不同卷煙接裝紙中菌落總數(shù)的測(cè)定

張 亮, 李小龍, 王 穎, 劉賢杰, 謝 濤

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不同卷煙接裝紙中菌落總數(shù)的測(cè)定

張 亮*, 李小龍, 王 穎, 劉賢杰, 謝 濤

(深圳煙草工業(yè)有限責(zé)任公司 技術(shù)中心, 廣東 深圳, 518109)

采用平板計(jì)數(shù)法測(cè)定了10種市售卷煙接裝紙的菌落總數(shù), 結(jié)果表明: (1) 平板計(jì)數(shù)法適用于卷煙接裝紙菌落總數(shù)的測(cè)定; (2) 平板計(jì)數(shù)法檢測(cè)接裝紙菌落數(shù)重復(fù)性較好, 同一稀釋度(1:10)平行樣檢測(cè)結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)小于30%, 同一樣品平行樣RSD小于20%; (3) 不同接裝紙樣品差異性顯著, 同一廠家接裝紙樣品差異性不顯著; (4)所測(cè)接裝紙中的菌落總數(shù)均符合行業(yè)限量標(biāo)準(zhǔn), 可判定為合格.

卷煙接裝紙; 菌落總數(shù); 平板計(jì)數(shù)法

食品中菌落總數(shù)是衛(wèi)生檢測(cè)中的一項(xiàng)很重要的指標(biāo), 是判定食品被細(xì)菌污染程度的標(biāo)記. 菌落總數(shù)的檢測(cè)一般是采用傾注平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行, 其準(zhǔn)確性、靈敏性均較高[1—2]. 接裝紙是將煙條與濾嘴卷接在一起的紙, 消費(fèi)者在抽吸卷煙時(shí), 濾嘴直接接觸嘴唇, 接裝紙中的有害成分會(huì)通過(guò)口腔進(jìn)入體內(nèi), 因此, 接裝紙的衛(wèi)生安全會(huì)影響到消費(fèi)者的身體健康. 目前, 已有一些文獻(xiàn)關(guān)注了接裝紙中有害成分的檢測(cè)[3—6], 但關(guān)于接裝紙中菌落總數(shù)測(cè)定的報(bào)道較少. 本文參照食品中菌落總數(shù)的檢測(cè)方法[7], 檢測(cè)了10種市售卷煙接裝紙的菌落總數(shù), 所得結(jié)果與煙用接裝紙標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比, 以期為吸煙的健康研究提供參考.

1 材料與方法

1.1 材料、試劑和儀器

選擇10種市售卷煙進(jìn)行研究, 接裝紙樣品由深圳煙草工業(yè)有限責(zé)任公司提供, 分別編號(hào)為: A、B、C、D、E、F、G、H、I、J. 樣品信息如下.

A: 如意-好日子, 浙江立可達(dá)包裝材料有限公司; B: 吉祥-好日子, 云南玉溪接裝紙銷售有限公司; C: 精品-好日子; D: 陽(yáng)光-好日子; E: 軟珍品-好日子; F: 硬珍品-好日子; G: 軟錦繡-好日子; H: 卓越-好日子; I: 盛世-好日子, C—I樣品均由高郵市衛(wèi)星卷煙材料有限公司提供; J: 經(jīng)典雙喜, 浙江立可達(dá)包裝材料有限公司.

抽樣完成后裝在滅菌的封閉袋內(nèi), 保存在4 ℃冰箱內(nèi), 并在24 h內(nèi)完成檢測(cè).

試劑: 胰蛋白胨, 青島高科園海博生物技術(shù)有限公司; 瓊脂、酵母浸膏, 廣東環(huán)凱生物科技有限公司; 葡萄糖, 天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司; 磷酸二氫鉀、氯化鈉, 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司.

儀器: BP 210S電子天平, 感量0.000 1 g, 德國(guó)Sartorius公司; HWS24型恒溫水浴鍋、BPN-80CRH培養(yǎng)箱,上海一恒科學(xué)儀器有限公司; BSC-1300ⅡA2型生物安全柜,蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司; 90 mm無(wú)菌培養(yǎng)皿, 廣州潔特生物過(guò)濾制品有限公司; DELTA320型pH計(jì), 瑞士梅特勒-托利多公司; BA-2S拍擊式均質(zhì)器, 上海本昂科學(xué)儀器有限公司.

