基酸的研究中都發(fā)現(xiàn)羧基基團(tuán)是比較活躍的UO22+結(jié)合位點(diǎn)。Lagrange等[8]通過電位滴定和紫外光譜以及紅外光譜證實(shí)了多種氨基酸中羧酸和氨基基團(tuán)同時(shí)與UO22+配位。通過晶體學(xué)和核磁共振對甘氨酸及其—SH—衍生物與UO22+配合在結(jié)構(gòu)上的研究證實(shí)了UO22+更傾向于與羧酸基團(tuán)配位[9]。不同的側(cè)鏈基團(tuán)也可能改變氨基酸與UO22+的配位形式。通過13C NMR結(jié)果表明,天冬氨酸(R=—CH2—COO-)的側(cè)鏈羧基上的氧原子替代氨基與UO22+配位,而半胱氨酸側(cè)鏈巰基并沒有參與配位[10]。這也印證了作為硬受體的鈾原子更傾向于與硬氧原子而不是軟硫原子配位。側(cè)鏈基團(tuán)為脂肪族羥基的絲氨酸和蘇氨酸同樣也并未發(fā)現(xiàn)側(cè)鏈羥基與UO22+配位[11]。表1總結(jié)了文獻(xiàn)中已報(bào)道的各種氨基酸與UO22+配合物穩(wěn)定常數(shù)值。從表1可以看出,文獻(xiàn)中都只考慮了四種配合物的累積穩(wěn)定常數(shù)值,分別為(UO2)LH2+、(UO2)L2H22+、(UO2)L+和(UO2)L02(L為氨基酸);α-氨基酸與UO22+配合物的穩(wěn)定常數(shù)幾乎都相同,根據(jù)平衡UO22++L=(UO2)L+,形成常數(shù)的加權(quán)平均值為lg K1=8.4±0.7(I= 0.1 mol/L),其中氨基對該值的貢獻(xiàn)為5.8±0.5,羧基為2.6±0.2。

    表1UO22+與氨基酸配合物的穩(wěn)定常數(shù)值Table 1Summarized stability constants of uranyl-amino acid complexes

    通過對比表1中的UO22+與氨基酸的各種配位行為,UO22+-氨基酸配合物的穩(wěn)定性主要取決于以下因素:(1)羧酸和氨基基團(tuán)之間的—CH2—基團(tuán)的個(gè)數(shù)和最終形成螯合環(huán)尺寸的大小;(2)在氨基酸上α-碳上其它能與UO22+結(jié)合基團(tuán)的數(shù)量、種類及所處位置;(3)體系中的pH值、溫度、離子強(qiáng)度等條件。

    1.2 多肽

    在眾多能與UO22+相互作用的蛋白質(zhì)中,除特定的蛋白質(zhì)外,大部分蛋白質(zhì)與UO22+的結(jié)合都不是特異性的。蛋白質(zhì)分子往往可以非選擇性地結(jié)合多個(gè)UO22+,形成配合物的穩(wěn)定性各不相同;而且蛋白質(zhì)通常具有復(fù)雜的四級結(jié)構(gòu),影響蛋白質(zhì)與UO22+結(jié)合的因素較多,因此要分別確定其結(jié)合位點(diǎn)和相應(yīng)的配合物結(jié)構(gòu)具有相當(dāng)?shù)碾y度。一個(gè)簡化問題的方式就是研究蛋白質(zhì)片段或模型多肽與UO22+的結(jié)合行為和機(jī)理,在此基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)合成能特異性識別UO22+的多肽。

    (1)蛋白質(zhì)片段多肽

    鈣調(diào)蛋白是真核生物細(xì)胞中的胞質(zhì)溶膠蛋白,每個(gè)蛋白分子內(nèi)有四個(gè)鈣離子結(jié)合位點(diǎn),其主要功能為根據(jù)鈣離子濃度的變化來控制細(xì)胞內(nèi)重要的生化反應(yīng)。Le Clainche等[35]采用草履蟲鈣調(diào)蛋白中具有EF手圖像模體的第一鈣結(jié)合位點(diǎn)作為模版(CaM:EQAEFKEAFAALFDKDGDGTITTKELGTVMRSL),設(shè)計(jì)合成了含33個(gè)氨基酸的模型多肽(CaM-M1c:EQAEFKEAFAALCDKDGDGTITTKELGTCMRSL)。再將該模型多肽的兩個(gè)天冬氨酸改造為蘇氨酸獲得對UO22+具有很強(qiáng)結(jié)合能力并且具有選擇性的新多肽分子(CaM-M3c: EQAEFKEAFAALCTKDGTGTITTKELGTC-MRSL)。時(shí)間分辨激光誘導(dǎo)熒光(TRLIF)滴定實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示單體的(CaM-M3c)(UO2)絡(luò)合物解離常數(shù)KD值達(dá)到了18 μmol/L。圓二色譜的結(jié)果表明結(jié)合UO22+后該多肽分子從無規(guī)則構(gòu)象到α-螺旋構(gòu)象的改變,而鈣離子和其它鑭系金屬離子都不能使其構(gòu)象改變,這說明CaM-M3c對UO22+具有特異性的結(jié)合。該多肽分子在被低濃度UO22+沾污的泉水中仍然表現(xiàn)出對鈾酰離子很強(qiáng)的結(jié)合能力和選擇性,使得該分子有望應(yīng)用于專門測定低濃度鈾污染的生物探針和傳感器。磷酸化(phosphorylation)或磷酸化作用,是指在蛋白質(zhì)或其他類型分子上,加入一個(gè)磷酸基團(tuán),也可定義成“將一個(gè)磷酸基團(tuán)導(dǎo)入一個(gè)有機(jī)分子”,此作用在生物化學(xué)中占有重要地位。蛋白質(zhì)磷酸化可發(fā)生在許多種類的氨基酸上,其中以絲氨酸為多,其次是蘇氨酸和酪氨酸。磷酸化多肽即指通過磷酸化作用后的側(cè)鏈基團(tuán)含有磷酸基團(tuán)的多肽(序列中包含絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸)。通常,蛋白質(zhì)中的羰基、羧基、酚羥基和磷?;峁┭踉优cUO22+配位[36]。對比UO22+配合物結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn),酚羥基、磷酰基中氧原子與鈾原子之間的鍵長最短,說明磷酰基對UO22+親和能力較強(qiáng)[37]。自然界中鈾酰與磷酸基團(tuán)天然共存的鈣鈾云母礦石和具有三腳架結(jié)構(gòu)雙磷酸鹽的Uranophiles錒系促排藥物[38]都印證了該觀點(diǎn)。Merroun等[39]則從鈾礦廢料堆中的球狀桿菌JG-A12中發(fā)現(xiàn)了磷酸化的蛋白質(zhì):卵黃高磷蛋白和S層蛋白。兩種蛋白都對UO22+表現(xiàn)出非常好的結(jié)合能力,而蛋白中磷酸基團(tuán)直接參與UO22+的配位。因此可以預(yù)見,磷酸基團(tuán)的引入將大大提高多肽結(jié)合UO22+的親合力。通過調(diào)節(jié)多肽序列,將多肽進(jìn)行磷酸化修飾,能達(dá)到提高選擇性結(jié)合UO22+的目的。Pardoux等[40]選取鈣調(diào)蛋白中其中一個(gè)EF-手性結(jié)構(gòu)的鈣離子結(jié)合位點(diǎn),對其序列中的蘇氨酸進(jìn)行磷酸化修飾,將其用于研究UO22+的生物毒性。研究結(jié)果表明,在pH=6的條件下磷酸化多肽(DKDGDGYITpAAE)與UO22+的結(jié)合能力是其對應(yīng)原多肽(DKDGDGYITAAE)的5倍。在pH=7、即生理pH值條件下,UO22+與磷肽結(jié)合的解離常數(shù)達(dá)到亞納摩爾量級。通過傅立葉變換紅外光譜(FTIR)證實(shí)了在該條件下磷酸根基團(tuán)與UO22+的直接相互作用。因此,在生理?xiàng)l件下,磷酸根基團(tuán)直接決定了鈾酰與蛋白質(zhì)結(jié)合能力。

