鷹嘴豆芽素A對(duì)雌激素缺乏誘發(fā)大鼠骨質(zhì)疏松癥的作用

周延萌，寧慧嫻，張小敏，高允生，武繼彪

（1.山東中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，山東濟(jì)南 250355；2.泰山醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，山東 泰安 271016）

骨質(zhì)疏松（osteoporosis，OP）是以骨量減少，骨組織微細(xì)結(jié)構(gòu)破壞，骨脆性增加為特征的一種系統(tǒng)性、全身性骨骼疾病，是最常見的老年性骨代謝疾病，女性因絕經(jīng)后雌激素明顯缺乏而易發(fā)生。鷹嘴豆芽素A（biochanin A）來源于豆科植物鷹嘴豆種子的胚芽部分，紅車軸草全草等，已證實(shí)具有雌激素樣作用。本研究通過去卵巢手術(shù)，建立大鼠絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型，研究鷹嘴豆芽素A對(duì)去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠的作用，并觀察其對(duì)大鼠乳腺組織的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用60只6月齡♀ Wistar大鼠，體質(zhì)量（300±30）g，山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（魯）2005－0017。

1.2 藥物及試劑 鷹嘴豆芽素A（陜西慈緣生物技術(shù)有限公司，含量為99.67%）；β-雌二醇（Sigma公司）；雌二醇放免試劑盒購(gòu)自北京北方生物技術(shù)研究所。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 DPX-L型雙能X線骨密度儀（美國(guó)Lunar公司）；SN695型放射免疫計(jì)數(shù)器（上海日環(huán)儀器廠）；RM2145型石蠟切片機(jī)（德國(guó)LEICA公司）。

1.4 藥物配制 取鷹嘴豆芽素A，用無水乙醇、吐溫80、蒸餾水以1∶1∶8充分?jǐn)嚢枞芙猓?］，按 10 ml·kg－1體積配成不同劑量組（7，20，60 mg·kg－1）；β-雌二醇也用無水乙醇、吐溫80、蒸餾水以1∶1∶8配制，給藥劑量為 0.35 mg·kg－1。

1.5 模型制備及給藥 大鼠10%水合氯醛（0.3 ml／100 g）麻醉后，無菌條件下切除雙側(cè)卵巢，假手術(shù)組只切除卵巢附近一塊脂肪組織。術(shù)后d 8，對(duì)去卵巢大鼠進(jìn)行連續(xù)5 d的陰道涂片檢查，所有大鼠未處于動(dòng)情周期，用于試驗(yàn)。術(shù)后第4周開始灌胃給藥，假手術(shù)組及去卵巢模型組大鼠給予等容量溶劑，連續(xù)12周。

1.6 指標(biāo)及方法

1.6.1 股骨骨密度測(cè)定 取左后肢股骨，剝離干凈后以紗布包裹標(biāo)號(hào)，放于生理鹽水中，置于－20℃冰箱中待測(cè)骨密度。采用DPX-L型雙能X線骨密度檢測(cè)儀測(cè)試大鼠股骨骨密度。

1.6.2 雌激素水平測(cè)定 末次給藥6 h后，大鼠股動(dòng)脈取血，進(jìn)行雌激素水平測(cè)定。血清雌二醇含量用放射免疫法測(cè)定。

1.6.3 脛骨、乳腺組織形態(tài)學(xué)觀察 取大鼠同側(cè)脛骨和乳腺，迅速浸入10%的福爾馬林固定，脛骨用硝酸法脫鈣，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡觀察脛骨和乳腺組織形態(tài)變化。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 各項(xiàng)參數(shù)均表示為ˉx±s，采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，多組間比較采用方差分析。

2 結(jié)果

2.1 鷹嘴豆芽素A對(duì)OVX大鼠體重的影響 在造模的4個(gè)月時(shí)間里，模型組大鼠體重增長(zhǎng)較快，在給予鷹嘴豆芽素A3個(gè)月過程中，大鼠體重的增長(zhǎng)有所控制，與假手術(shù)組相近。雌激素組與模型組比較體重明顯下降（P＜0.05），見Tab 1。

2.2 鷹嘴豆芽素A對(duì)OVX大鼠股骨骨密度的影響 結(jié)果表明，模型組大鼠股骨骨密度與假手術(shù)組比較明顯降低（P＜0.05）。鷹嘴豆芽素A和雌二醇能明顯增加骨質(zhì)疏松大鼠股骨的骨密度，其中高、中劑量組效果明顯（P＜0.01），見 Tab 2。

2.3 鷹嘴豆芽素A對(duì)OVX大鼠體內(nèi)雌激素水平的影響結(jié)果表明，與假手術(shù)組比較模型組大鼠血清E2水平降低（P＜0.05）。應(yīng)用鷹嘴豆芽素A治療后，大鼠體內(nèi)E2水平不同程度升高，特別是高、中劑量組大鼠體內(nèi)E2升高明顯（P＜0.05），見 Tab 3。

