• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    實驗動物準備對裸鼠移植瘤模型microPET顯像的影響

    2014-05-10 23:13:40周麗娜李小穎張連峰
    中國比較醫(yī)學雜志 2014年2期
    關鍵詞:禁食皮下腹腔

    周麗娜,高 凱,李小穎,梁 穎,張連峰,吳 寧,

    (1.中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院腫瘤醫(yī)院影像診斷科,北京100021;2.中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院醫(yī)學實驗動物研究所,衛(wèi)生部人類疾病比較醫(yī)學重點實驗室,北京100021;3.中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院腫瘤醫(yī)院PET-CT中心,100021)

    實驗動物準備對裸鼠移植瘤模型microPET顯像的影響

    周麗娜1,高 凱2,李小穎2,梁 穎3,張連峰2,吳 寧1,3

    (1.中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院腫瘤醫(yī)院影像診斷科,北京100021;2.中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院醫(yī)學實驗動物研究所,衛(wèi)生部人類疾病比較醫(yī)學重點實驗室,北京100021;3.中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院腫瘤醫(yī)院PET-CT中心,100021)

    目的探討實驗動物準備條件對18F-FDG microPET裸鼠移植瘤模型顯像的影響,以選擇最佳的實驗動物準備條件。方法36只人表皮樣癌細胞A431裸鼠皮下移植瘤模型。隨機分為6組(6只/組);A組:無禁食、室溫(20~22)℃、無麻醉(注射18F-FDG后60min清醒狀態(tài))、尾靜脈注射18F-FDG;B組:禁食(6~8)h、加溫(30~32)℃、麻醉(吸入2%異氟烷麻醉)、尾靜脈注射18F-FDG;C組:無禁食、加溫、麻醉、尾靜脈注射18F-FDG;D組:禁食、室溫、麻醉、尾靜脈注射18F-FDG;E組:禁食、加溫、無麻醉、尾靜脈注射18F-FDG;F組:禁食、加溫、麻醉、腹腔注射18F-FDG。注射18F-FDG約1h后,行microPET顯像,測量皮下移植瘤、頸部肌肉、棕色脂肪、腦、肝臟、腎臟、心臟、哈氏腺最大每克組織攝取率(%ID/gmax)。掃描前裸鼠均測血糖。結果(1)B組、C組、F組裸鼠的血糖水平與腫瘤攝取之間均呈直線負相關。(2)棕色脂肪:A組攝取最高(8.03±1.29),B組攝取降低71.98%(P=0.000)。頸部肌肉:A組攝取最高(16.07±5.20),B組攝取降低最多達81.84%(P=0.000)。各組腦、心臟、肝臟、腎臟、哈氏腺攝取差異無統(tǒng)計學意義。(3)A組皮下移植瘤/組織或器官的攝取率最低。B組移植瘤/頸部肌肉,移植瘤/肝臟,移植瘤/棕色脂肪的攝取率較A組分別升高6.50倍、1.29倍、4.76倍(P均<0.05),腫瘤與組織或器官的圖像對比度明顯改善。(4)第1次microPET顯像,尾靜脈注射與腹腔注射皮下移植瘤攝取值差別無統(tǒng)計學意義(P=0.364)。第2次microPET顯像,腹腔注射腹腔可見不同程度顯像劑濃聚,其他正常組織、器官及皮下移植瘤的攝取均減低。腹腔注射方式,兩次皮下移植瘤的攝取值差異有統(tǒng)計學意義(P=0.025)。結論實驗動物準備明顯影響18F-FDG在裸鼠正常組織的分布及皮下移植瘤的攝取。禁食、加溫、麻醉及尾靜脈注射方式,可以改善腫瘤對18F-FDG的攝取,保證圖像有較好的穩(wěn)定性及可重復性。

    異種移植,裸鼠;氟脫氧葡萄糖;正電子發(fā)射型斷層攝影術,小動物;實驗動物準備

    18F-Fluorodeoxyglucose(18F-FDG,以下簡稱FDG)是葡萄糖的類似物,惡性腫瘤由于快速繁殖,可以較正常組織攝取更多FDG,但是其攝取程度也受很多因素影響,如血糖水平、基礎代謝率等[1]。為保證得到高質量、穩(wěn)定性和重復性較好的圖像,臨床PET(positron emission tomography)顯像前患者準備已經有了比較公認的條件,如禁食6h(測血糖低于10mmol/L),靜脈注射FDG安靜狀態(tài)下休息1h[2]。