    (2)模型多肽

    鈾主要沉積在腎臟和骨骼中,放射顯影研究發(fā)現(xiàn)鈾酰離子在骨骼中沉積分布情況與鈣離子比較相似,而在一些病例中發(fā)現(xiàn)鈾在骨骼的生長區(qū)域具有很高的濃度。骨橋蛋白是一種磷酸化的、非有序結(jié)構(gòu)的蛋白,其主要功能為調(diào)控骨骼的生長。最近研究表明,鈾在體內(nèi)的慢性毒性機(jī)理與鈾和體內(nèi)磷酸基團(tuán)的相互作用有關(guān)。骨橋蛋白可能對鈾在骨骼中的沉積起到至關(guān)重要的輔助作用。Safi等[41]選取骨橋蛋白中金屬結(jié)合位點(diǎn)處的磷酸化多肽片段“pSDEpSDE(H8V)”作為研究對象,結(jié)合熱力學(xué)、光譜學(xué)技術(shù)以及理論計(jì)算方法在熱力學(xué)、結(jié)構(gòu)性質(zhì)方面對該模型磷酸化多肽進(jìn)行了研究。通過量熱滴定及時(shí)間分辨熒光技術(shù)獲得了模型磷酸化多肽H8V與鈾酰離子配合物的化學(xué)計(jì)量比和結(jié)合能力以及種態(tài)分布。紅外光譜直接證實(shí)了H8V中磷酸基團(tuán)參與鈾酰離子的配位。密度泛函理論(DFT)計(jì)算結(jié)合U的L3邊擴(kuò)展X光吸收精細(xì)結(jié)構(gòu)譜(extended X-ray absorption fine structure,EXAFS)數(shù)據(jù)擬合分析表明,磷酸基團(tuán)的一個(gè)氧原子、羧酸基團(tuán)的兩個(gè)氧原子以及兩分子水與UO22+配位。對比H8V與其原型骨橋蛋白的EXAFS實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),該模型多肽H8V和骨橋蛋白在pH=5.5的條件下與鈾酰的配位環(huán)境非常相似。兩者如此相似的可能原因在于骨橋蛋白不存在一種明確定義的三級結(jié)構(gòu),蛋白序列具有很好的柔韌性,而H8V所在區(qū)域呈現(xiàn)出不折疊的完全展開的構(gòu)型。結(jié)合上述實(shí)驗(yàn)表明該模型多肽能夠很好地模擬全長序列的骨橋蛋白。研究人員也推測該蛋白的調(diào)節(jié)作用為鈾在人體中生物礦化的主要原因。因此,更多關(guān)于全長骨橋蛋白與UO22+相互作用、以及其對鈾在骨骼中沉積所起到的作用值得研究。在生理?xiàng)l件下,當(dāng)UO22+的濃度在微摩爾量級時(shí),其在血清中的主要存在種態(tài)由[UO2(CO3)2]2-+CO23-=[UO2(CO3)3]4-表示。其中結(jié)合三個(gè)碳酸根的UO22+占主導(dǎo)地位,結(jié)合兩個(gè)碳酸根的UO22+也部分存在于體內(nèi)。在生理pH和碳酸根濃度下,與UO22+具有中等絡(luò)合能力的配體都需要與第三個(gè)碳酸根離子競爭才能與UO22+形成配合物。Huang等[42]發(fā)現(xiàn)多肽DAHK和GGH與UO22+能夠形成[UO2(CO3)2Ln]n-2類型的鈾酰-碳酸根-多肽的三元配合物。由于這兩種多肽上的羧基基團(tuán)與UO22+結(jié)合是非特異性的,其配合物UO2(CO3)2(GGH)和UO2(CO3)2(DAHK)的穩(wěn)定常數(shù)并不高,分別為lg K=2.2±0.4和lg K=3.1± 0.4。該研究結(jié)果表明羧酸基團(tuán)與UO22+的非特異性結(jié)合可能是UO22+在血清中輸運(yùn)的一種機(jī)制。但并不能排除在血清中有其他蛋白質(zhì)能與UO22+特異性結(jié)合而且配合物還具有高穩(wěn)定性。鑒于錒系陽離子趨向于與酸性氨基酸配位,Jeanson等[43]還研究了四價(jià)錒系陽離子Th(Ⅳ)、Pu(Ⅳ)和Np(Ⅳ)等與模型肽Ac-Asp-Asp-Pro-Asp-Asp-NH2的相互作用。研究發(fā)現(xiàn),pH在生理?xiàng)l件下,以上四價(jià)錒系陽離子均可以直接與多肽絡(luò)合,而不至于產(chǎn)生水解。該模型多肽分子為設(shè)計(jì)在生理pH條件下能防止UO22+水解并具有較高結(jié)合常數(shù)的多肽序列提供了借鑒。

    上述研究表明:多肽與UO22+的配位可通過多肽序列和磷酸基團(tuán)的精細(xì)調(diào)節(jié),提高對UO22+的選擇性。多肽本身為生物分子,具有一定的生理活性,將可提高其作用效率并降低其生理毒性。因此,多肽分子是未來理想的錒系促排藥物。

    1.3 蛋白質(zhì)

    隨著人類在基因和蛋白質(zhì)研究領(lǐng)域的巨大進(jìn)步,越來越多的研究開始關(guān)注錒系陽離子與DNA和蛋白質(zhì)的相互作用機(jī)理。蛋白質(zhì)是生命體系中的重要分子,它們參與調(diào)節(jié)各種新陳代謝、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞周期等許多極其重要的生命過程。鑒于蛋白質(zhì)可能在UO22+在體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)、沉積、排泄中扮演重要角色,研究UO22+與蛋白質(zhì)的相互作用機(jī)理無疑具有十分重要的意義。而UO22+與氨基酸和多肽相互作用研究則為研究UO22+與分子量更大、結(jié)構(gòu)更復(fù)雜的蛋白質(zhì)相互作用提供基礎(chǔ)。

    (1)血漿蛋白質(zhì)

    通常受污染的土壤和水源中的鈾通過吸入、食入以及皮下滲入等方式進(jìn)入人體細(xì)胞外的環(huán)境組織液,組織液中的鈾通過體液交換進(jìn)入血液循環(huán)。不管鈾以哪種方式進(jìn)入人體,只有以UO22+形式存在的可溶性鈾才能夠進(jìn)入人體的血液循環(huán),其在血漿中的質(zhì)量濃度約為1 ng/L。進(jìn)入生物體內(nèi)后,UO22+的化學(xué)種態(tài)對其分布、代謝和排泄起著決定性的作用,也使其在不同組織器官上的作用機(jī)理和影響效果具有顯著差異。UO22+能與很多生物小分子配體形成絡(luò)合物,從而使鈾的種態(tài)變得非常復(fù)雜,增加研究的困難。相關(guān)研究數(shù)據(jù)表明,在血漿當(dāng)中UO22+主要與碳酸根(60%)和蛋白質(zhì)(30%)形成絡(luò)合物,而剩下的大多被吸附在紅細(xì)胞上[44]。所以普遍認(rèn)為UO22+與血漿中的一些蛋白質(zhì)相結(jié)合、并通過血液循環(huán)進(jìn)入到靶器官的細(xì)胞當(dāng)中是一種鈾在人體中轉(zhuǎn)運(yùn)比較合理的機(jī)制。因此在分子水平上UO22+與血漿中的蛋白質(zhì)相互作用的研究具有重要的意義。在眾多血漿蛋白質(zhì)中,具有金屬離子輸運(yùn)能力的轉(zhuǎn)鐵蛋白和含量最豐富的白蛋白是研究最多的兩種蛋白。轉(zhuǎn)鐵蛋白(transferrin,Tf),又稱運(yùn)鐵蛋白,是血漿中主要的含鐵蛋白質(zhì)。它是由670~700個(gè)氨基酸組成的單鏈糖基化蛋白,分子量為800 kDa左右。轉(zhuǎn)鐵蛋白最基本的生理功能為結(jié)合和運(yùn)輸三價(jià)鐵離子,從而控制血液中鐵離子含量。晶體結(jié)構(gòu)顯示轉(zhuǎn)鐵蛋白由兩個(gè)結(jié)構(gòu)相似的臂組成,分別稱為N-臂(N-lobe)和C-臂(C-lobe),兩臂之間由一條短肽鏈相連。每個(gè)臂都由兩個(gè)大小相近的結(jié)構(gòu)域組成,兩個(gè)結(jié)構(gòu)域相交處便是一個(gè)鐵結(jié)合位點(diǎn)。N-臂和C-臂都有一個(gè)鐵結(jié)合位點(diǎn),兩個(gè)鐵結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)構(gòu)也非常相似。三價(jià)鐵與來自兩個(gè)酪氨酸的氧原子、一個(gè)天冬氨酸的氧原子、一個(gè)組氨酸的氮原子以及作為協(xié)同陰離子的碳酸根離子上的兩個(gè)氧原子通過配位鍵形成八面體的幾何構(gòu)型[45]。每一個(gè)結(jié)構(gòu)域移動(dòng)位置便可使鐵結(jié)合位點(diǎn)處于開放狀態(tài),鐵就會(huì)被釋放出來。轉(zhuǎn)鐵蛋白在構(gòu)象上處于開放或閉合的過程也就是其吸收或釋放鐵離子的過程。結(jié)合兩個(gè)三價(jià)鐵離子的轉(zhuǎn)鐵蛋白能與轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(transferrin receptor,TfR)形成穩(wěn)定的復(fù)合物,通過內(nèi)吞化作用形成內(nèi)吞小體,內(nèi)吞小體中的酸性環(huán)境使得轉(zhuǎn)鐵蛋白釋放出鐵。轉(zhuǎn)鐵蛋白通過其受體介導(dǎo)的胞吞作用是鐵進(jìn)入哺乳動(dòng)物的主要途徑,如圖1所示。

