類葉升麻苷對阿爾采末病小鼠皮層caspase-3基因表達(dá)的影響

彭曉明，高 莉，霍仕霞，閆 明

（新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所，新疆維吾爾醫(yī)方劑學(xué)實(shí)驗(yàn)室，新疆烏魯木齊 830049）

阿爾采末?。ˋlzheimer’s disease，AD）是一種老年性中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，臨床表現(xiàn)為記憶力減退和認(rèn)知功能障礙。目前該病在我國65歲以上人群中發(fā)病率在3% ～5%［1］，并呈逐年上升趨勢，因此研究開發(fā)有效的AD防治藥物成為當(dāng)今醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的熱點(diǎn)。類葉升麻苷（acteoside，AS）是傳統(tǒng)補(bǔ)益中藥——肉蓯蓉中的一種苯乙醇苷類活性成分，含量在 0.3%以上。前期研究工作表明［2－4］，AS對D-半乳糖或東莨菪堿誘導(dǎo)的小鼠學(xué)習(xí)記憶以及對H2O2誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞氧化損傷均具有明顯改善作用，因此AS可能在AD治療中具有潛在應(yīng)用價值。已有研究表明［5］，通過D-半乳糖聯(lián)合三氯化鋁誘導(dǎo)小鼠90 d后，可出現(xiàn)學(xué)習(xí)記憶能力減退、老年斑及神經(jīng)細(xì)胞凋亡等AD病樣特征。caspase-3是神經(jīng)細(xì)胞凋亡調(diào)控的關(guān)鍵基因，其與AD發(fā)病具有重要聯(lián)系［6］。本實(shí)驗(yàn)利用D-半乳糖和三氯化鋁聯(lián)合誘導(dǎo)小鼠建立AD模型，研究AS對AD小鼠皮層組織中caspase-3基因表達(dá)的影響，為初步闡明AS治療AD的作用機(jī)制及其新藥研制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑 類葉升麻苷（AS，純度＞98%），由本實(shí)驗(yàn)室自制［7］；D-半乳糖（批號 1401534546030 21）購自 Sigma公司；AlCl3·6H2O（批號 20110704）為天津光復(fù)精細(xì)化工研究所產(chǎn)品；vitamin E（VitE，批號YY11518）購自上海源葉生物科技有限公司；AChE試劑盒（批號20130717）、BCA試劑盒（批號20130712）為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品；4%多聚甲醛（批號09B27C68）、SABC免疫組化試劑盒（批號SA132100）購自武漢博士德生物工程有限公司；Caspase 3一抗（批號 GR123686-1）、β-actin一抗（批號 GR123987-1）、山羊抗兔 IgG二抗（批號GR119224-5）為Abcam公司產(chǎn)品。

1.2 主要儀器 IVC獨(dú)立送風(fēng)隔離籠具（蘇州馮氏實(shí)驗(yàn)動物設(shè)備有限公司，IVC-Ⅱ），跳臺儀（濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司，YLS-3TB），分析天平［BS224S，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司］，全波長酶標(biāo)儀（美國ThermoFisher公司，Multiskan Go 1510），高速低溫離心機(jī)（美國 Beckman公司，ALLEGRA64R），光學(xué)顯微鏡（德國 LEICA公司，DM2500），生物組織攤烤片機(jī)（天津天利航空機(jī)電有限公司，KZPJ-1A），生物組織包埋機(jī)（浙江科迪儀器設(shè)備有限公司，KD-BMⅡ），組織脫水機(jī)（浙江科迪儀器設(shè)備有限公司，KEDEE KD-TS3D），石蠟切片機(jī)（德國LEICA公司，RM2135）。