    近年發(fā)展的小動物微型PET(microPET)在臨床前人類腫瘤鼠類模型中的應用越來越廣泛,尤其小動物模型是進行比較醫(yī)學研究的最新工具,主要用于觀察正常組織代謝、腫瘤模型的發(fā)展、轉化及生物學特征,早期評價各類抗腫瘤藥物的有效性,監(jiān)測不同藥物配伍、不同給藥濃度的治療效果等[3-8]。鼠類的基礎代謝率約為人類的7倍[9],合適的microPET顯像前實驗動物準備條件,高質量的microPET圖像是保證臨床前活體研究結果可靠性的關鍵。本實驗主要探討實驗動物準備條件對FDG microPET裸鼠移植瘤模型顯像的影響,以選擇最佳的實驗動物準備條件。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    血糖儀(美國強生穩(wěn)步型ONETOUCH SureStep L9262RB00490)。29G1/2針頭1mL一次性使用胰島素注射器(insulin syringe,Becton Dickinson and Company)。

    1.2 實驗動物

    BALB/c-nu裸鼠36只,6~8周齡,體重20g~22g,由中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院醫(yī)學實驗動物研究所提供,合格證號:SCXK(京)2001-0001。所有實驗操作程序均經過實驗動物研究所實驗動物使用管理委員會批準(批準號為GC-09-2001)。

    1.3 細胞培養(yǎng)

    人表皮樣癌細胞A431(由中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院醫(yī)學實驗動物研究所提供),用含10%胎牛血清,100IU/mL青霉素,100μg/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基作為腫瘤細胞的培養(yǎng)液,于5%CO2,37℃細胞培養(yǎng)箱內常規(guī)培養(yǎng),傳代1周,待細胞長滿瓶底。

    1.4 裸鼠皮下移植瘤模型的建立

    收集處于生長對數期的腫瘤細胞,用DPBS稀釋至2×107cells/mL,使用27G針頭1mL注射器取0.1mL單細胞懸液接種于裸鼠右側脅肋部皮下,待腫瘤生長至150mm3~200mm3。

    1.5 實驗動物分組

    36只裸鼠移植瘤模型隨機分為6組(6只/組),A組:無禁食、室溫、無麻醉、FDG尾靜脈注射(簡稱尾靜脈注射);B組:禁食、加溫、麻醉、尾靜脈注射;C組:無禁食、加溫、麻醉、尾靜脈注射。D組:禁食、室溫、麻醉、尾靜脈注射;E組:禁食、加溫、無麻醉、尾靜脈注射;F組:禁食、加溫、麻醉、腹腔注射。

    1.6 實驗準備條件

    1.6.1 飲食:禁食:裸鼠禁食不禁水(6~8)h。不禁食:裸鼠不禁食水。

    1.6.2 血糖:測量血糖:注射前10min,尾靜脈注射方式者剪趾測量血糖,腹腔注射方式者剪尾測量血糖。

    1.6.3 溫度:加溫:實驗開始前30min,裸鼠置于鼠盒內放置于棉墊之上,由加溫燈加溫,盒內溫度計顯示(30~32)℃。掃描過程中將裸鼠置于32℃恒溫掃描板直到掃描結束。室溫狀態(tài):實驗全程不對裸鼠提供任何外在溫源,均在室溫(20~22)℃進行。

    1.6.4 麻醉情況:麻醉:即全程麻醉,全程2%異氟烷吸入麻醉狀態(tài)下注射FDG,靜置1h后,行microPET顯像。無麻醉:指麻醉狀態(tài)下注射FDG后停止吸入麻醉,動物清醒、呈自由活動狀態(tài)等待1h后掃描。

    1.7 儀器與顯像藥物

    小動物PET-CT(Inveon microPET-CT;Siemens Preclinical Solution USA,Inc.)由中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院醫(yī)學實驗動物研究所提供,FDG由中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院腫瘤醫(yī)院PET-CT中心提供,放化純度>97%。

    1.8 microPET顯像

    (1)A~F組行第一次microPET-CT顯像。第二日B、F組行再次microPET顯像。

    (2)圖像采集及重建注射290μCi~320μCi FDG后60min,醫(yī)用膠帶將小鼠俯臥位固定于掃描板(根據實驗需要決定是否打開恒溫裝置,以及是否給予持續(xù)面罩吸入2%異氟烷麻醉),行microPET顯像。用濾波反投影法(filtered back-projection)進行圖像重建。