    圖1 TfR介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)鐵的吸收[46]Fig.1TfR-mediated intracellular iron uptake[46]

    除了鐵,其他的二價(jià)或三價(jià)金屬離子也能結(jié)合到轉(zhuǎn)鐵蛋白的金屬結(jié)合位點(diǎn)上。研究表明,錒系金屬離子钚、镎、釷和鋦都能與轉(zhuǎn)鐵蛋白相互作用,且具有較強(qiáng)的結(jié)合能力[46-47]。鑒于轉(zhuǎn)鐵蛋白可能在錒系陽離子進(jìn)入人體組織細(xì)胞中扮演重要角色,在分子水平上研究UO22+與轉(zhuǎn)鐵蛋白之間的相互作用也非常重要。相關(guān)工作的早期研究主要關(guān)注UO22+與轉(zhuǎn)鐵蛋白配合物的穩(wěn)定常數(shù)以及它們之間的化學(xué)計(jì)量數(shù)。Scapolan等[48]采用時(shí)間分辨熒光技術(shù)研究鈾酰離子與轉(zhuǎn)鐵蛋白的相互作用。熒光滴定結(jié)果表明兩者能夠形成化學(xué)計(jì)量比(U/Tf)為2∶1的絡(luò)合物,并且首次在低鈾濃度c(UO22+)=1×10-6mol/L及生理pH條件下,采用非線性回歸數(shù)學(xué)模型得到UO22+與轉(zhuǎn)鐵蛋白絡(luò)合常數(shù)為lg K=16。Ansoborlo等[49]綜合考慮金屬離子的水解常數(shù)和轉(zhuǎn)鐵蛋白中存在的兩個(gè)獨(dú)立的金屬結(jié)合位點(diǎn),分別得到了C臂和N臂對UO22+的結(jié)合常數(shù)為lg K1=14.1和lg K2=12.6。Montavon等[50]則結(jié)合時(shí)間分辨熒光和紫外光譜發(fā)現(xiàn)在生理pH條件下轉(zhuǎn)鐵蛋白上兩個(gè)金屬結(jié)合位點(diǎn)對UO22+的結(jié)合能力并不相同,絡(luò)合常數(shù)分別為lg K1=12.4,lg K2=11.4。在有碳酸根存在的條件下,UO22+會(huì)與兩個(gè)或三個(gè)碳酸根形成絡(luò)合物,然后與轉(zhuǎn)鐵蛋白或其它蛋白形成鈾酰-轉(zhuǎn)鐵蛋白質(zhì)-碳酸根多元絡(luò)合物。隨著研究技術(shù)的不斷發(fā)展,研究人員更加關(guān)注轉(zhuǎn)鐵蛋白的結(jié)合位點(diǎn)是怎樣調(diào)整構(gòu)型以適應(yīng)鈾酰離子的進(jìn)入、結(jié)合了鈾酰離子后轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)構(gòu)上發(fā)生了哪些變化、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)改變后還能不能被受體識別等問題。這些因素都將直接決定鈾酰離子能不能像三價(jià)鐵離子一樣被轉(zhuǎn)鐵蛋白運(yùn)輸?shù)饺梭w細(xì)胞當(dāng)中。Vidaud等[51]采用紫外可見光譜、紅外光譜以及微量滲析的方法發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)鐵蛋白金屬結(jié)合位點(diǎn)中的兩個(gè)酪氨酸都參與了配位,與三價(jià)鐵離子不同的是組氨酸并沒有參與配位,結(jié)構(gòu)模型示于圖2。通過圓二色譜和差示掃描量熱技術(shù)發(fā)現(xiàn)Tf-UO22+絡(luò)合物的整體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性弱于Tf-Fe3+。采用標(biāo)記的方法則發(fā)現(xiàn)Tf-UO22+絡(luò)合物并不能被轉(zhuǎn)鐵蛋白受體所識別。其主要原因可能是Tf-UO22+絡(luò)合物并不像Tf-Fe3+絡(luò)合物一樣呈現(xiàn)閉合構(gòu)象,而依然呈現(xiàn)開放式構(gòu)象,從而無法進(jìn)入細(xì)胞。Benavides-Garcia等[52]則采用密度泛函理論(DFT)計(jì)算的方法研究了UO22+與轉(zhuǎn)鐵蛋白的相互作用以及Tf-UO22

    圖2 轉(zhuǎn)鐵蛋白N-臂結(jié)合三價(jià)鐵(A和A')和鈾酰后(B和B')的結(jié)構(gòu)模型[51]Fig.2Structural model of metal binding in Tf,F(xiàn)e3+N-lobe of transferrin(A and A')and proposed model of uranyl-N-lobe(B and B')[51]

    +絡(luò)合物在結(jié)構(gòu)上的特征。通過優(yōu)化Tf-UO22+絡(luò)合物的幾何構(gòu)型以及計(jì)算的紅外圖譜發(fā)現(xiàn)UO22+主要與轉(zhuǎn)鐵蛋白中結(jié)合位點(diǎn)處的兩個(gè)酪氨酸(Tyr 95和Tyr 188)、一個(gè)天冬氨酸還有一個(gè)碳酸根離子配位,而組氨酸并未參與配位,這與文獻(xiàn)[51]的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符。另外還發(fā)現(xiàn)天冬氨酸和一個(gè)酪氨酸之間形成非常強(qiáng)的氫鍵,該氫鍵在Tf-UO22+絡(luò)合物的形成及維持絡(luò)合物穩(wěn)定上起到了非常重要的作用。計(jì)算得到的拉普拉斯電荷圖譜則表明UO22+-轉(zhuǎn)鐵蛋白絡(luò)合物可以同時(shí)充當(dāng)親核試劑和親電試劑,可以與不同的受體進(jìn)一步作用,這可能是鈾順利進(jìn)入人體不同器官的原因。Mulliken電荷密度圖以及3-D密度圖則表明Tf-UO22+絡(luò)合物的形成機(jī)制為供體-受體機(jī)制。

    血清白蛋白是人體血液中含量最為豐富的蛋白質(zhì),其質(zhì)量濃度約為30~50 g/L,約占整個(gè)血液中蛋白質(zhì)的一半,其主要功能為運(yùn)輸脂肪酸。最早關(guān)于UO22+與血清白蛋白相互作用的研究始于1948年,Barron等[53]發(fā)現(xiàn)UO22+與血清白蛋白之間的相互作用是可逆的,同時(shí)會(huì)受到碳酸根及檸檬酸根等競爭性配體的影響。Chevari等[54]則采用Shubert-type方法算出在pH=6條件下UO22+與血清白蛋白絡(luò)合物的穩(wěn)定常數(shù)為lg K=10。采用微量熱的方法得到了在pH=5.5條件下白蛋白中高親和力位點(diǎn)和低親和力位點(diǎn)分別與UO22+結(jié)合的穩(wěn)定常數(shù)達(dá)到了K=1.6×107L/mol和K=2.8× 105L/mol[55]。Montavon等[50]同樣證實(shí)在血漿中UO22+與白蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白都會(huì)形成鈾酰-蛋白質(zhì)-碳酸根的多元絡(luò)合物,同時(shí)Ca2+會(huì)和UO22+與白蛋白競爭性配位。根據(jù)建立的模型計(jì)算發(fā)現(xiàn),盡管兩種蛋白與UO22+結(jié)合能力相似,但與UO22+結(jié)合的血漿蛋白中80%是白蛋白,20%是轉(zhuǎn)鐵蛋白,其主要原因在于血漿中白蛋白的含量要比轉(zhuǎn)鐵蛋白高一個(gè)數(shù)量級。Yang等[56]則取與人血清白蛋白相似的牛血清白蛋白作為研究對象,采用熒光和全反射傅里葉紅外光譜(ATR-FTIR)的方法不僅得到了牛血清白蛋白與UO22+的結(jié)合常數(shù),而且發(fā)現(xiàn)結(jié)合UO22+后蛋白質(zhì)構(gòu)象也發(fā)生了顯著變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在溶液體系中隨著UO22+濃度的增加,蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)中的α-螺旋(α-h(huán)elix)結(jié)構(gòu)成分不斷減少,而β折疊(β-sheets)、翻轉(zhuǎn)及無序纏繞等成分增多,因此可推測結(jié)構(gòu)上的變化可能直接導(dǎo)致白蛋白在生理功能上的變化。

