痰濕體質(zhì)高血壓病患者瘦素RS1137101基因與心血管功能的相關(guān)研究1）

錢岳晟，王 彥，楊 龑，高平進(jìn)，朱鼎良

高血壓病是一種多基因遺傳性疾病，以心血管的易損性生物標(biāo)志結(jié)合相關(guān)基因的多態(tài)性進(jìn)行分型尋找遺傳特征是當(dāng)前的研究熱點(diǎn)。中醫(yī)的體質(zhì)分類綜合先天和后天因素為遺傳學(xué)研究提供了一條很好的途徑。以高血壓病為切入點(diǎn)，用中醫(yī)學(xué)的體質(zhì)論，研究痰濕質(zhì)的病理生理特征已經(jīng)有較多的報(bào)道。有研究從人體的糖、脂代謝，胰島素抵抗、脂聯(lián)素水平以及心臟血管結(jié)構(gòu)功能方面研究，發(fā)現(xiàn)一些與其相關(guān)的遺傳標(biāo)記［1－3］。本研究以瘦素受體基因（leptin receptors，Lepr）RS1137101基因的多態(tài)性探討心臟血管的結(jié)構(gòu)功能與瘦素受體基因之間的關(guān)系，尋找在遺傳方面的生物標(biāo)志。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)準(zhǔn)

1.1.1 診斷標(biāo)準(zhǔn) 高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)為病史中有不同日3次以上偶測(cè)收縮壓和（或）舒張壓≥140／90mmHg（1mmHg＝0.133 kPa）［4］。參照王琦等制定的中醫(yī)痰濕體質(zhì)的判定［5］和匡調(diào)元的體質(zhì)分類［6］，根據(jù)高血壓的特點(diǎn)痰濕體質(zhì)判斷標(biāo)準(zhǔn)：體形肥胖，中脘痞滿，口甜黏，身重如裹，大便不實(shí)，口干不飲，胸滿昏眩，脈濡或滑，舌苔膩。不符合此標(biāo)準(zhǔn)的為非痰濕體質(zhì)患者，作為對(duì)照組。

1.1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) 2001年—2004年在瑞金醫(yī)院高血壓科住院的上海籍原發(fā)性高血壓患者，年齡18歲～80歲，性別不限，并簽署知情同意書。

1.1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) 經(jīng)詢問(wèn)病史、體格檢查和實(shí)驗(yàn)室檢查排除繼發(fā)性高血壓和糖尿病。

1.2 方法

1.2.1 一般檢查及生化檢測(cè) 受試者在停用對(duì)糖代謝可能影響的降壓藥（β－受體阻滯劑、噻嗪類利尿劑）2周后，由專人測(cè)量坐位血壓，每次測(cè)壓3遍，取3遍讀數(shù)的均值作為血壓值；測(cè)量身高、體重，以體重／身高獲得體重指數(shù)（BMI）。

1.2.2 左室肥厚和頸動(dòng)脈內(nèi)膜檢測(cè) 采用荷蘭飛利浦公司生產(chǎn)的IE33 彩色多普勒超聲診斷儀。探頭頻率（3～11）MHz。取胸骨旁左室長(zhǎng)軸切面，應(yīng)用M 型超聲及二維超聲技術(shù)，測(cè)量舒張末期室間隔厚度（IVST）、左室后壁厚度（PWT）及左室腔內(nèi)徑（LVEDD），根據(jù)Devereux公式計(jì)算左室重量（LVM）及左室重量指數(shù)（LVMI）。分別檢測(cè)雙側(cè)頸總動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈及頸外動(dòng)脈，測(cè)量各血管內(nèi)徑及頸總動(dòng)脈內(nèi)膜－中膜厚度（IMT），左右各測(cè)量3次，取平均值。IMT 的檢測(cè)方法是選取頸總動(dòng)脈距離分叉處近心端15mm 處的遠(yuǎn)側(cè)血管壁。放大圖像直到能清晰顯示血管壁的結(jié)構(gòu)，測(cè)量從血管內(nèi)膜的內(nèi)表面到中膜的外表面的垂直距離，以QLab軟件自動(dòng)測(cè)量。

1.2.3 基因測(cè)定 對(duì)Lepr基因RS1137101進(jìn)行多態(tài)性分型。每個(gè)受試者檢測(cè)前都簽署知情同意書，取外周靜脈血4mL，抽提 DNA，采 用 MALDI－TOF 質(zhì) 譜 檢 測(cè) 技 術(shù) 進(jìn) 行ADD 1Gly 4 6 0Trp分型。應(yīng)用MassARRAYTM Assay Design 2.0軟 件 設(shè) 計(jì)PCR 引 物。經(jīng) 多 重PCR 擴(kuò) 增、PCR 產(chǎn) 物SAP 純化、延伸反應(yīng)、樹(shù)脂純化后，將純化產(chǎn)物點(diǎn)樣Spectro CHIP 芯片。MassARRAYTM Analyzer質(zhì)譜檢測(cè)，運(yùn)行MassARRAYTM Typer 3.0.1軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，并輸出基因類型［7］。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)。計(jì)量資料用t檢驗(yàn)，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，組間比較采用以性別、年齡、收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）和BMI進(jìn)行校正的方差分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者一般情況 508例原發(fā)性高血壓患者，經(jīng)中醫(yī)體質(zhì)分類，符合痰濕質(zhì)體質(zhì)判斷標(biāo)準(zhǔn)（痰濕質(zhì)組）264例，非痰濕體質(zhì)（非痰濕質(zhì)組）244例。兩組病程和IMT 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.038，0.01）。