    (3)利用IRW(Inveon Research WorkPlace,Siemens)軟件對圖像進行分析,采用感興趣區(qū)技術(region-of-interest,ROI)測量頸部肌肉、棕色脂肪、皮下移植瘤、肝臟、腎臟、心肌、哈氏腺及腸道的最大每克組織攝取率(the percentage injected dose per gram,%ID/g,%ID/g=ROI放射性活度/注射總放射性活度×100%)。(注:因臨床患者個體體重差異較大,臨床PET一般測量標準攝取值,the standardized uptake value,SUV=ROI放射性活度/體重/注射總放射性活度×100%,而臨床前實驗動物個體差異不明顯,文獻推薦使用%ID/g[10])。

    1.9 統(tǒng)計學分析

    路基防護工程是治理公路建設項目水土流失和保持路基穩(wěn)定的重要措施之一。路基性質不同,采用的防護工程也不同。例如,對于風化嚴重、水土流失嚴重、裸露的填埋場邊坡,應建造防護墻(混凝土砌塊)。對于適合植物生長的土坡,應種植更多的草和樹木,如沿河積水的堤防,修建擋土墻,護坡,石籠,拋石等。巖質邊坡,大多采用護坡和噴涂混凝土;當然,在實際施工過程中,合理有效的搭配使用各種防護措施,效果顯著。為了改善和美化公路兩側的景觀,有效控制公路建設項目水土流失,公路跨越點的施工應采取造林工程。

    用SPSS 16.0軟件進行分析,結果以平均值±標準差表示。雙變量相關分析(Pearson correlation coefficients)分析血糖值與腫瘤攝取值的相關性。對不同組腫瘤、組織及器官的%ID/gmax數據進行t檢驗或方差分析。P<0.05表示有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    2.1 實驗動物血糖

    禁食(6~8)h后,裸鼠血糖水平(4.56±0.89)mmol/L(24只);無禁食裸鼠血糖水平(6.14±1.03)mmol/L(12只);各組血糖值分別為:A組(無禁食、室溫、無麻醉、尾靜脈注射)血糖值(6.43±1.01)mmol/L;B組(禁食、加溫、麻醉、尾靜脈注射)血糖值(4.77±0.78)mmol/L;C組(無禁食、加溫、麻醉、尾靜脈注射)血糖值(5.85±1.05)mmol/L;D組(禁食、室溫、麻醉、尾靜脈注射)血糖值(5.15±0.30)mmol/L;E組(禁食、加溫、無麻醉、尾靜脈注射)血糖值(3.68±1.01)mmol/L;F組(禁食、加溫、麻醉、腹腔注射)血糖值(4.67±0.70)mmol/L。B組裸鼠的血糖與腫瘤攝?。ǎD/gmax)之間呈直線負相關,有統(tǒng)計學意義(r=-0.869,P=0.025)。C組、F組裸鼠的血糖與腫瘤攝?。ǎD/gmax)之間呈直線負相關,有統(tǒng)計學意義(C組:r=-0.831,P=0.040;F組:r=-0.843,P=0.035)。A組、D組、E組裸鼠的血糖與腫瘤攝?。ǎD/gmax)之間相關性無統(tǒng)計學意義(A組:r=-0.510,P=0.301;D組:r=0.770,P=0.073;E組:r=-0.079,P=0.881)。

    2.2 不同準備條件對FDG組織分布的影響

    不同準備條件FDG在裸鼠移植瘤模型中分布的典型microPET表現(圖1,見封三),各組織FDG攝取值(表1)。

    2.2.1 棕色脂肪:A組攝取最高(8.03±1.29),其它各組(B~E)攝取均低于A組,B組降低71.98%;C組降低60.52%;D組降低48.34%;E組降低44.39%。D組和E組棕色脂肪攝取差異無統(tǒng)計學意義(P=0.440)。

    2.2.2 頸部肌肉:A組攝取最高(16.07±5.20),其它各組(B~E)攝取均低于A組,B組降低81.84%;C組降低79.57%;D組降低73.03%;E組降低39.52%。B組較E組降低69.98%。B組、C組及D組頸部肌肉攝取差異無統(tǒng)計學意義(B vs.C:P=0.796;B vs.D:P=0.322;C vs.D:P=0.461);其余各組頸部肌肉攝取差異均有統(tǒng)計學意義(A vs.B:P=0.000;A vs.C:P=0.000;A vs.D:P=0.000;A vs.E:P=0.000;B vs.E:P=0.000;C vs.E:P=0.000;D vs.E:P=0.001)。