1.3 動物模型制備及分組給藥 KM小鼠（♀，18±2 g），購自新疆維吾爾自治區(qū)實(shí)驗(yàn)動物中心。于IVC盒中適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d，經(jīng)強(qiáng)迫游泳和疲勞轉(zhuǎn)棒測試，剔除體能和智力較差的小鼠。選取120只小鼠，稱取體重，隨機(jī)分成6組，即：正常組，模型組，陽性藥（VitE）組，AS低、中、高劑量組，每組20只。分組完成后，正常組小鼠分別腹腔注射和灌胃10 ml·kg－1·d－1的生理鹽水，其余各組小鼠腹腔注射60 mg·kg－1·d－1的 D-半乳糖和灌胃 5 mg·kg－1·d－1的AlCl3，連續(xù)造模60 d。從 d 61開始，上午小鼠繼續(xù)造模，下午對小鼠進(jìn)行灌胃給藥，連續(xù)給藥30 d（造模和給藥共 90 d）：① 正常組：10 ml·kg－1·d－1的生理鹽水；② 模型組：10 ml·kg－1·d－1的生理鹽水；③ VitE組：150 mg·kg－1·d－1的維生素E；④ AS低劑量組：30 mg·kg－1·d－1的 AS；⑤ AS中劑量組：60 mg·kg－1·d－1的 AS；⑥ AS高劑量組：120 mg·kg－1·d－1的 AS。

1.4 跳臺法測定小鼠學(xué)習(xí)與記憶能力 小鼠造模d 89，AS給藥2 h后開始訓(xùn)練，將小鼠放入跳臺箱內(nèi)適應(yīng)環(huán)境3min，然后立即通以36V，2mA的交流電。此時，小鼠為了逃避遭受電擊而躍上安全平臺，開始計時并觀察5 min內(nèi)受電擊的次數(shù)（即錯誤次數(shù)），作為學(xué)習(xí)成績。同時記錄計時開始至小鼠走下平臺遭受電擊的時間，作為下臺潛伏期，潛伏期超過300 s，則以300 s計算。24 h后測其記憶能力：將訓(xùn)練過的小鼠穩(wěn)當(dāng)?shù)胤庞谔_上，通電并開始計時，記錄開始至小鼠走下平臺的時間（下臺潛伏期），以及5 min內(nèi)小鼠走下平臺遭受電擊的次數(shù)（即錯誤次數(shù)），作為記憶成績，進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)檢驗(yàn)。

1.5 小鼠血清與腦組織中AChE活性的測定 小鼠完成給藥和跳臺測試后，每組取10只摘眼球取血，分離血清。然后在冰上剝離腦組織并稱重，加入9倍的生理鹽水，勻漿并以3 500 r·min－1離心10 min，吸上清液備用。利用南京建成生物工程研究所的AChE試劑盒和BCA試劑盒測定小鼠血清與腦組織中AChE活性，具體測定方法為：分別設(shè)置并標(biāo)記測定管、對照管、標(biāo)準(zhǔn)管（3個）和空白管（3個）。在測定管中加入50μl的待測血清或腦組織勻漿，標(biāo)準(zhǔn)管中加入50μl的1 mmol·L－1標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液，空白管加入50μl雙蒸水，對照管不加。然后在所有管中加入500μl的底物緩沖液和500μl的顯色應(yīng)用液，混勻，37℃反應(yīng)6 min。反應(yīng)完成后，依次在所有管中加入30μl的抑制劑、100μl的透明劑、50 μl的穩(wěn)定劑，同時樣品對照管中加入50μl的待測血清或腦組織勻漿?；靹颍覝胤胖?5 min，于全波長酶標(biāo)儀測定412 nm處吸光度值。并通過公式計算小鼠血清與腦勻漿中的AChE活性。血清中AChE活力＝（測定OD值－對照OD值）／（標(biāo)準(zhǔn)OD值－空白OD值）×標(biāo)準(zhǔn)品濃度×樣品測試前稀釋倍數(shù)；腦勻漿中AChE活力＝（測定OD值－對照OD值）／（標(biāo)準(zhǔn)OD值－空白OD值）×標(biāo)準(zhǔn)品濃度÷待測樣本蛋白濃度。