經(jīng)校正性別、年齡、病程、SBP、DBP和BMII后，LVMI兩組間分別為172.97±6.21和157.32±0.65，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.085），但與病程和BMI相關(guān)（P＝0.001，0.025）；IMT 值分別為（0.65±0.01）mm 和（0.62±0.01）mm，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.019），與性別、年齡、SBP和DBP相關(guān)（P＝0.02，0.006，0.001，0.022）。詳見(jiàn)表1。

表1 兩組患者一般情況比較

表3 兩組患者Lepr基因的RS1137101多態(tài)性與LVM 和IMT 的相關(guān)性分析

表3 兩組患者Lepr基因的RS1137101多態(tài)性與LVM 和IMT 的相關(guān)性分析

與非痰濕質(zhì)組比較，1）P＜0.05

項(xiàng)目 痰 濕 質(zhì) 組 AA非痰濕質(zhì)組 痰濕質(zhì)組AG非痰濕質(zhì)組 痰濕質(zhì)組GG非痰濕質(zhì)組LVM（g／m2） 265.769±102.797 165.608±59.470 162.699±17.053 148.658±16.739 172.950±6.51 157.872±6.990 IMT（mm） 0.768±0.0351） 0.626±0.020 0.689±0.030 0.640±0.030 0.647±0.0121） 0.611±0.013

2.2 兩組患者Lepr基因的RS1137101多態(tài)性比較 痰濕質(zhì)組高血壓患者Lepr基因RS1137101的AA、AG 和GG 的分布分別占1.5%、12.5%和80.6%，非痰濕質(zhì)組高血壓患者分別占4.9%、13.9%和81.1%，兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。A 等位基因和G 等位基因兩組分別占8.0%、92.0%和11.9%、88.1%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳見(jiàn)表2。

表2 兩組患者Lepr基因RS1137101多態(tài)性分布比較 例（%）

2.3 兩組患者Lepr基因的RS1137101多態(tài)性與LVM 和IMT的相關(guān)性分析 痰濕質(zhì)組高血壓患者的Lepr 基因的RS1137101的AA 型和GG 型在LVM 和IMT 值比非痰濕質(zhì)組患者明顯升高，IMT 值有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.017、0.039），而LVM 值差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳見(jiàn)表3。

3 討 論

痰濕質(zhì)是原發(fā)性高血壓患者中最常見(jiàn)的體質(zhì)類型之一［8］，痰濕質(zhì)高血壓病患者存在血脂、血糖、胰島素抵抗、脂聯(lián)素水平等代謝方面的異常，且比其他體質(zhì)患者更為明顯，存在更容易發(fā)生靶器官損害的傾向［9－11］。左心室肥厚程度和頸動(dòng)脈內(nèi)膜厚度是評(píng)估高血壓靶器官損害的指標(biāo)之一［4］，本研究以LVMI和IMT 為指標(biāo)，探討不同體質(zhì)高血壓患者在心血管的結(jié)構(gòu)和功能方面差異，發(fā)現(xiàn)痰濕體質(zhì)的高血壓病患者LVM 和IMT 均比非痰濕體質(zhì)高血壓病患者高，在校正了性別、年齡、病程、SBP、DBP和BMI后，這種差異仍然存在，痰濕質(zhì)組與非痰濕質(zhì)組高血壓病患者LVMI分別為1 7 2.9 7±6.2 1和1 5 7.3 2±0.65，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.085），但與病程和BMI呈正相關(guān)（P＝0.001，0.0 2 5）；而IMT值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.019），差異還與性別、年齡、SBP和DBP相關(guān)（P＝0.0 2，0.006，0.001，0.022）。說(shuō)明高血壓病程和患者BMI導(dǎo)致了心臟重塑，血壓升高將會(huì)增加血管內(nèi)膜厚度的變化，再次證明痰濕體質(zhì)高血壓病患者將增加心血管病風(fēng)險(xiǎn)。

中醫(yī)體質(zhì)分類綜合先天和后天因素為遺傳學(xué)研究提供了一條很好的途徑。以痰濕體質(zhì)作為病理特征，在高血壓病患者中，結(jié)合亞臨床的靶器官損害指標(biāo)尋找心血管的易損性生物標(biāo)志，可以為早期預(yù)防和早期治療提供有效信息。Lepr基因的多態(tài)性早期認(rèn)為與能量代謝有關(guān)［12］，Lepr基因RS1137101的變異Salopuro在芬蘭人中發(fā)現(xiàn)與糖尿病密切相關(guān)［13］，Guízar在墨西哥人群中GG 和GA 型中心臟交感神經(jīng)活性，體脂含量和瘦素水平明顯升高［14］。也有報(bào)道與高血壓相關(guān)［15－17］，但基因的多態(tài)性尚未有一致的結(jié)論［18］。本研究的結(jié)果顯示痰濕體質(zhì)和非濕體質(zhì)高血壓病患者在Lepr基因RS1137101的分布沒(méi)有顯著的差異，AA 型和GG 型的痰濕質(zhì)高血壓患者LVM 和IMT 值均比非痰濕質(zhì)組患者升高，兩組間IMT 差值有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而LVM 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。有報(bào)道認(rèn)為L(zhǎng)epr基因的RS1137101的A 等位基因與原發(fā)性高血壓患者動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)［19］，GG型基因高血壓患者左心室功能、腎血流動(dòng)力學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)變化更明顯［20］。由于Lepr基因RS1137101的AA 型在人群中所占的比例較低，其結(jié)果是否有普遍的臨床意義，還有待擴(kuò)大樣本做進(jìn)一步驗(yàn)證。

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