    2.2.3 其他器官:心臟、腎臟、哈氏腺攝取值波動范圍比較大,肝臟、腦攝取值相對比較穩(wěn)定,波動范圍比較小(表1)。

    2.3 不同準備條件對皮下移植瘤攝取FDG的影響

    2.3.1 腫瘤FDG攝?。翰煌瑴蕚錀l件皮下移植瘤攝取FDG變化(表1)。皮下腫瘤:A組攝取最低(3.50±0.58),B組攝取升高25.53%,C組攝取升高21.35%。

    2.3.2 腫瘤/組織或器官的攝取率:不同準備條件下,A組皮下移植瘤/組織或器官的攝取率最低(表2),即腫瘤與組織或器官的圖像對比度差。B組移植瘤/頸部肌肉,移植瘤/肝臟,移植瘤/棕色脂肪的攝取率分別升高至6.50倍、1.29倍、4.76倍。

    表1 不同準備條件尾靜脈注射裸鼠移植瘤模型各組織FDG攝取值Tab.1 FDG uptake of various tissues after intravenous injection under different conditions

    表2 不同準備條件尾靜脈注射皮下移植瘤/組織或器官FDG攝取比率Tab.2 Tumor-to-organ ratios of FDG uptake in the mice after intravenous injection under different conditions

    表3 不同注射方式裸鼠移植瘤模型各組織及移植瘤FDG攝取值Tab.3 FDG uptake of the tumor and various tissues after intravenous or intraperitoneal injection

    2.4 尾靜脈注射及腹腔注射對不同組織及皮下移植瘤FDG攝取的影響

    第一次microPET掃描,在同樣準備條件(加溫、禁食、麻醉),尾靜脈注射及腹腔注射60min后,測量不同組織與皮下移植瘤的%ID/gmax(表3),進行獨立樣本t檢驗分析:棕色脂肪(P=0.221)、頸部肌肉(P=0.471)、腦(P=0.678)、心臟(P=0.121)、腎臟(P=0.070)、肝臟(P=0.100)、皮下移植瘤(P=0.364)及哈氏腺(P=0.673)攝取差異無統(tǒng)計學意義。

    第二日microPET掃描尾靜脈注射后,各組織及皮下移植瘤攝取均勻;腹腔注射后,腹腔可見顯像劑明顯濃聚,各組織及皮下移植瘤攝取均減低(圖2見封三)。尾靜脈注射皮下移植瘤攝取值為(4.72±0.35);腹腔注射皮下移植瘤攝取值為(2.18±0.33)。分別將兩組皮下移植瘤攝取值與第一次掃描結果分別進行配對t檢驗,尾靜脈注射方式,兩次皮下移植瘤的攝取值差異無統(tǒng)計學意義(P=0.695);腹腔注射方式,兩次皮下移植瘤的攝取值差異有統(tǒng)計學意義(P=0.025)。

    3 討論

    FDG是葡萄糖的類似物,可以和葡萄糖競爭細胞膜的轉運體和磷酸化,血糖水平會影響FDG的組織分布和攝?。?1],也會影響腫瘤對FDG攝取。Aliaga等[10]研究103只Balb/c小鼠皮下移植乳腺癌模型的血糖與皮下腫瘤FDG攝取的關系,發(fā)現血糖與腫瘤FDG攝取值呈直線負相關(P>0.02),本研究B組(禁食、加溫、麻醉、尾靜脈注射)、C組(無禁食、加溫、麻醉,尾靜脈注射)、F組(禁食、加溫、麻醉、第一次腹腔注射)裸鼠的血糖與腫瘤攝?。ǎD/gmax)之間呈直線負相關,有統(tǒng)計學意義(B組:r=-0.869,P=0.025;C組:r=-0.831,P=0.040;F組:r=-0.843,P=0.035)。A組(無禁食、室溫、無麻醉、尾靜脈注射)、D組(禁食、室溫、麻醉、尾靜脈注射)、E組(禁食、加溫、無麻醉、尾靜脈注射)裸鼠的血糖與腫瘤攝?。ǎD/gmax)之間相關性無統(tǒng)計學意義(A組:r=-0.510,P=0.301;D組:r=0.770,P=0.073;E組:r=-0.079,P=0.881)。表明在其他條件(加溫、麻醉)相同時,血糖與腫瘤FDG表現出直線負相關關系,而在其他條件(是否加溫、有無麻醉)不同時,血糖與腫瘤FDG攝取沒有表現出直線負相關關系,提示動物實驗中,腫瘤FDG攝取受多種因素影響,血糖可能不是唯一影響腫瘤FDG攝取的因素,其他條件,例如是否加溫、有無麻醉,均可能會影響腫瘤FDG攝取。