    除了轉(zhuǎn)鐵蛋白和血清白蛋白外,血漿中是否還有其他蛋白質(zhì)會(huì)與UO22+結(jié)合,而這些相互作用會(huì)不會(huì)更好解釋鈾在生物體內(nèi)動(dòng)力學(xué)及毒理學(xué)?為了更好地回答這些問題,Vidaud等[57]設(shè)計(jì)了一種結(jié)合時(shí)間分辨熒光和蛋白質(zhì)組學(xué)分析的二維色層分析方法來篩選血漿中除了轉(zhuǎn)鐵蛋白和血清白蛋白外能與UO22+相互作用的蛋白質(zhì),并采用等離子質(zhì)譜進(jìn)行確認(rèn)。結(jié)果表明血漿銅藍(lán)蛋白、血色素結(jié)合蛋白和另外兩種補(bǔ)體蛋白與UO22+結(jié)合的化學(xué)計(jì)量比大于1。然而這四種蛋白質(zhì)都不是金屬蛋白,說明UO22+能通過各種各樣的結(jié)合位點(diǎn)及配位模式與很多蛋白質(zhì)發(fā)生相互作用。Basset等[58]測得了13種血漿蛋白質(zhì)與UO22+結(jié)合的解離常數(shù),從中發(fā)現(xiàn)參與骨骼新陳代謝的胎球蛋白A (fetuin A)表現(xiàn)出對UO22+最強(qiáng)的結(jié)合能力。盡管其在血漿中含量較低,但結(jié)合了80%的UO22+??紤]到相對濃度,作者認(rèn)為白蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白都并非血漿中主要的UO22+輸運(yùn)者,而是胎球蛋白A。熒光分析表明胎球蛋白A具有三個(gè)UO22+結(jié)合位點(diǎn),其中較強(qiáng)的結(jié)合位點(diǎn)的解離常數(shù)達(dá)到了10 μmol/L。圓二色譜結(jié)果顯示胎球蛋白A結(jié)合UO22+后,其蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)并未發(fā)生變化,相應(yīng)的生理功能也沒有發(fā)生變化。該研究結(jié)果不僅改變了以往認(rèn)為白蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白是血漿中UO22+的主要輸運(yùn)者的認(rèn)識,同時(shí)也提出了鈾從血液到骨骼轉(zhuǎn)運(yùn)以及在骨骼中沉積的一種可能的新機(jī)制。

    (2)其他蛋白質(zhì)

    除了血漿蛋白外,其它金屬蛋白和磷酸化蛋白也是研究熱點(diǎn)。UO22+與金屬蛋白的結(jié)合與其他金屬離子處于競爭關(guān)系,蛋白質(zhì)與何種金屬離子結(jié)合取決于形成配合物的穩(wěn)定常數(shù)。Michon等[59]對比四種金屬蛋白發(fā)現(xiàn),與UO22+結(jié)合能力由強(qiáng)到弱依次為轉(zhuǎn)鐵蛋白、人血清白蛋白、金屬硫蛋白和鐵蛋白。Li等[60]采用紅外光譜(ATRFTIR)的方法對高度磷酸化蛋白(卵黃高磷蛋白)結(jié)合UO22+的行為進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)該蛋白對UO22+表現(xiàn)出非常強(qiáng)的結(jié)合能力。蛋白質(zhì)中的磷酸基團(tuán)對UO22+具有較高的親和性。Brown等[61]亦發(fā)現(xiàn)UO22+可以選擇性識別α-酪蛋白、卵白蛋白和β-酪蛋白的磷酸化位點(diǎn),并且利用UO22+的光學(xué)特性對以上蛋白進(jìn)行了光致切割。最值得關(guān)注的是: Wegner等[62]采用基因突變技術(shù),針對UO22+赤道面的配位特性,對鎳離子結(jié)合蛋白NikR進(jìn)行了特殊改造。NikR是nikABCDE鎳離子吸收系統(tǒng)的轉(zhuǎn)錄因子,如圖3(a)所示。在該結(jié)合位點(diǎn)的基礎(chǔ)上,將76位的組氨酸和96位的半胱氨酸突變?yōu)榧饶茏鳛閱锡X配體又能作為雙齒配體的天冬氨酸以滿足UO22+赤道平面配位數(shù)的要求。同時(shí)將72位的纈氨酸變?yōu)榻z氨酸,這樣絲氨酸上的羥基有可能與UO22+上一個(gè)氧原子形成氫鍵,從而增強(qiáng)蛋白質(zhì)與UO22+的結(jié)合能力(圖3(b)所示)。突變后的蛋白質(zhì)在和二甘醇酸與UO22+的競爭性絡(luò)合實(shí)驗(yàn)表明,突變后的NikR’與UO22+的結(jié)合能力是二甘醇酸的50多倍,其解離常數(shù)為10-7.27±0.20mol/L。EXAFS結(jié)果表明兩個(gè)組氨酸和兩個(gè)天冬氨酸的殘基都參與配位。實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明只有結(jié)合了UO22+的NikR’蛋白才能與DNA形成蛋白質(zhì)-DNA的絡(luò)合物,而其它二價(jià)金屬Ni2+、Zn2+、Co2+、Cu2+、Gd2+、Mn2+和Fe2+與該蛋白結(jié)合后都不能被DNA識別。該現(xiàn)象表明突變后的NikR蛋白表現(xiàn)出對UO22+的特異性結(jié)合?;趯︹欟kx子配位特性的了解,可以通過改變蛋白質(zhì)骨架來選擇性結(jié)合UO22+,為設(shè)計(jì)具有高效選擇性結(jié)合錒系陽離子的蛋白質(zhì)提供了重要的借鑒意義?;谠摾砟?,Zhou等[63]發(fā)展了能在蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(protein data bank(PDB))中篩選出具有潛在UO22+結(jié)合位點(diǎn)蛋白質(zhì)的程序(URANTEIN),并利用該程序發(fā)現(xiàn)了甲烷桿菌體內(nèi)一個(gè)功能未知的蛋白質(zhì)具有較強(qiáng)UO22+結(jié)合能力,并針對UO22+的配位特性對該蛋白進(jìn)行改造從而得到了具備良好的熱穩(wěn)定性和超強(qiáng)UO22+結(jié)合能力的超級鈾酰結(jié)合蛋白(super uranyl-binding protein(SUP))。SUP-UO22+配合物晶體結(jié)構(gòu)如圖4所示,研究發(fā)現(xiàn),SUP對UO22+有優(yōu)越的選擇性,能提取模擬海水中30%~60%的UO22+并能反復(fù)使用。該研究對理解UO22+與蛋白的作用機(jī)制以及利用生物技術(shù)進(jìn)行海水提鈾均具有重要意義,為今后錒系元素結(jié)合蛋白的設(shè)計(jì)合成指明了方向。

    圖3 鎳(Ⅱ)-響應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子(NikR)[62]Fig.3Nickel(Ⅱ)-responsive transcriptional regulator(NikR)[62]

    圖4 超級鈾酰結(jié)合蛋白SUP的晶體結(jié)構(gòu)[63]Fig.4Uranyl-SUP crystal structure[63]

    2 結(jié)論與展望

    核能的快速發(fā)展及公眾對于核安全的日益重視,使得作為重要核材料的鈾對于人體健康的影響倍受關(guān)注。在分子水平上對鈾與生物分子的相互作用研究是鈾在人體內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)、沉積機(jī)制及毒理和解毒機(jī)制研究的基礎(chǔ),對錒系元素生物毒理學(xué)、錒系元素配位化學(xué)、錒系元素促排藥物的研發(fā)以及核環(huán)境安全均具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