1.6 HE染色觀察小鼠皮層組織結(jié)構(gòu)的變化 每組另取10只小鼠，脫頸椎處死，于冰上剝離腦組織，以預(yù)冷的生理鹽水洗滌1遍，之后將腦組織固定于4%的多聚甲醛過夜。腦組織經(jīng)常規(guī)脫水、透明、浸蠟、包埋、切片（每張切片厚度約為5μm）后，進(jìn)行HE染色。具體方法為：①二甲苯Ⅰ5 min→二甲苯Ⅱ10 min→無水乙醇、95%乙醇Ⅰ、95%乙醇Ⅱ、80%乙醇各5 s→水洗（直接入自來水洗一遍）。②蘇木精染色5～10 min。③自來水洗，洗去多余的染液（可多洗幾遍）。④鹽酸乙醇分化（先備好足夠的自來水，將切片在鹽酸乙醇缸內(nèi)快速沾一下，立即入自來水中返藍(lán)，換一遍自來水繼續(xù)返藍(lán)1 min）。⑤伊紅染液3～5 min。⑥自來水洗，洗去多余的染液（可多洗幾遍）。⑦脫水（梯度酒精80%、95%I、95%乙醇Ⅱ、無水乙醇各5 s）。⑧透明（二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各5 s），取出封片（中性樹膠）。⑨鏡檢，在顯微鏡下觀察切片并拍照。應(yīng)用Image-pro plus 6.0分析軟件分別選取相同倍數(shù)下的3個視野，進(jìn)行神經(jīng)細(xì)胞計數(shù)。

1.7 免疫組化觀察小鼠皮層組織中caspase-3的表達(dá)變化 將石蠟切片按方法“1.6”進(jìn)行脫蠟和水化，然后進(jìn)行免疫組化染色，具體方法如下：①去除內(nèi)源性過氧化物酶：3%H2O2室溫10 min，蒸餾水洗，PBS液洗。②預(yù)處理（抗原修復(fù)）：0.01 mol·L－1枸櫞酸抗原修復(fù)液，微波修復(fù)，解凍溫度（92～98）℃10 min，室溫冷卻，蒸餾水洗1遍，PBS液洗1遍。③加caspase-3一抗，37℃溫箱孵育60min或4℃冰箱過夜，PBS液洗3遍。④滴加通用型IgG抗體-HRP多聚體（二抗），37℃溫箱孵育25 min，PBS液洗3遍。⑤新鮮配制的DAB顯色液顯色（顯微鏡下控制顯色時間3～10 min），自來水終止顯色。⑥蘇木精復(fù)染5～10 min，蒸餾水洗，鹽酸乙醇分化（快速沾一下），溫水返藍(lán)1 min、脫水（梯度乙醇80%、95% Ⅰ Ⅱ、無水乙醇各5 s）、透明（二甲苯Ⅰ、Ⅱ各5 s）。⑦封片（中性樹膠），顯微鏡觀察并拍照。應(yīng)用Image-pro plus 6.0分析軟件，分別選取相同倍數(shù)下的6個視野，進(jìn)行陽性細(xì)胞計數(shù)。同時依照細(xì)胞陽性著色程度（抗原含量）進(jìn)行吸光度評分，評分標(biāo)準(zhǔn)為：弱陽性（1分），中等陽性（2分），強(qiáng)陽性（3分）。

1.8 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)均以±s表示，利用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件處理，用one-way ANOVA進(jìn)行組間比較分析。

2 結(jié)果

2.1 AS對AD小鼠學(xué)習(xí)與記憶的影響 小鼠跳臺實(shí)驗(yàn)常被用于評價癡呆小鼠被動回避學(xué)習(xí)記憶能力。與正常組比較，KM小鼠經(jīng)D-半乳糖聯(lián)合三氯化鋁誘導(dǎo)90 d后，其下臺潛伏期明顯縮短（P＜0.05），錯誤次數(shù)明顯增加（P＜0.01）。而經(jīng) AS給藥30 d后，與模型組相比，AS各劑量組均可明顯減少小鼠下臺的錯誤次數(shù)（P＜0.01），對其下臺潛伏期具有一定延長作用，但差異無顯著性（P＞0.05）。結(jié)果表明AS對D-半乳糖聯(lián)合三氯化鋁誘導(dǎo)的小鼠被動回避學(xué)習(xí)能力具有一定改善作用。從24 h后的小鼠記憶能力測試結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型組小鼠回避記憶能力明顯低于正常組小鼠，其下臺潛伏期明顯縮短（P＜0.05）、錯誤次數(shù)明顯增加（P＜0.05）。與模型組相比較，除VitE組以外，其余AS給藥組均能明顯延長下臺潛伏期（P＜0.05或P＜0.01）和減少錯誤次數(shù)（P＜0.05或 P＜0.01）。此外，AS低、中劑量組較正常組能延長小鼠下臺潛伏期（P＜0.05）和減少錯誤次數(shù)（P＜0.05或 P＜0.01），AS高劑量組也能明顯減少錯誤次數(shù)（P＜0.05），結(jié)果表明AS具有良好的改善和增強(qiáng)模型小鼠記憶能力損傷的作用（Tab 1）。

