高效液相色譜法測定丹毒寧膠囊中的綠原酸

楊曉東

【摘要】目的：建立丹毒寧膠囊中綠原酸的測定方法。方法：本次研究采用高效液相色譜法，色譜柱為Agilent TG-C18（250mm×4.6mm，5μm）；檢測波長324nm；流動相：甲醇-水-冰醋酸，比例為12:88:1；柱溫30℃；體積流量為1.0mL/min。結果：在0。1267-0.760μg上綠原酸線性關系良好，RSD為0.6%，回收率為98.6%。結論：在對丹毒寧膠囊綠原酸進行測定時，選擇高效液相色譜法測定具有重現性好，準確、簡便等多種優(yōu)點，適用于丹毒寧膠囊的綠原酸測定。

【關鍵詞】高效液相色譜法、丹毒寧、綠原酸

【中圖分類號】R722.12 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949(2014)06-0188-01

丹毒寧膠囊中的主要成分為連翹、重樓、玄參、金銀花、黃柏、地黃、蒲公英以及紫花地丁，是醫(yī)院中常用的一種制劑，丹毒寧膠囊具有消腫止痛、清熱解毒等功效，在臨床上通常用來治療惡寒發(fā)熱、復發(fā)性丹毒靜脈炎、丹毒、紅腫熱痛等癥狀［1］。由于在醫(yī)療機構制劑標準中并沒有丹毒寧膠囊的測定項，所以并不利于對質量的控制［2］。綠原酸則被認為是所有藥材以及中成藥中消炎利膽、抗菌解毒的有效成分，被人們用作定量、定性的重要指標。本次研究將選擇丹毒寧膠囊中綠原酸為定量測定指標，并且通過高效液相色譜法測定丹毒寧中綠原酸的含量，現將報道如下。

1儀器與方法

1.1選用儀器與樣品

本次研究中所選用的儀器為SHIMADZULC-2010A高效液相色譜儀，工作站CLASS-VP；色譜柱：Agilent TC-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）。所用試劑為：(由天津市康科德科技有限公司生產)甲醇;冰醋酸（天津化學試劑一廠），純凈水。本次研究中樣品為丹毒寧膠囊（批號200801、200802、200803）對照品為綠原酸（中國藥品生物制品檢定所，批號：110753）

1.2方法

本次研究色譜柱為：AgilentTC-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-水-冰醋酸，比例為12:88:1；檢測波長為324nm；柱溫：30℃；體積流量：1.0mL/min。根據綠原酸峰計算理論板數，在4000以上。選取適量綠原酸做對照品，精密稱定，加入40μg/ml甲醇制成溶液，并將其搖勻。取裝量差異項下的本品內容物，研細，取1g，并精密稱定，放置于錐形瓶中，同時加入50%甲醇50ml，稱定質量，并行超聲處理，功率為250W，頻率為33kHz，45min，將其放冷，對質量進行稱定，其中減失的質量用50%甲醇補足，并且將其搖勻，濾過，取續(xù)濾液獲得。根據丹毒寧膠囊中處方配比，將綠原酸外的其他藥味去除，制成陰性對照膠囊，以上述方法制作成陰性對照溶液。

分別精密吸取10μg供試品溶液、10μg對照品溶液以及10μg陰性對照溶液，注入色譜儀，根據上述色譜條件進行測定，同時準確記錄色譜圖。經結果表明，在綠原酸對照品色譜峰相應位置，陰性對照溶液并未出現干擾峰。

1.2.1線性關系

在對照品溶液中，分別精密吸取3、6、9、12、15、18μL，注入色譜儀，根據色譜條件對各自峰面積進行測定，橫坐標x以進樣量（μg）表示，峰面積積分值以縱坐標（Y）行線性回歸，其方程為：Y=2.731×106X+4.54×102。通過試驗發(fā)現在0.127-0.76μg綠原酸線性關系良好。