    本文綜述了在分子水平上定量分析UO22+與氨基酸、多肽和蛋白質(zhì)相互作用的研究進(jìn)展。主要結(jié)論如下:(1)由于氨基酸分子結(jié)構(gòu)較為簡單,其與UO22+相互作用的研究已較為系統(tǒng),為研究多肽及蛋白質(zhì)等大分子奠定了基礎(chǔ);(2)適當(dāng)選取蛋白質(zhì)金屬結(jié)合位點(diǎn)處多肽片段能夠較好地模擬蛋白質(zhì)與UO22+的相互作用;合理地設(shè)計(jì)氨基酸序列和恰當(dāng)引入磷酸基團(tuán)能使模型多肽達(dá)到特異性結(jié)合UO22+的效果;(3)在眾多血漿蛋白質(zhì)中,轉(zhuǎn)鐵蛋白、白蛋白和胎球蛋白A均表現(xiàn)出對UO22+較強(qiáng)的結(jié)合能力,都是血液中可能的UO22+輸運(yùn)者;運(yùn)用基因技術(shù)改造蛋白質(zhì)金屬結(jié)合位點(diǎn)同樣能使其達(dá)到特異性結(jié)合UO22+的效果而不改變蛋白質(zhì)生理功能??偟膩碚f,在分子水平上定量研究鈾與特定生物分子相互作用研究仍處于起步階段,還有大量科學(xué)問題有待解決,而設(shè)計(jì)合成專門針對UO22+的多肽和蛋白質(zhì)類的生物探針、促排藥物及細(xì)胞內(nèi)或體內(nèi)UO22+與生物分子相互作用研究將是未來分子水平上生物分子與UO22+確稱取一定量相互作用研究的發(fā)展方向。

    [1]Taylor D M,Taylor S K.Environmental uranium and human health[J].Rev Environ Health,1997,12 (3):147-158.

    [2]Brugge D,de Lemos J L,Oldmixon B.Exposure pathways and health effects associated with chemical and radiological toxicity of natural uranium[J].Rev Environ Health,2005,20(3):177-194.

    [3]Eidson A F.The effect of solubility on inhaled uranium compound clearance[J].Health Phys,1994,67 (1):1-14.

    [4]Kurttio P,Komulainen H,Leino A,et al.Bone as a possible target of chemical toxicity of natural uranium in drinking water[J].Environ Health Perspectives,2005,113(1):68-72.

    [5]Vidaud C,Bourgeois D,Meyer D.Bone as target organ for metals:the case of f-elements[J].Chem Res Toxicol,2012,25(6):1161-1175.

    [6]Kurttio P,Auvinen A,Salonen L,et al.Renal effects of uranium in drinking water[J].Environ Health Perspectives,2002,110(4):337-342.

    [7]Durbin P,Kullgren B,Xu J,et al.Development of decorporation agents for the actinides[J].Radiat Prot Dosimetry,1998,79(1-4):433-443.

    [8]Lagrange P,Schneider M,Lagrange J.Complexes of oxovanadium(Ⅳ),dioxovanadium(Ⅴ)and dioxouranium(Ⅵ)with aminoacids in aqueous solution[J].J Chim Phys Phys-Chim Biolog,1998,95(10):2280-2299.

    [9]Keramidas A,Rikkou M,Drouza C,et al.Investigation on uranyl interaction with bioactive ligands:synthesis and structural studies of the uranyl complexes withglycineandN-(2-mercaptopropionyl) glycine[J].Radiochim Acta,2002,90(9-11/2002): 549-554.

    [10]Gharib F,Shamel A,Lotfi F.Ionic strength dependence of formation constants,complexation of glycine with dioxouranium(Ⅵ)ion[J].Rev Inorg Chem,2005,25(4):361-372.

    [11]Moll H,Bernhard G.Complex formation of curium(Ⅲ) with amino acids of different functionalities:L-threonine and O-phospho-L-threonine[J].J Coord Chem,2007,60(16):1795-1807.

    [12]Günther A,Geipel G,Bernhard G.Complex formation of uranium(Ⅵ)with the amino acids L-glycine and L-cysteine:a fluorescence emission and UV-Vis absorption study[J].Polyhedron,2007,26(1):59-65.

    [13]Cefola M,Taylor R C,Gentile P S,et al.Coordination compoundsⅢ:chelate compounds of the uranyl ion with hydroxy,mercapto,and amino acids[J].J Phys Chem,1962,66(5):790-791.

    [14]Kiss T,Sovago I,Gergely A.Critical survey of stability constants of complexes of glycine[J].Pure Appl Chem,1991,63:597-638.

    [15]Nourmand M,Meissami N.Complex formation between uranium(Ⅵ)ion and some[alpha]-aminoacids[J].Polyhedron,1982,1(6):537-539.

    [16]Nourmand M,Meissami N.Complex formation between uranium(Ⅵ)and thorium(Ⅳ)ions with some[small alpha]-amino-acids[J].J Chem Soc Dalton Trans,1983(8):1529-1533.

    [17]Sovago I,Kiss T,Gergely A.Critical survey of the stability constants of complexes of aliphatic amino acids[J].Pure Appl Chem,1993,65(5):1029-1080.

    [18]Dongre V G,Dhuley D G.Polarographic study of uranyl-amino acids complexesⅠ:U(Ⅵ)in glycine DL-α and β-alanines and histidine[J].Curr Sci,1980,49(8):305-307.

    [19]Bapna R,Vyas P C,Arora M,et al.Solution complexation of aminoacidate zwitter ion with uranyl(Ⅵ): electrophoresis and pH-metric studies[J].Asian J Chem,1997,9(4):592-897.

    [20]Vyas P C,Arora M,Oza C K,et al.Paper electrophoretic investigations of diocouranium(Ⅵ)-amino acid complexes[J].J Electrochem,1988,4(5): 509-511.

    [21]Bismondo A,Rizzo L,Di Bernardo P,et al.Uranyl(Ⅵ) complexes of 3-aminopropanoic acid and 4-aminobutanoic acid in aqueous solution:a potentiometric and calorimetric study[J].J Chem Soc Dalton Trans,1987(4):695-698.

    [22]Bismondo A,Rizzo L.Thermodynamic properties of actinide complexes:uranyl(Ⅵ)-and thorium(Ⅳ)-aspartate systems[J].Polyhedron,1989,8(18): 2233-2236.

    [23]Triverdi C P,Mathur P N,Sunar O P.Thermodynamics and stability constants of uranium-aspartic acid complex[J].J Indian Chem Soc,1971,48:270-272.

    [24]Girdhar H L,Parveen S,Puri M K.Stability constants of glutamic acid complexes with some metal ions[J].Indian J Chem,1976,14A:1021-1022.

    [25]Van Horn J D,Huang H.Uranium(Ⅵ)bio-coordination chemistry from biochemical,solution and protein structural data[J].Coord Chem Rev,2006,250: 765-775.

    [26]Lagrange P,Schneider M,Lagrange J.Complexes of oxovanadium(Ⅳ),dioxovanadium(Ⅴ)and dioxouranium(Ⅵ)with aminoacids in aqueous solution[J].J Chim Phys,1998,95:2280-2299.

    [27]Berthon G.Critical evaluation of the stability constants of metal complexes of amino acids with polar side chains[J].Pure Appl Chem,1995,67(7):1117-1240.

    [28]Singh S,Gupta D,Yadava K L.Ionophoretic technique in the study of mixed complexes(M-nitrilotriacetate-h(huán)istidinate systems)[J].Electrochim Acta,1985,30:223-227.

    [29]Gharib F,F(xiàn)arajtabar A.Interaction of dioxouranium (Ⅵ)ion with serine at different ionic strengths[J].J Mol Liq,2007,135(1-3):27-31.

    [30]Sharma U.Stepwise stability constants of uranyl(Ⅱ) and thorium(Ⅳ)complexes of L-lysine monohydrochloride[J].Thermochim Acta,1986,101:381-383.

    [31]Yamauchi O,Odani A.Stability constants of metal complexes of amino acids with charged side chains partⅠ:positively charged side chains[J].Pure Appl Chem,1996,68(2):469-496.

    [32]Ramanujam V V,Rengaraj K.Study on uranyl complexes PartⅢ:potentiometric investigation of uranylamino acid complexes[J].Indian J Chem,1980,19 (A):382-384.

    [33]Sekhon B S,Chopra S L.Studies on the formation of complexes of glutamine with Y(Ⅲ),La(Ⅲ),Ce(Ⅲ)and U(Ⅵ)[J].Indian J Chem,1974,12: 1322-1325.

    [34]Farooq O,Malik A U,Ahmad N,et al.Studies on the composition and stability of uranyl,vanadyl and titanous complexes with some aminoacids[J].J Electroanal Chem Interf Electrochem,1970,24(2-3):464-467.

    [35]Le Clainche L,Vita C.Selective binding of uranyl cation by a novel calmodulin peptide[J].Environ Chem Lett,2006,4(1):45-49.