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)基和試劑配制

參照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[7]配制平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基、磷酸鹽緩沖液和無(wú)菌生理鹽水.

1.2.2 接裝紙樣品準(zhǔn)備

玻璃器皿、試管、移液槍等實(shí)驗(yàn)用品均做滅菌處理. 在超凈工作臺(tái)中打開(kāi)樣品密封袋, 抽取處于中間的接裝紙樣品. 為縮短樣品暴露在空氣中的時(shí)間, 應(yīng)盡快完成各項(xiàng)準(zhǔn)備. 稱取5 g樣品, 剪至0.2 cm × 0.2 cm大小, 每個(gè)樣品制備2個(gè)平行樣, 記作A-1, A-2; B1, B2; … J-1, J-2.將樣品加入到盛有45 mL磷酸鹽緩沖液的無(wú)菌均質(zhì)袋內(nèi), 拍打均質(zhì)2 min, 制成1:10樣品勻液, 每個(gè)樣品制備3個(gè)平行樣, 記作S-1, S-2, S-3. 移取1:10樣品勻液1 mL, 沿著管壁加入到盛有9 mL稀釋液的無(wú)菌試管中, 振蕩試管, 使其混合均勻, 即制成1:100樣品勻液. 按1:100樣品勻液的配制方法, 配制1:1 000和1:10 000樣品勻液. 再吸取1 mL空白稀釋液, 加入到3個(gè)無(wú)菌平皿內(nèi)作為空白對(duì)照.

表1 接裝紙樣品在不同稀釋度菌落總數(shù)

注: ①空白對(duì)照、1:1 000和1:10 000稀釋度的平皿中均沒(méi)有觀測(cè)到菌落, 不予列出, “-”表示未檢測(cè)到; ②所有稀釋的平板菌落數(shù)均小于30 CFU, 則應(yīng)按1:10稀釋倍數(shù)計(jì)算, 取10倍結(jié)果; ③菌落數(shù)小于100 CFU時(shí), 按“四舍五入”原則修約作為檢測(cè)結(jié)果.

1.2.3 培養(yǎng)

將20 mL置于46 ℃恒溫水浴中保溫的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基傾注平皿, 并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻, 待瓊脂凝固后, 將平板倒置, 置于(36 ± 1) ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(48 ± 2) h.

1.2.4 菌落計(jì)數(shù)

用肉眼直接觀察, 記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量. 菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位(colony-forming units, CFU)表示.

2 結(jié)果與分析

2.1 方法適用性

接裝紙樣品菌落總數(shù)檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1, 由表1可知, 所有接裝紙樣品均檢出菌落. 該方法操作步驟相對(duì)簡(jiǎn)單, 靈敏性較高. 由于接裝紙樣品中菌落總數(shù)較少, 稀釋度在1:100以上時(shí)就已觀察不到菌落, 因此, 該方法只需將樣品稀釋到1:100稀釋度就能達(dá)到檢測(cè)要求, 且檢測(cè)所需平皿數(shù)量較少, 檢測(cè)效率較高.

2.2 測(cè)試結(jié)果重復(fù)性

由圖1可以看出, 不同樣品1:10稀釋度下, 平行樣菌落數(shù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差值(RSD)除I-1樣品外均在30%以下. 從圖2可以看出, 同一樣品不同平行樣檢測(cè)的RSD均在20%以下,說(shuō)明平板計(jì)數(shù)法用于接裝紙中菌落數(shù)檢測(cè)時(shí)準(zhǔn)確度較高, 重復(fù)性較好[8].

圖1 同一稀釋度(1:10)下平行樣菌落數(shù)測(cè)定的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

圖2 同一樣品平行樣菌落數(shù)測(cè)定的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

2.3 檢測(cè)結(jié)果判斷

每個(gè)卷煙接裝紙中菌落數(shù)由1:10稀釋度決定, 通過(guò)對(duì)A—J樣品1:10稀釋度6個(gè)平行數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析, 單因素方差分析的值為0.000 74, 由此可見(jiàn)不同接裝紙樣品菌落數(shù)差異顯著.