2.4 大鼠脛骨組織形態(tài)學(xué)觀察 顯微鏡下，假手術(shù)組大鼠脛骨骨松質(zhì)結(jié)構(gòu)清楚，骨小梁粗細(xì)均勻，相互連接成網(wǎng)狀，骨髓充滿骨髓腔。去卵巢大鼠骨小梁稀疏、細(xì)小，骨髓腔內(nèi)含有大量脂肪細(xì)胞。鷹嘴豆芽素A各劑量組和雌激素組與模型組比較，骨組織形態(tài)均有不同程度的改善：骨小梁增多，較為粗大，且有些骨小梁相互連接，骨髓腔內(nèi)脂肪細(xì)胞減少。

2.5 大鼠乳腺組織形態(tài)學(xué)觀察 假手術(shù)組腺泡較少，腺管稍擴(kuò)張，去卵巢組未見腺泡，脂肪組織及結(jié)締組織與其他組比較稍少，乳腺呈萎縮狀態(tài)，鷹嘴豆芽素A低劑量組及中劑量組與模型組差異無顯著性，高劑量組腺泡明顯增多甚至多于雌激素組，腺管囊性擴(kuò)張。

Tab 1 Effects of biochanin A on rat weight（±s，n＝8）

Tab 1 Effects of biochanin A on rat weight（±s，n＝8）

*P＜0.05 vs model

Group Dose／mg·kg－1 Weight／g 30 days 60 days 90 days 120 days Sham － 354.20±32.91 390.36±37.61 403.92±40.67 429.92±48.05 Model － 352.33±13.60 390.60±13.13 432.18±11.96 461.27±15.87 E2 0.35 362.17±23.35 373.57±21.62 387.80±23.97 386.39±35.43*Bio A 7 361.50±24.82 375.61±13.97 408.40±26.38 432.00±23.59 Bio A 20 351.76±39.18 367.17±31.77 410.00±29.40 425.57±30.09 Bio A 60 364.67±29.04 375.57±33.40 402.91±37.92 413.83±45.21

Tab 2 Effects of biochanin A on BMD of rat femur（±s，n＝8）

Tab 2 Effects of biochanin A on BMD of rat femur（±s，n＝8）

＃P＜0.05 vs sham；**P＜0.01 vs model

Group Dose／mg·kg－1 Femur BMD／g·cm－2 Sham － 0.173±0.004 Model － 0.164±0.002＃E2 0.35 0.170±0.004 Bio A 7 0.171±0.004 Bio A 20 0.177±0.003**Bio A 60 0.183±0.002**

Tab 3 Effects of biochanin A on rat E2ˉ±s，n＝8）

Tab 3 Effects of biochanin A on rat E2ˉ±s，n＝8）

＃P＜0.05 vs sham；*P＜0.05，**P＜0.01 vs model

Group Dose／mg·kg－1 E2／ng·L－1 Sham － 2.076±0.712 Model － 1.185±0.132＃E2 0.35 2.323±0.875**Bio A 7 1.427±0.493 Bio A 20 1.977±0.332*Bio A 60 2.099±0.644*

3 討論

原發(fā)性骨質(zhì)疏松主要是雌激素缺乏。當(dāng)♀大鼠的卵巢被切除后，由于雌激素缺乏，導(dǎo)致骨代謝不平衡，成骨細(xì)胞活動(dòng)減弱，造成骨形成不足，活化破骨細(xì)胞，骨吸收亢進(jìn)，松質(zhì)骨出現(xiàn)明顯的骨丟失，骨強(qiáng)度下降，這些松質(zhì)骨的骨丟失是伴隨骨轉(zhuǎn)換增強(qiáng)而進(jìn)行的，這種特性和人正常絕經(jīng)后高轉(zhuǎn)換型骨質(zhì)疏松的骨丟失狀態(tài)有許多相似之處［2］。大鼠卵巢切除模型已被公認(rèn)為金標(biāo)準(zhǔn)模型。去卵巢大鼠由于體內(nèi)雌激素水平下降，引起脂代謝紊亂，導(dǎo)致肥胖。大鼠體重明顯增加，可部分抑制去卵巢大鼠的骨丟失，肥胖婦女絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松和骨折發(fā)病率較低可能與此有關(guān)［3］。

雖然植物雌激素被認(rèn)為是一種天然的雌激素受體調(diào)節(jié)劑，與雌激素有很大不同。多數(shù)資料顯示，植物雌激素對(duì)乳腺的作用還沒有定論。本實(shí)驗(yàn)中，大鼠去勢(shì)后乳腺組織明顯萎縮，未見明顯腺泡結(jié)構(gòu)，給予鷹嘴豆芽素A低、中劑量治療后，乳腺組織仍呈萎縮狀態(tài)，未見明顯腺泡結(jié)構(gòu)，說明一定劑量范圍內(nèi)的鷹嘴豆芽素A對(duì)乳腺組織沒有刺激增生和癌變的作用。但是高劑量的鷹嘴豆芽素A對(duì)乳腺組織的雌激素作用增強(qiáng)，腺泡明顯增多，腺管囊性擴(kuò)張。這與一些學(xué)者的高劑量異黃酮可誘導(dǎo)乳腺增生和癌變發(fā)生的論點(diǎn)吻合［4－5］，但其量效關(guān)系及機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

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