    [36]Pible O,Guilbaud P,Pellequer J-L,et al.Structural insights into protein-uranyl interaction:towards an in silico detection method[J].Biochimie,2006,88 (11):1631-1638.

    [37]Pible O,Vidaud C,Plantevin S,et al.Predicting the disruption by UO22+of a protein-ligand interaction[J].Protein Sci,2010,19(11):2219-2230.

    [38]Sawicki M,Siaugue J M,Jacopin C,et al.Discovery of powerful uranyl ligands from efficient synthesis and screening[J].Chem-Eur J,2005,11(12):3689-3697.

    [39]Merroun M L,Raff J,Rossberg A,et al.Complexation of uranium by cells and S-layer sheets of Bacillus sphaericus JG-A12[J].Appl Environ Microbiol,2005,71(9):5532-5543.

    [40]Pardoux R,Sauge-Merle S,Lemaire D,et al.Modulating uranium binding affinity in engineered calmodulin EF-h(huán)and peptides:effect of phosphorylation[J].Plos One,2012,7(8):e41922.

    [41]Safi S,Creff G,Jeanson A,et al.Osteopontin:a uranium phosphorylated binding-site characterization[J].Chem-Eur J,2013,19(34):11261-11269.

    [42]Huang H,Chaudhary S,Van Horn J D.Uranyl-peptide interactions in carbonate solution with DAHK and derivatives[J].Inorg Chem,2005,44(4):813-815.

    [43]Jeanson A,Berthon C,Coantic S,et al.The role of aspartyl-rich pentapeptides in comparative complexation of actinide(Ⅳ)and iron(Ⅲ):Part 1[J].New J Chem,2009,33(5):976-985.

    [44]Stevens W,Bruenger F,Atherton D,et al.The distribution and retention of hexavalent233U in the beagle[J].Radiat Res,1980,83(1):109-126.

    [45]Sun H,Li H,Sadler P J.Transferrin as a metal ion mediator[J].Chem Rev,1999,99(9):2817-2842.

    [46]Sturzbecher-Hoehne M,Goujon C,Deblonde G J-P,et al.Sensitizing curium luminescence through an antenna protein to investigate biological actinide transport mechanisms[J].J Amer Chem Soc,2013,135(7): 2676-2683.

    [47]Taylor D M.The bioinorganic chemistry of actinides in blood[J].J All Comp,1998,271:6-10.

    [48]Scapolan S,Ansorborlo E,Moulin C,et al.Uranium (Ⅵ)-transferrin system studied by time-resolved laserinduced fluorescence[J].Radiat Prot Dos,1998,79 (1-4):505-508.

    [49]Ansoborlo E,Prat O,Moisy P,et al.Actinide speciation in relation to biological processes[J].Biochim,2006,88(11):1605-1618.

    [50]Montavon G,Apostolidis C,Bruchertseifer F,et al.Spectroscopic study of the interaction of U(Ⅵ)with transferrin and albumin for speciation of U(Ⅵ)under blood serum conditions[J].J Inorg Biochem,2009,103(12):1609-1616.

    [51]Vidaud C,Gourion-Arsiquaud S,Rollin-Genetet F,et al.Structural consequences of binding of UO22+to apotransferrin:can this protein account for entry of uranium into human cells?[J].Biochem,2007,46(8): 2215-2226.

    [52]Benavides-Garcia M G,Balasubramanian K.Structural insights into the binding of uranyl with human serum protein apotransferrin structure and spectra of proteinuranyl interactions[J].Chem Res Toxicol,2009,22 (9):1613-1621.

    [53]Barron E G,Muntz J A,Gasvoda B.Regulatory mechanisms of cellular respiration I:the role of cell membranes:uranium inhibition of cellular respiration[J].J Gen Physiol,1948,32(2):163-178.

    [54]Chevari S,Likhner D.Complex formation of natural uranium in blood[J].Med Radiol,1968,13(8):53-57.

    [55]Duff M R,Kumar C V.Site-selective photocleavage of proteins by uranyl ions[J].Angew Chem,Int Ed,2006,45(1):137-139.

    [56]Yang Y,F(xiàn)eng Y,Wang Y,et al.Interactions between U(Ⅵ)and bovine serum albumin[J].J Radioanal Nucl Chem,2013,298(2):903-908.

    [57]Vidaud C,Dedieu A,Basset C,et al.Screening of human serum proteins for uranium binding[J].Chem Res Toxicol,2005,18(6):946-953.

    [58]Basset C,Averseng O,F(xiàn)erron P-J,et al.Revision of the biodistribution of uranyl in serum:is fetuin-A the major protein target?[J].Chem Res Toxicol,2013,26(5):645-653.

    [59]Michon J,F(xiàn)relon S,Garnier C,et al.Determinations of uranium(Ⅵ)binding properties with some metalloproteins(transferrin,albumin,metallothionein and ferritin)by fluorescence quenching[J].J Fluorescence,2010,20(2):581-590.

    [60]Li B,Raff J,Barkleit A,et al.Complexation of U(Ⅵ)with highly phosphorylated protein,phosvitin: a vibrational spectroscopic approach[J].J Inorg Biochem,2010,104(7):718-725.

    [61]Brown A K,Liu J,He Y,et al.Biochemical characterization of a uranyl ion-specific DNAzyme[J].Chem Bio Chem,2009,10(3):486-492.

    [62]Wegner S V,Boyaci H,Chen H,et al.Engineering a uranyl-specific binding protein from NikR[J].Angew Chem,Int Ed,2009,48(13):2339-2341.

    [63]Zhou L,Bosscher M,Zhang C,et al.A protein engineered to bind uranyl selectively and with femtomolar affinity[J].Nat Chem,2014,6(3):236-241.

    Recent Research Progress of Interactions Between Uranyl Ions and Peptides/Proteins

    LIU Yang1,2,XIAO Cheng-liang2,MEI Lei2,QU Guo-pu1,*,SHI Wei-qun2,*
    1.School of Nuclear Science and Technology,University of South China,Hengyang 421001,China; 2.Key Lab of Nuclear Radiation and Nuclear Technology,Institute of High Energy Physics,Chinese Academy of Sciences,Beijing 100049,China

    With the rapid development of nuclear energy industry,the bio-toxicities of actinides have drawn more and more attention with respect to their potential harmful effects on ecological environment and bio-organisms.Studying the interaction mechanisms of actinide cations with biomolecules,especially peptides or proteins,can provide useful information in molecular level for understanding the transportation,absorption and deposition pathways of actinides in vivo.Uranium,as a central actinide in nuclear fuel cycle,deserves more research endeavors.In this work,recent progresses about the interaction mechanisms between uranyl(UO22+)and amino acids,peptides and proteins are reviewed.The coordination modes,molecular structures and thermodynamic data of UO22+-peptide complexes are selectively highlighted.The possible roles of the plasma proteins playin UO22+transportation,absorption and deposition are discussed.In addition,the basic principles for designing UO22+specific binding peptides and proteins are presented.

    uranyl;amino acid;peptide;protein;interactions;molecular level

    Q506

    A

    0253-9950(2014)03-0129-11

    10.7538/hhx.2014.36.03.0129

    2013-12-06;

    2014-04-01

    國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(11275219)

    劉洋(1989—),男,四川成都人,碩士研究生,輻射防護(hù)及環(huán)境保護(hù)專業(yè)

    *通信聯(lián)系人:屈國普(1964—),男,湖南衡陽人,教授,從事核輻射探測方法研究,E-mail:quguopu@usc.edu.cn石偉群(1976—),男,湖北黃梅人,博士,副研究員,從事核能放射化學(xué)研究,E-mail:shiwq@ihep.ac.cn