1.2.2精密度試驗

選取丹毒寧膠囊樣品1分，批號為200801，取裝量差異項下的本品內容物，研細，取1g，并精密稱定，放置于錐形瓶中，同時加入50%甲醇50ml，稱定質量，并行超聲處理，功率為250W，頻率為33kHz，45min，將其放冷，對質量進行稱定，其中減失的質量用50%甲醇補足，并且將其搖勻，濾過，取續(xù)濾液獲得。連續(xù)6次對綠原酸峰面積進行測定，試驗結果得出RSD為0.12%。

1.2.3重現性試驗

選擇同一批丹毒寧膠囊樣品，批號為200801共6份，根據“1.2.2”中方法制作成試品溶液，再根據色譜柱為：AgilentTC-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-水-冰醋酸，比例為12:88:1；檢測波長為324nm；柱溫：30℃；體積流量：1.0mL/min。根據綠原酸峰計算理論板數，在4000以上。對每份樣品中綠原酸的量進行測定。測試結果得RSD為0.75%。

1.2.4穩(wěn)定性試驗

選擇丹毒寧膠囊樣品根據上述方法制成試品溶液，再根據色譜條件分別在0.4.8.11h測定樣品中綠原酸峰面積，其結果測得 RSD為0.55%，由此說明樣品溶液在12h內較為穩(wěn)定。

1.2.5回收率試驗

選取丹毒寧膠囊，將其混勻，樣本共6份，每份0.5g，精密稱定，將樣品置于錐形瓶中，往其中加入綠原酸對照品溶液（0.03752mg/mL）25mL，50%甲醇溶液25ml，對質量進行稱定，行超聲處理，其功率為250W，頻率33kHz，時間為45min，將其放冷后再稱定質量，減失的質量用50%甲醇補足，取續(xù)濾液［3］。同時吸取10μL注入色譜儀，測定綠原酸的質量，同時對綠原酸的回收率進行計算。最終得出RSD為0.5%，回收率高達97%。

2結果

選擇3批丹毒寧膠囊樣品，根據1.2.2中方法調制試品溶液，進樣10μL，采用外標法對綠原酸的量進行測定，結果見表1.

表1丹毒寧膠囊綠原酸的測定結果

批號 綠原酸/（mg?g-1）200801 1.82200802 1.78200803 1.833討論

在本次研究中，分別對丹毒寧樣品進行了50%乙醇加熱回流處理、50%甲醇超聲處理、50%甲醇加熱回流處理以及50%乙醇超聲處理，經過研究發(fā)現50%甲醇提取方法效果最佳。同時從本次試驗中發(fā)現，與甲醇加熱回流處理方法相比，超聲處理結果更好，所以本次研究試驗樣品試用50%甲醇超聲提取法［4］。同時還對不同超聲提取時間進行了比較分析，最后發(fā)現在45min和60min時綠原酸的量均相同，所以確定提取時間為45min，以此種方法來制備供試品溶液［5］。

在對丹毒寧膠囊綠原酸進行測定時，選擇高效液相色譜法測定具有重現性好，準確、簡便等多種優(yōu)點，適用于丹毒寧膠囊的綠原酸測定。

參考文獻

［1］姚輝,賀星. 高效液相色譜法測定丹毒寧膠囊中的綠原酸［J］. 現代藥物與臨床,2013,05:296-297.

［2］田兆紅,陳鳳,曾春美. 高效液相色譜法測定速感寧膠囊中綠原酸含量［J］. 中國藥業(yè),2012,19:233-234.

［3］王炎焱,黃烽,孫永慧. 高效液相色譜法測定脊痛寧膠囊中綠原酸的含量［J］. 中國中醫(yī)藥信息雜志,2013,09:145-146.

［4］費揚,王慧,凌水花,張國慶,張祖艷. 反相高效液相色譜法測定烏金膠囊中綠原酸的含量［J］. 藥學實踐雜志,2011,06:460-461.

［5］趙永成. 高效液相色譜法測定杜仲葉中的綠原酸［J］. 色譜,2012,03:263-264.