    環(huán)境溫度會影響人體棕色脂肪對FDG的攝取[12]。室溫的基礎代謝率高于中心體溫時的基礎代謝率,鼠類的中心溫度位于30℃~34℃[9],且裸鼠皮膚裸露無毛,而室溫(21℃~22℃)明顯低于鼠的中心體溫,需通過激動棕色脂肪和肌肉產熱以保持體溫,均會增加棕色脂肪和肌肉對于FDG的攝?。?3]。本研究結果,室溫條件下棕色脂肪攝取值為(4.15±0.61),頸部肌肉攝取值為(4.33±0.86);而加溫后,棕色脂肪攝取值為(2.25±0.39),頸部肌肉攝取值為(2.92±0.61)。表明加溫后棕色脂肪和頸部肌肉的FDG攝取均比室溫條件降低,使圖像本底攝取降低,改善了圖像質量。

    Lee等[14]報道甲苯噻嗪和氯胺酮麻醉會明顯升高動物血糖。戊巴比妥鈉需腹腔注射麻醉,抓捕過程會激惹動物的情緒,處于應激狀態(tài),使血糖升高、肌肉緊張,會明顯增加肌肉對FDG的攝取[15]。我們選用對裸鼠激惹較小的異氟烷呼吸麻醉[16],且可以很好的控制麻醉時間,掃描結束后可以迅速恢復至清醒狀態(tài)。本研究的經驗認為注射FDG后等待1h期間,若動物呈清醒、自由活動狀態(tài),裸鼠會因為外界環(huán)境的各種聲響,處于驚恐、緊張的應激狀態(tài),增加肌肉的FDG攝取。注射FDG后全程麻醉狀態(tài),可以減少外界因素對動物的激惹,明顯降低肌肉的攝取,尤其在禁食、加溫、全程麻醉條件下,頸部肌肉攝取降低81.84%,圖像質量明顯改善。全程麻醉時動物尿道括約肌處于收縮狀態(tài),可以避免放射性尿液排出沾污腹部皮膚,引起圖像偽影,保證實驗順利進行。

    本實驗發(fā)現,在無禁食、室溫及無麻醉條件下腫瘤攝取值為(3.50±0.58),而禁食、加溫、麻醉條件下皮下腫瘤攝取值為(4.70±0.30),攝取升高25.53%(P=0.001)。在給予動物相應準備條件(禁食、加溫、麻醉)比不給于任何準備條件(無禁食、室溫及無麻醉),腫瘤攝取有明顯變化,表明實驗準備條件對于裸鼠移植瘤FDG攝取有明顯影響,實驗準備條件不充分,會直接導致實驗結果的偏差。

    因鼠尾靜脈較細小,增加了尾靜脈注射的難度,Fueger等[9]提出FDG腹腔注射60min后腫瘤的攝取與尾靜脈注射相當,本研究第一次microPET顯像,尾靜脈注射與腹腔注射皮下移植瘤FDG攝取值差別無統(tǒng)計學意義。但次日再次microPET顯像,腹腔注射后腹腔可見不同程度顯像劑濃聚,其他正常組織、器官分布及皮下移植瘤的攝取均減低,筆者認為腹腔重復注射,容易刺激動物腹膜,引起局部粘連包裹,影響FDG進一步吸收再分布。FDG尾靜脈注射較腹腔注射方式圖像有可重復性及穩(wěn)定性,可以真正實現同一動物模型多個不同時間點的活體觀察,既減少實驗動物的數量又保證實驗結果的連續(xù)性及穩(wěn)定性。

    本實驗表明,實驗前動物準備條件對于FDG在裸鼠移植瘤模型體內正常組織、器官的分布、皮下移植瘤的攝取有明顯影響。禁食、加溫、全程吸入麻醉的準備和掃描輔助條件可以明顯改善圖像對比度。FDG尾靜脈注射方式優(yōu)于FDG腹腔注射方式,能保證圖像有較好的可重復性。

    本實驗探討了可能影響裸鼠移植瘤FDG攝取的各種因素,并加以分析比較,為裸鼠移植瘤模型microPET顯像提供了比較規(guī)范、可靠的實驗準備條件,提出FDG尾靜脈注射方式優(yōu)于FDG腹腔注射方式,microPET圖像有更好的重復性和穩(wěn)定性,可以真正實現同一動物模型多個不同時間點的活體觀察;但本研究只探討了實驗準備條件對FDG在裸鼠移植瘤模型體內在正常組織、器官的分布、皮下移植瘤的攝取的影響,未涉及到其他類型的動物及動物模型,實驗準備條件對不同類型動物的影響有無差異,有待于進一步研究。

    (致謝:在此誠摯感謝清華大學醫(yī)學院生物醫(yī)學工程系張輝副教授,胡俊松碩士為本研究恒溫板設計制作所做的辛勤工作)

    [1]Cohade C.Altered biodistribution on FDG-PET with emphasis on brown fat and insulin effect[J].Semin Nucl Med,2010,40(4):283-293.