    猜你喜歡
    鈾酰基團(tuán)配位
    [Zn(Hcpic)·(H2O)]n配位聚合物的結(jié)構(gòu)與熒光性能
    一種鈾酰配合物的合成及其光催化降解性能研究
    pH-dependent Synthesis of Octa-nuclear Uranyl-oxalate Network Mediated by U-shaped Linkers
    德不配位 必有災(zāi)殃
    電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜快速鑒別水溶液中鈾酰形態(tài)及在檸檬酸鈾酰形態(tài)研究的應(yīng)用
    R基團(tuán)篩選技術(shù)用于HDACIs的分子設(shè)計(jì)
    芳烴ArCOR的構(gòu)象分析和基團(tuán)對親電取代反應(yīng)的定位作用
    鈾酰-Salophen與環(huán)己烯酮的作用模式
    內(nèi)含雙二氯均三嗪基團(tuán)的真絲織物抗皺劑的合成
    兩個(gè)含雙磺酸基團(tuán)化合物的合成、晶體結(jié)構(gòu)及熒光性質(zhì)
    最后的刺客免费高清国语| 精品熟女少妇av免费看| 色综合亚洲欧美另类图片| 成人漫画全彩无遮挡| 美女cb高潮喷水在线观看| 久久草成人影院| 免费一级毛片在线播放高清视频| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 能在线免费看毛片的网站| 晚上一个人看的免费电影| 看片在线看免费视频| 99视频精品全部免费 在线| eeuss影院久久| 我要搜黄色片| 久久人人爽人人片av| 国产探花在线观看一区二区| 久久精品人妻少妇| 成人特级av手机在线观看| 在现免费观看毛片| 一级爰片在线观看| 永久免费av网站大全| 高清日韩中文字幕在线| 久久久久九九精品影院| 高清在线视频一区二区三区 | АⅤ资源中文在线天堂| 男插女下体视频免费在线播放| 亚洲久久久久久中文字幕| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| av免费观看日本| 99九九线精品视频在线观看视频| 一级av片app| 欧美日本视频| 日本色播在线视频| 毛片一级片免费看久久久久| 成人亚洲精品av一区二区| 国产午夜精品论理片| 又粗又爽又猛毛片免费看| 97超视频在线观看视频| 麻豆成人午夜福利视频| 久久久欧美国产精品| 国产爱豆传媒在线观看| 亚洲精品国产成人久久av| 久久久色成人| 久久久精品大字幕| 国产精品综合久久久久久久免费| 久久久久久大精品| 秋霞在线观看毛片| 欧美人与善性xxx| 亚洲欧美日韩无卡精品| 丝袜美腿在线中文| 精品久久久久久久久久久久久| 九草在线视频观看| 国产精品电影一区二区三区| 日本免费一区二区三区高清不卡| 久久人人爽人人爽人人片va| 国模一区二区三区四区视频| 日韩视频在线欧美| 日韩精品青青久久久久久| 97在线视频观看| 国产美女午夜福利| 国产伦一二天堂av在线观看| 神马国产精品三级电影在线观看| 国产黄片视频在线免费观看| 99久久成人亚洲精品观看| h日本视频在线播放| 日韩中字成人| 亚洲va在线va天堂va国产| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| av福利片在线观看| av又黄又爽大尺度在线免费看 | 亚洲在久久综合| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 欧美性猛交黑人性爽| 热99re8久久精品国产| 国产精品野战在线观看| 久久精品人妻少妇| 一夜夜www| 亚洲欧美精品综合久久99| 不卡视频在线观看欧美| 草草在线视频免费看| 欧美成人a在线观看| 亚洲国产精品久久男人天堂| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 日韩三级伦理在线观看| 人妻少妇偷人精品九色| 国产午夜精品论理片| 日本色播在线视频| 亚洲精品国产av成人精品| 国产大屁股一区二区在线视频| 亚洲成色77777| 久久久久久伊人网av| 午夜免费激情av| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 22中文网久久字幕| 免费大片18禁| 又爽又黄a免费视频| 国产av码专区亚洲av| 日韩三级伦理在线观看| 最近的中文字幕免费完整| 国产在线男女| 五月伊人婷婷丁香| 免费观看的影片在线观看| 国产探花在线观看一区二区| 婷婷色麻豆天堂久久 | 一级爰片在线观看| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲人成网站在线播| 亚洲av中文字字幕乱码综合| av在线蜜桃| 久久国产乱子免费精品| 美女国产视频在线观看| 欧美精品国产亚洲| 精品免费久久久久久久清纯| 国产亚洲精品久久久com| 婷婷色av中文字幕| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 欧美不卡视频在线免费观看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 亚洲欧美日韩高清专用| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产亚洲精品av在线| 1000部很黄的大片| 亚洲国产精品专区欧美| 午夜老司机福利剧场| 国产免费又黄又爽又色| 成人三级黄色视频| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲丝袜综合中文字幕| 哪个播放器可以免费观看大片| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产乱人偷精品视频| 国产成人精品久久久久久| 久久久久久国产a免费观看| 桃色一区二区三区在线观看| 色网站视频免费| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 国产亚洲一区二区精品| 欧美日韩综合久久久久久| 国产成年人精品一区二区| 午夜激情欧美在线| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲国产欧美在线一区| 国产亚洲一区二区精品| 在线观看66精品国产| 日韩三级伦理在线观看| 午夜激情福利司机影院| 高清视频免费观看一区二区 | 毛片一级片免费看久久久久| 看黄色毛片网站| 欧美日韩精品成人综合77777| 亚洲国产最新在线播放| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 日韩制服骚丝袜av| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产伦在线观看视频一区| 国产一区二区在线观看日韩| 丰满少妇做爰视频| 亚洲性久久影院| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 97人妻精品一区二区三区麻豆| 91精品伊人久久大香线蕉| 又爽又黄a免费视频| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 一级毛片久久久久久久久女| 在线播放国产精品三级| 亚洲精品,欧美精品| 一二三四中文在线观看免费高清| 午夜视频国产福利| 久久久久精品久久久久真实原创| 午夜激情福利司机影院| 国产精品一区二区在线观看99 | 少妇裸体淫交视频免费看高清| 亚洲不卡免费看| 永久免费av网站大全| 午夜亚洲福利在线播放| 成人综合一区亚洲| 免费播放大片免费观看视频在线观看 | 观看免费一级毛片| 亚洲成人精品中文字幕电影| 日本欧美国产在线视频| 一个人看视频在线观看www免费| 搞女人的毛片| 精品午夜福利在线看| 日本黄色片子视频| 波野结衣二区三区在线| 久久久精品欧美日韩精品| 久久精品国产亚洲av天美| 边亲边吃奶的免费视频| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 看片在线看免费视频| 色噜噜av男人的天堂激情| 欧美色视频一区免费| 国产成人一区二区在线| 高清av免费在线| 亚洲欧美精品综合久久99| 寂寞人妻少妇视频99o| 青青草视频在线视频观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 中文天堂在线官网| 一区二区三区免费毛片| 欧美日韩国产亚洲二区| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 成人二区视频| 亚洲精品aⅴ在线观看| 两个人视频免费观看高清| 一级爰片在线观看| 日本wwww免费看| 久久精品夜色国产| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 特级一级黄色大片| 亚洲av成人av| 九九爱精品视频在线观看| 边亲边吃奶的免费视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| av在线亚洲专区| 久久久久久久久久黄片| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产三级在线视频| 亚洲国产色片| 小说图片视频综合网站| 天美传媒精品一区二区| 精品国内亚洲2022精品成人| 亚洲欧洲国产日韩| 成年免费大片在线观看| 精品熟女少妇av免费看| 国产精品久久视频播放| 亚洲欧美成人精品一区二区| 高清av免费在线| 亚洲久久久久久中文字幕| 日韩av在线免费看完整版不卡| 日韩av在线大香蕉| 国产午夜精品一二区理论片| 国产精品,欧美在线| 免费看日本二区| 国产免费福利视频在线观看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 联通29元200g的流量卡| 久久这里只有精品中国| 日本黄色片子视频| 1000部很黄的大片| 久久久久九九精品影院| 一个人看的www免费观看视频| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 亚洲精品一区蜜桃| 国产av在哪里看| 午夜精品在线福利| 亚洲欧美日韩东京热| 国产一区二区在线av高清观看| 午夜精品国产一区二区电影 | 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 欧美高清性xxxxhd video| 日韩av不卡免费在线播放| 成人无遮挡网站| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲av福利一区| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产一区二区三区av在线| 久久久国产成人免费| 夫妻性生交免费视频一级片| 狠狠狠狠99中文字幕| 成人欧美大片| 国产成年人精品一区二区| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 午夜日本视频在线| 熟女人妻精品中文字幕| 1000部很黄的大片| 午夜精品在线福利| 精品国产露脸久久av麻豆 | 国产在视频线精品| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 插阴视频在线观看视频| 波野结衣二区三区在线| 91久久精品国产一区二区成人| 波多野结衣巨乳人妻| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 国产精品一二三区在线看| 国产一级毛片七仙女欲春2| 欧美成人a在线观看| 亚洲,欧美,日韩| 一边亲一边摸免费视频| 国产综合懂色| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 日韩欧美 国产精品| 天天躁日日操中文字幕| 国产毛片a区久久久久| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 婷婷色av中文字幕| 国产一区二区三区av在线| 国产成人aa在线观看| 国产熟女欧美一区二区| 久久午夜福利片| 特级一级黄色大片| or卡值多少钱| 国产在线男女| a级毛片免费高清观看在线播放| 亚洲在线自拍视频| 亚洲自偷自拍三级| 成人美女网站在线观看视频| 