2.2 AS對AD小鼠血清和腦組織中AChE活性的影響 乙酰膽堿（ACh）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的主要神經(jīng)遞質(zhì)之一，與學(xué)習(xí)記憶密切相關(guān)，AChE是ACh的水解酶，其活力可間接反映ACh的含量，反映膽堿能神經(jīng)功能的情況。本實(shí)驗(yàn)中小鼠經(jīng)D-半乳糖和AlCl3誘導(dǎo)造模90 d后，模型小鼠血清和腦組織中AChE活力明顯高于正常組（P＜0.05），說明造模對小鼠膽堿能神經(jīng)功能有明顯的損傷作用。而經(jīng)不同濃度AS治療30 d后，與模型組比較，AS低、中劑量組均能明顯抑制 AChE活力（P＜0.05或 P＜0.01），表明除AS高劑量組以外，其余給藥組對小鼠的膽堿能神經(jīng)功能的損傷均具有改善作用（Tab 2）。

2.3 AS對AD小鼠皮層組織結(jié)構(gòu)的影響 HE染色后，神經(jīng)細(xì)胞胞質(zhì)呈紫紅色，核呈紫藍(lán)色，可以清楚地觀察細(xì)胞的整體形態(tài)。本實(shí)驗(yàn)中正常組小鼠皮層腦細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，數(shù)量較多，胞核清晰，胞質(zhì)豐富，間質(zhì)無水腫表現(xiàn)。模型組小鼠皮層神經(jīng)細(xì)胞減少，體積變小，胞核與胞質(zhì)界限模糊，核固縮呈三角形或不規(guī)則形，核仁消失。與模型組比較，VitE組小鼠皮層神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)較正常，數(shù)量較多，雖仍有不同程度的神經(jīng)細(xì)胞變形，但變形神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量明顯減少；AS低、中、高劑量組小鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，密度增高，胞核清晰，胞質(zhì)豐富。表明AS對D-半乳糖聯(lián)合三氯化鋁誘導(dǎo)小鼠皮層組織損傷具有一定的保護(hù)作用（Fig 1，2）。

2.4 AS對AD小鼠皮層組織中caspase-3表達(dá)的影響 應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法檢測各組小鼠皮層caspase-3表達(dá)的變化，光鏡下可見caspase-3免疫組化染色陽性標(biāo)記物為深淺不一的棕黃色顆粒，位于神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)。結(jié)果顯示模型組小鼠皮層組織可以見到較多的caspase-3免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元，其陽性細(xì)胞數(shù)目以及光密度值評分均較正常組明顯增高（P＜0.01）。而 AS各給藥組小鼠皮層均可見caspase-3免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元減少，染色變淺，其陽性細(xì)胞數(shù)目以及光密度值評分均較模型組明顯降低（P＜0.05或 P＜0.01），而VitE組無明顯變化（P＞0.05）（Fig 3，Tab 3）。

Tab 1 Effects of acteoside on learning and memory ofm ice induced by a combination of D-galactose and AlCl3±s，n＝12）

Tab 1 Effects of acteoside on learning and memory ofm ice induced by a combination of D-galactose and AlCl3±s，n＝12）

*P＜0.05，**P＜0.01 vs control group；＃P＜0.05，＃＃P＜0.01 vs model group.