    [2]Boellaard R,O'Doherty MJ,Weber WA,et al.FDG PET and PET/CT:EANM procedure guidelines for tumour PET imaging:version 1.0[J].Eur J Nucl Med Mol Imaging,2010,37(1):181-200.

    [3]Toyama H,Ichise M,Liow JS,et al.Absolute quantification of regional cerebral glucose utilization in mice by FDG small animal PET scanning and 2-14C-DG autoradiography[J].J Nucl Med,2004,45(8):1398-1405.

    [4]Toyama H,Ichise M,Liow JS,et al.Evaluation of anesthesia effects on 18F FDG uptake in mouse brain and heart using small animal PET[J].Nucl Med Biol,2004,31(2):251-256.

    [5]Lapointe D,Brasseur N,Cadorette J,et al.High-resolution PET imaging for in vivo monitoring of tumor response after photodynamic therapy in mice[J].J Nucl Med,1999,40(5):876-882.

    [6]Spaepen K,Stroobants S,Dupont P,et al.[18F]FDG PET monitoring of tumour response to chemotherapy:does[18F]FDG uptake correlate with the viable tumour cell fraction?[J].Eur J Nucl Med Mol Imaging,2003,30(5):682-688.

    [7]Kelloff GJ,Hoffman JM,Johnson B,et al.Progress and promise of FDG-PET imagingforcancerpatientmanagementand oncologic drug development[J].Clin Cancer Res,2005,11(8):2785-2808.

    [8]Molthoff CFM,Klabbers BM,Berkhof J,et al.Monitoring response to radiotherapy in human squamous cell cancer bearing nude mice:comparison of 2'-deoxy-2'-[18 F]fluoro-D-glucose(FDG)and 3'-[18 F]fluoro-3'-deoxythymidine(FLT)[J].Mol Imaging Biol,2007,9(6):340-347.

    [9]Fueger BJ,Czernin J,Hildebrandt I,et al.Impact of animal handling on the results of FDG PET studies in mice[J].J Nucl Med,2006,47(6):999-1006.

    [10]Aliaga A,Rousseau JA,Cadorette J,et al.A small animal positron emission tomography study of the effect of chemotherapy and hormonal therapy on the uptake of 2-deoxy-2-[F-18]fluoro-D-glucose in murine models of breast cancer[J].Mol Imaging Biol,2007,9(3):144-150.

    [11]Roy FN,Beaulieu S,Boucher L,et al.Impact of intravenous insulin on FDG PET in diabetic cancer patients[J].J Nucl Med,2009,50(2):178-183.

    [12]Hany TF,Gharehpapagh E,Kamel EM,et al.Brown adipose tissue:a factor to consider in symmetrical tracer uptake in the neck and upper chest region[J].Eur J Nucl Med Mol Imaging,2002,29(10):1393-1398.

    [13]Saito M,Okamatsu-Ogura Y,Matsushita M,et al.High incidence of metabolically active brown adipose tissue in healthy adult humans[J].Diabetes,2009,58(7):1526-1531.

    [14]Lee KH,Ko BH,Paik JY,et al.Effects of anesthetic agents and fasting duration on FDG biodistribution and insulin levels in tumor-bearing mice[J].J Nucl Med,2005,46(9):1531-1536.

    [15]Yeung HWD,Grewal RK,Gonen M,et al.Patterns of FDG uptake in adipose tissue and muscle:a potential source of falsepositives for PET[J].J Nucl Med,2003,44(11):1789-1796.

    [16]Woo SK,Lee TS,Kim KM,et al.Anesthesia condition for FDG imaging of lung metastasis tumors using small animal PET[J].Nucl Med Biol,2008,35(1):143-150.