亚洲自偷自拍三级| 亚洲在线自拍视频| 国产男人的电影天堂91| 国产色爽女视频免费观看| 草草在线视频免费看| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 亚洲欧美精品专区久久| 啦啦啦啦在线视频资源| 亚洲欧美精品专区久久| 一级黄片播放器| 身体一侧抽搐| 亚洲四区av| 99视频精品全部免费 在线| 日韩av在线大香蕉| 网址你懂的国产日韩在线| 日本av手机在线免费观看| 97超碰精品成人国产| 亚洲欧洲日产国产| 可以在线观看毛片的网站| 五月玫瑰六月丁香| 免费观看精品视频网站| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 最近最新中文字幕大全电影3| 久久99热这里只有精品18| 久热久热在线精品观看| 日韩中字成人| 精品久久久久久成人av| 日韩精品有码人妻一区| 欧美极品一区二区三区四区| 久久精品国产自在天天线| 国产亚洲一区二区精品| 国产一区二区三区av在线| a级毛色黄片| 日韩精品青青久久久久久| 乱系列少妇在线播放| 两个人的视频大全免费| 男插女下体视频免费在线播放| 免费av不卡在线播放| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲在久久综合| 一级毛片久久久久久久久女| 国产成人freesex在线| 免费看美女性在线毛片视频| 国产亚洲精品av在线| 亚洲人与动物交配视频| 大话2 男鬼变身卡| 亚洲av免费高清在线观看| 国产精品久久久久久久电影| 99久国产av精品国产电影| 欧美日韩综合久久久久久| 好男人视频免费观看在线| 精品酒店卫生间| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲成色77777| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 亚洲精品影视一区二区三区av| 99久久九九国产精品国产免费| 岛国在线免费视频观看| 少妇高潮的动态图| 精品久久久久久久末码| 国产高清不卡午夜福利| 一区二区三区乱码不卡18| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 亚洲国产精品国产精品| 国产精品一及| 欧美一级a爱片免费观看看| av又黄又爽大尺度在线免费看 | 久久99热这里只有精品18| 欧美成人午夜免费资源| 我的女老师完整版在线观看| 国产日韩欧美在线精品| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 青春草视频在线免费观看| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 青春草视频在线免费观看| 少妇的逼好多水| 免费观看精品视频网站| 长腿黑丝高跟| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 精品无人区乱码1区二区| 久久欧美精品欧美久久欧美| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 久久99蜜桃精品久久| 婷婷色av中文字幕| 成人国产麻豆网| 99久久成人亚洲精品观看| 我的女老师完整版在线观看| 青春草视频在线免费观看| 亚洲欧洲日产国产| 国产精品不卡视频一区二区| 国产黄片视频在线免费观看| 亚洲成色77777| 一级毛片我不卡| 亚洲av二区三区四区| 亚洲精品影视一区二区三区av| 欧美日韩综合久久久久久| 国产精华一区二区三区| 永久免费av网站大全| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 亚洲精品亚洲一区二区| 久久久国产成人精品二区| 国产精品福利在线免费观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 草草在线视频免费看| videos熟女内射| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 日本一二三区视频观看| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产成人aa在线观看| 国产极品天堂在线| 老司机福利观看| 日本wwww免费看| 国产高清三级在线| 色哟哟·www| 中国美白少妇内射xxxbb| 视频中文字幕在线观看| 免费av不卡在线播放| 禁无遮挡网站| 寂寞人妻少妇视频99o| 国产美女午夜福利| 亚洲国产精品sss在线观看| 欧美成人免费av一区二区三区| 日韩中字成人| 国产色爽女视频免费观看| 国产成人精品一,二区| 亚洲av免费在线观看| 国产探花在线观看一区二区| 淫秽高清视频在线观看| 九草在线视频观看| 一本久久精品| 日韩一本色道免费dvd| 国产精品一二三区在线看| 精品久久久久久久久亚洲| 别揉我奶头 嗯啊视频| 亚洲精品色激情综合| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 18禁在线无遮挡免费观看视频| 欧美区成人在线视频| 亚洲四区av| 日韩精品青青久久久久久| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 免费播放大片免费观看视频在线观看 | av天堂中文字幕网| 国产淫片久久久久久久久| 日韩av在线免费看完整版不卡| 男人狂女人下面高潮的视频| 婷婷六月久久综合丁香| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产视频首页在线观看| 亚洲最大成人中文| 插阴视频在线观看视频| 亚洲精品自拍成人| 中文字幕免费在线视频6| 免费电影在线观看免费观看| 可以在线观看毛片的网站| 偷拍熟女少妇极品色| 国产精品国产高清国产av| 亚洲综合精品二区| 波多野结衣高清无吗| 中文字幕制服av| 亚洲精品乱久久久久久| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 99国产精品一区二区蜜桃av| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 国产日韩欧美在线精品| 青春草亚洲视频在线观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| 插阴视频在线观看视频| 久久欧美精品欧美久久欧美| 成人亚洲精品av一区二区| 久久久久久久久久黄片| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 69av精品久久久久久| 熟女电影av网| 最近的中文字幕免费完整| 欧美日韩精品成人综合77777| 久久人妻av系列| 男女边吃奶边做爰视频| www.av在线官网国产| 最后的刺客免费高清国语| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 晚上一个人看的免费电影| 97超视频在线观看视频| 尾随美女入室| 亚洲va在线va天堂va国产| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 特大巨黑吊av在线直播| 在线免费观看的www视频| 日韩在线高清观看一区二区三区| 免费搜索国产男女视频| 国产爱豆传媒在线观看| 久久久久久久国产电影| 99在线人妻在线中文字幕| 欧美日韩国产亚洲二区| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 中文字幕av成人在线电影| 亚洲av不卡在线观看| 97超视频在线观看视频| 91狼人影院| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 高清毛片免费看| 亚洲欧洲日产国产| 成年版毛片免费区| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| av免费观看日本| 国产日韩欧美在线精品| 日本av手机在线免费观看| 日本黄色视频三级网站网址| 久久99热6这里只有精品| 亚洲综合色惰| 欧美日本视频| 亚洲精品国产av成人精品| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 免费观看a级毛片全部| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 丰满少妇做爰视频| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 国产av一区在线观看免费| 综合色av麻豆| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产一区二区在线观看日韩| 中文字幕久久专区| av在线播放精品| 午夜福利网站1000一区二区三区| 晚上一个人看的免费电影| 长腿黑丝高跟| 少妇高潮的动态图| 久99久视频精品免费| 26uuu在线亚洲综合色| 亚洲丝袜综合中文字幕| 国产成人a∨麻豆精品| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 成年av动漫网址| 国国产精品蜜臀av免费| 亚洲av二区三区四区| 免费黄色在线免费观看| 天天一区二区日本电影三级| 国产精华一区二区三区| 久久国产乱子免费精品| 免费观看精品视频网站| 国产免费视频播放在线视频 | 中文字幕熟女人妻在线| 国产av码专区亚洲av| 色视频www国产| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲欧美日韩东京热| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲欧洲国产日韩| 国产精品人妻久久久久久| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| av播播在线观看一区| 午夜精品一区二区三区免费看| 一区二区三区四区激情视频| 国产精品综合久久久久久久免费| 亚洲美女搞黄在线观看| 乱人视频在线观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产v大片淫在线免费观看| 少妇的逼好多水| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 直男gayav资源| 乱人视频在线观看| 国产极品精品免费视频能看的| 国产精品久久久久久久久免| 国产精品三级大全| 成人亚洲欧美一区二区av| 免费在线观看成人毛片| 亚洲av免费在线观看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲成人久久爱视频| 国产成人91sexporn| 亚洲,欧美,日韩| av女优亚洲男人天堂| 国产伦精品一区二区三区视频9| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲四区av| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 国产免费视频播放在线视频 | 丰满乱子伦码专区| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 亚洲性久久影院| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲av成人精品一二三区| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 欧美色视频一区免费| 久久这里只有精品中国| 亚洲无线观看免费| 免费观看的影片在线观看| 色噜噜av男人的天堂激情| 日韩在线高清观看一区二区三区| 毛片女人毛片| 亚洲av成人精品一二三区| 亚洲性久久影院| 国产精品一区www在线观看| 亚洲av.av天堂| 搞女人的毛片| 51国产日韩欧美| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 人体艺术视频欧美日本| 久久草成人影院| 九九热线精品视视频播放| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产精品久久电影中文字幕| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 91久久精品电影网|