Group Concentration／mg·kg－1·d－1 Learning Memory Step-down latency／s Error frequency／t Control 127.44±25.35 3.56±0.89 186.72±55.2 Step-down latency／s Error frequency／t 1.00±0.29 Model 86.94±27.69* 6.44±1.20** 135.72±49.58* 1.50±0.25*VitE 150 95.24±33.32 3.41±1.17＃＃ 168.65±48.65 1.41±1.58 AS 30 104.78±45.96 3.44±0.57＃＃ 252.33±61.526*＃＃ 0.56±0.25*＃＃AS 60 98.94±26.37 3.82±1.07＃＃ 258.59±70.77*＃＃ 0.29±0.22**＃＃AS 120 103.29±89.32 3.94±1.46＃＃ 216.35±101.16＃ 0.65±0.38*＃0

3 討論

AD作為一種原因不明、進(jìn)行性、與衰老相關(guān)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，是老年癡呆的最常見原因。迄今為止，AD的發(fā)病機(jī)制仍不明確，由于缺少理想的細(xì)胞及動物評價模型，因而導(dǎo)致AD的預(yù)防、治療及新藥研制受到限制。文獻(xiàn)資料顯示［8－9］，D-半乳糖會引起腦神經(jīng)元的一系列退行性變化。D-半乳糖可在醛糖還原酶的作用下生成半乳糖醇和H2O2，同時在反應(yīng)過程中生成超氧陰離子。通過對嚙齒類動物長期注射D-半乳糖可引起過量的氧自由基，在動物體內(nèi)與細(xì)胞中的脂質(zhì)、蛋白和核酸產(chǎn)生非酶糖基化、氧化應(yīng)激－自由基損傷作用及誘導(dǎo)醛糖還原酶活性增強(qiáng)等一系列病理改變，進(jìn)而使其多器官功能衰退而出現(xiàn)亞急性衰老表現(xiàn)。AD患者腦組織中的鋁含量也較正常人有所增高［10］，含量可達(dá)（3.6±2.9）mg·g－1。鋁元素具有神經(jīng)毒性，其通過離子形式可透過腸屏障和血腦屏障，進(jìn)入大腦取代Ca2＋和Mg2＋，與氨基酸鏈上的谷氨酸或精氨酸的羧基結(jié)合形成谷氨酸鋁鹽或精氨酸鋁鹽的穩(wěn)定復(fù)合物。Yang［11］和 Luo［5］等利用 D-半乳糖和三氯化鋁共同作用，成功誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生學(xué)習(xí)記憶力減退，腦內(nèi)AChE活性升高，Aβ水平升高等AD病理特征。因此，應(yīng)用D-半乳糖聯(lián)合三氯化鋁對大腦的綜合毒性模型，更貼近人類的AD病癥，也更有利于AD藥物的藥效評價。

Fig 1 Effect of acteoside on tissue structure changes of cerebral cortex in m ice induced by a combination of D-galactose and AlCl3（400×）A：Control group；B：Model group；C：VitE group；D：AS（30 mg·kg－1·d－1）；E：AS（60 mg·kg－1·d－1）；F：AS（120 mg·kg－1·d－1）

Tab 2 Effects of acteoside on activity of AChE in serum and brain ofm ice induced by a combination of D-galactose and AlCl3（xˉ±s，n＝10）

Tab 2 Effects of acteoside on activity of AChE in serum and brain ofm ice induced by a combination of D-galactose and AlCl3（xˉ±s，n＝10）

*P＜0.05，**P＜0.01 vs control；＃P＜0.05，＃＃P＜0.01 vs model.

Group Concentration／mg·kg－1·d－1 Serum／kU·L－1 Brain／kU·g－1Pro Control 3.427±1.117 0.965±0.146 Model 5.573±1.708* 2.612±0.471**VitE 150 3.588±0.4723＃ 2.047±0.438 AS 30 4.170±0.912＃ 1.352±1.383＃＃AS 60 3.315±1.090＃ 1.109±1.126＃＃AS 120 4.626±0.762 0.939±1.608＃＃

Fig 2 Effect of acteoside on number of neuron changes of cerebral cortex in m ice induced by a combination of D-galactose and AlCl3（ˉx±s，n＝10）*P＜0.05，**P＜0.01 vs control；＃P＜0.05，＃＃P＜0.01 vs model.

Tab 3 Expression of caspase-3 of cerebral cortex in m ice induced by a combination of D-galactose and AlCl3（±s，n＝10）

Tab 3 Expression of caspase-3 of cerebral cortex in m ice induced by a combination of D-galactose and AlCl3（±s，n＝10）

*P＜0.05，**P＜0.01 vs control；＃P＜0.05，＃＃P＜0.01 vs model.