    Effects of animal preparation on the microPET imaging in nude mouse tumor xenografts

    ZHOU Li-na1,GAO Kai2,LI Xiao-ying2,LIANG Ying3,ZHANG Lian-feng2,WU Ning1,3
    (1.Department of Diagnostic Radiology,Cancer Hospital and Institute,Chinese Academy of Medical Sciences and
    Peking Union Medical College,Beijing,100021,China;2.Key Laboratory of Human Diseases Comparative Medicine,Ministry of Health;Institute of Laboratory Animal Science,Chinese Academy of Medical Sciences(CAMS)&Comparative
    Medicine Center,Peking Union Medical Collage(PUMC),Beijing 100021;3.PET-CT Center,Cancer Hospital
    and Institute,Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College,Beijing,100021)

    Objective To investigate the effects of animal preparation on microPET imaging of tumor xenografts in nude mice and optimize the imaging protocol.MethodsThirty-six nude mice implanted with human epidermoid carcinoma A431cells were randomly divided into 6 groups.Group A:no fasting,room temperature(20℃ to 22℃),no anesthesia(leaving the animal awake for 60min after the18F-FDG injection),and18F-FDG given by i.v.injection.Group B:Fasting(6 to 8 h),warming(30℃ to 32℃),anesthesia(inhaling 2%isoflurane anesthesia),and18F-FDG given by i.v.injection.Group C:No fasting,warming,anesthesia,and18F-FDG given by i.v.injection.Group D:Fasting,room temperature,anesthesia,and18F-FDG given by i.v.injection.Group E:Fasting,warming,no anesthesia,and FDG given by i.v.injection.Group F:Fasting,warming,anesthesia,and18F-FDG was given by i.p.injection.Serum glucose level was measured before FDG injection.%ID/gmaxof the subcutaneous tumor,neck muscle,brown adipose tissue,brain,liver,kidney,myocardium,harderian gland of the groups A to F were measured after scanning.Results(1)The tumor18F-FDG uptake was significantly inversely correlated with glycemia in the groups B,C and F(P<0.05).(2)The18FFDG uptakes in the brown adipose and muscle tissues in the group A were 8.03±1.29 and 16.07±5.20,respectively.The18F-FDG uptakes in the brown adipose and muscle tissues in the group B were decreased by 71.98%and 81.84%,respectively,than that in the group A(P<0.05).The uptake in the cervical muscles was highest in the group A(16.07±5.20),and lowest in the group B,being 81.84%lower than that of the group A(P=0.000).The uptakes by brain,liver,kidney,myocardium and harderian gland were not significantly different among different groups.(3)The tumor-toorgan uptake ratio was lowest in the group A.The tumor-to-muscle,tumor-to-liver and tumor-to-brown fat uptake ratios were 6.5-fold,1.29-fold and 4.76-fold increased,respectively,in the group B than that in the group A(P<0.05 for all).Under the experimental conditions of group B,the image contrast of tumor and organs was improved.(4)No significant differences were found for tumor18F-FDG uptake by different routes of injection in the first scanning(P=0.364).After the second scanning,the18F-FDG accumulation in the abdominal cavity by intraperitoneal injection led to a lower uptake of tumor and normal tissues.Significant differences were found for tumor18F-FDG uptake by intraperitoneal injection between the first scanning and the second scanning(P=0.025).ConclusionsAnimal preparation has significant effects on the18F-FDG biodistribution in normal tissues and the uptake in subcutaneously transplanted tumors.Fasting,warming,anesthesia,intravenous injection can improve the imaging quality and reproducibility.

    Xenograft,nude mouse;Fluorodeoxyglucose;Positron emission tomography,animal;Study conditions;Nude mice