接裝紙樣品C—I為同一廠家生產(chǎn), 通過(guò)對(duì)A—J樣品1:10稀釋度6個(gè)平行數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析, 單因素方差分析的值為0.183 4, 說(shuō)明由于同一生產(chǎn)廠家的生產(chǎn)工藝差異較小, 所以不同接裝紙菌落數(shù)差異不顯著.

煙草行業(yè)對(duì)于接裝紙的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[9]要求接裝紙中菌落數(shù)須小于200 CFU/g, 因此, 所檢測(cè)樣品符合限量要求.

3 結(jié)論

本文采用平板計(jì)數(shù)法檢測(cè)了10種接裝紙中的菌落總數(shù), 結(jié)果表明: 不同接裝紙樣品菌落數(shù)差異顯著, 而同一廠家不同接裝紙樣品中菌落數(shù)差異不顯著, 且10種市售接裝紙樣品菌落數(shù)的檢測(cè)結(jié)果符合行業(yè)限量規(guī)定, 可判定為合格. 另外, 平板計(jì)數(shù)法在檢測(cè)接裝紙中菌落數(shù)時(shí)有較好的適用性, 且方法的重復(fù)性較為理想.

[1] 廖茂彬, 陳向標(biāo), 賴明河. 食品中菌落總數(shù)的國(guó)標(biāo)法測(cè)定注意事項(xiàng)及微生物快速測(cè)試卡法檢測(cè)[J]. 中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng), 2013, 19(7): 16—18.

[2] 楊靜. 食品菌落總數(shù)檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)異?，F(xiàn)象的原因分析[J]. 疾病監(jiān)測(cè)與控制, 2014, 8(1): 46—47.

[3] 韓云輝, 孫蘭成, 宋繼炯, 等. 接裝紙中汞、砷、鉛等8種元素的分析研究[J]. 中國(guó)煙草學(xué)報(bào), 2001, 7(4): 1—6.

[4] 王艷, 姚孝元, 韓云輝, 等. 卷煙接裝紙、成型紙中熒光增白劑ABP、VBL的HPLC測(cè)定[J]. 煙草科技, 2007(11): 40—44.

[5] 唐綱嶺, 邊照陽(yáng), 楊飛, 等. 煙用接裝紙、內(nèi)襯紙和卷煙條與盒包裝紙中18種鄰苯二甲酸酯的測(cè)定[J]. 煙草科技, 2012(9): 36—40.

[6] 侯英, 曹秋娥, 謝小光, 等. 熱脫附和氣-質(zhì)聯(lián)用測(cè)定卷煙包裝材料中的酞酸酯[J]. 光譜實(shí)驗(yàn)室, 2006(5): 134—137.

[7] GB 4789.2-2010 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定[S].

[8] 龐永強(qiáng), 陳再根, 侯宏, 等. 抽吸方式對(duì)卷煙主流煙氣煙草特有亞硝胺釋放量的影響[J]. 煙草科技, 2009, 2: 46—49.

[9] YC 171-2009 煙用接裝紙[S].

The determination of the total number of colonies on different tipping papers

ZHANG Liang, LI XiaoLong, WANG Ying, LIU XianJie, XIE Tao

(Technology Centre, Shenzhen Tobacco Co, Ltd, Shenzhen 518109, China)

The total number of colonies of 10 commercially available tipping papers was determined by the plate count method, and the results show that: (1) the plate count method is suitable for the determination of the total number of colonies of the tipping papers; (2) the reproducibility of the plate count method is relatively stable, the relative standard deviation(RSD) of the same dilution parallel (1:10) was below 30%, and the RSD of the same sample parallel is below 20%; (3) the difference between the different tipping papers is significant, while the difference among the tipping papers from the same manufacture is not; (4) the total number of colonies determined of all the 10 tipping papers is conforming the tobacco occupation limited standard.

cigarette tipping papers; total number of colonies; plate count method

10.3969/j.issn.1672-6146.2014.04.020

TS 41+1

1672-6146(2014)04-0078-03

email: zlliangzhang@126.com.

2014-07-22

(責(zé)任編校: 江 河)