Group Concentration／mg·kg－1·d－1 Positive cell rate／%Optical density score Control 14.67±4.58 1.75±0.46 Model 37.12±13.29** 2.75±0.46**VitE 150 28.88±5.54 2.88±0.35 AS 30 20.56±9.07＃＃ 2.11±0.78＃AS 60 14.38±7.21＃＃ 1.62±0.74＃＃AS 120 15.40±3.10＃＃ 1.60±0.52＃＃

Fig 3 Expression of caspase-3 of cerebral cortex in m ice induced by a combination of D-galactose and AlCl3（40×）A：Control group；B：Model group；C：VitE group；D：AS（30 mg·kg－1·d－1）；E：AS（60 mg·kg－1·d－1）；F：AS（120 mg·kg－1·d－1）

本實(shí)驗(yàn)利用D-半乳糖聯(lián)合三氯化鋁誘導(dǎo)小鼠90 d后，與正常組比較，模型組小鼠的學(xué)習(xí)、記憶能力明顯下降，血清和腦組織中的AChE活性明顯升高，證明AD模型建立成功。通過30、60、120 mg·kg－1·d－1的 AS治療 30 d后，與模型組比較，AS各給藥組小鼠在跳臺檢測中均能延長下臺潛伏期和減少錯誤次數(shù)，同時小鼠血清和腦組織中AChE活性亦明顯降低，表明AS對D-半乳糖聯(lián)合三氯化鋁誘導(dǎo)的小鼠腦損傷具有明顯保護(hù)作用，尤其是對小鼠記憶能力的改善作用較明顯。此外，在30～120 mg·kg－1·d－1的給藥濃度范圍內(nèi)，AS對腦損傷小鼠的保護(hù)作用無濃度依賴性。

已有研究表明［6］，AD腦內(nèi)存在神經(jīng)元丟失現(xiàn)象，而細(xì)胞凋亡與AD發(fā)病關(guān)系密切。caspase-3是半胱氨酸蛋白酶家族caspases成員之一，不僅參與AD患者腦內(nèi)β淀粉樣蛋白的切割，還是細(xì)胞凋亡調(diào)控的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一［12］。正常生理狀態(tài)下，caspase-3以酶原形式（33 ku）存在于細(xì)胞質(zhì)中，一旦受到凋亡信號刺激，活化的caspase-3便能特異性切割DNA，使參與DNA損傷修復(fù)過程的PARP以及DNA-PK等失活，促使染色質(zhì)凝集和核酶激活，而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡［6］。因此，篩選caspase-3活化抑制劑及神經(jīng)元凋亡抑制藥物可能是AD治療的一個重要靶向。本研究結(jié)果顯示，模型組小鼠皮層組織中的神經(jīng)細(xì)胞明顯減少，caspase-3基因表達(dá)明顯上調(diào)。而經(jīng)不同濃度AS治療后，小鼠皮層組織中神經(jīng)細(xì)胞的形態(tài)和數(shù)量均較模型組有明顯改善，且皮層組織中caspase-3的基因表達(dá)明顯下調(diào)。在給藥濃度范圍內(nèi)，AS對小鼠皮層組織神經(jīng)細(xì)胞的形態(tài)改善和caspase-3的基因表達(dá)調(diào)控亦無濃度依賴性。

綜上所述，AS能夠明顯提高由D-半乳糖聯(lián)合三氯化鋁誘導(dǎo)的AD病樣小鼠學(xué)習(xí)和記憶能力，抑制其血清和腦組織中的AChE活性。研究結(jié)果提示，AS對D-半乳糖聯(lián)合三氯化鋁誘導(dǎo)的小鼠腦損傷具有明顯保護(hù)作用，其保護(hù)機(jī)制可能與AS抑制小鼠皮層組織caspase-3基因表達(dá)，進(jìn)而維持皮層組織神經(jīng)細(xì)胞的正常形態(tài)及數(shù)量有關(guān)。但是，caspase-3基因僅僅只是caspase凋亡基因家族中的一員，而AD又是多因素引起的復(fù)雜性疾病，因此在對AD小鼠治療過程中，AS僅是通過抑制caspase-3基因表達(dá)，亦或是其還通過其他作用靶點(diǎn)發(fā)揮作用，仍有待于更深入的研究。

參考文獻(xiàn)：

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