    R33

    A

    1671-7856(2014)02-0057-06

    10.3969.j.issn.1671.7856.2014.002.013

    重大新藥創(chuàng)制項目[2009ZX09501-026]。

    周麗娜(1982-),女,博士,影像醫(yī)學與核醫(yī)學。

    吳寧(1960-),女,教授,博士生導師,分子影像與腫瘤影像診斷。

    2013-12-05

    猜你喜歡
    禁食皮下腹腔
    傷寒桿菌致感染性腹主動脈瘤合并腹腔膿腫1例
    傳染病信息(2022年6期)2023-01-12 08:59:04
    兒童擇期手術前禁飲禁食的現狀及研究進展
    奧曲肽持續(xù)皮下泵入給藥在惡性腸梗阻姑息性治療中的作用
    智慧健康(2021年33期)2021-03-16 05:48:04
    “關于全面禁食野生動物的決定”之思考與相關法修改建議
    禁食野味 從我做起
    科學(2020年2期)2020-08-24 07:57:02
    禁食野生動物,保護生物多樣性
    科學(2020年2期)2020-01-08 14:55:16
    胎兒腹腔囊性占位的產前診斷及產后隨訪
    不同內鏡術治療消化道上皮下腫瘤的臨床療效比較
    癌癥進展(2016年9期)2016-08-22 11:33:18
    皮下結節(jié)型結節(jié)病1例
    鋸齒狀縫線皮下埋置面部提升術臨床應用(附140例)
    国产成人aa在线观看| 婷婷亚洲欧美| 午夜精品国产一区二区电影 | 日本成人三级电影网站| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲精品一区av在线观看| 国产精品一及| 12—13女人毛片做爰片一| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲三级黄色毛片| 免费av不卡在线播放| 悠悠久久av| 亚洲精品日韩av片在线观看| av免费在线看不卡| 精品乱码久久久久久99久播| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 亚洲精品色激情综合| 国产精品福利在线免费观看| 男女啪啪激烈高潮av片| 插阴视频在线观看视频| 亚洲美女搞黄在线观看 | av在线蜜桃| 日韩人妻高清精品专区| 少妇人妻一区二区三区视频| 成人国产麻豆网| 舔av片在线| 俺也久久电影网| 久久午夜福利片| 老司机影院成人| av黄色大香蕉| 国产乱人偷精品视频| 真人做人爱边吃奶动态| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 看非洲黑人一级黄片| 久久人人爽人人片av| 国产av一区在线观看免费| 成人永久免费在线观看视频| 国产爱豆传媒在线观看| 国产精品一及| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 亚洲最大成人手机在线| 亚洲不卡免费看| 日韩在线高清观看一区二区三区| 寂寞人妻少妇视频99o| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 美女高潮的动态| 久久久久久久亚洲中文字幕| 少妇的逼水好多| 日本成人三级电影网站| 午夜福利18| 精品久久久久久久久av| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 亚洲国产色片| 亚洲图色成人| 国产精品野战在线观看| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 日韩精品有码人妻一区| 欧美一区二区国产精品久久精品| 久久韩国三级中文字幕| 少妇人妻精品综合一区二区 | 午夜激情福利司机影院| 日本在线视频免费播放| 亚洲中文日韩欧美视频| 不卡视频在线观看欧美| 91久久精品电影网| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产亚洲91精品色在线| 成人午夜高清在线视频| 久久久国产成人免费| 久久久a久久爽久久v久久| 特级一级黄色大片| 国语自产精品视频在线第100页| ponron亚洲| 免费电影在线观看免费观看| a级毛片a级免费在线| 久久6这里有精品| 一级毛片电影观看 | 免费一级毛片在线播放高清视频| 看十八女毛片水多多多| 国产高潮美女av| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 特级一级黄色大片| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 激情 狠狠 欧美| 男人的好看免费观看在线视频| 热99re8久久精品国产| 国产av一区在线观看免费| 国产毛片a区久久久久| 精品熟女少妇av免费看| 国产高潮美女av| 国产三级中文精品| 国产精品国产三级国产av玫瑰| or卡值多少钱| 热99re8久久精品国产| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲av二区三区四区| 一进一出抽搐gif免费好疼| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 毛片一级片免费看久久久久| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 国产精品福利在线免费观看| 深夜精品福利| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 男人狂女人下面高潮的视频| 国产在线精品亚洲第一网站| 赤兔流量卡办理| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 一级a爱片免费观看的视频| 床上黄色一级片| 日本免费a在线| 99在线视频只有这里精品首页| 成人鲁丝片一二三区免费| 欧美国产日韩亚洲一区| 啦啦啦韩国在线观看视频| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| av福利片在线观看| 欧美在线一区亚洲| 久99久视频精品免费| 久久草成人影院| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 日韩在线高清观看一区二区三区| 免费无遮挡裸体视频| 亚洲电影在线观看av| 国产三级中文精品| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 久久久精品欧美日韩精品| 天天躁日日操中文字幕| 国产精品久久视频播放| 给我免费播放毛片高清在线观看| 日本欧美国产在线视频| 99热6这里只有精品| 色av中文字幕| 男女那种视频在线观看| 久久久欧美国产精品| 久久鲁丝午夜福利片| 精品不卡国产一区二区三区| 老熟妇仑乱视频hdxx| 午夜影院日韩av| 舔av片在线| 少妇人妻精品综合一区二区 | 韩国av在线不卡| 看片在线看免费视频| 午夜福利高清视频| 婷婷六月久久综合丁香| 欧美zozozo另类| 国产亚洲欧美98| 欧美一级a爱片免费观看看| 国语自产精品视频在线第100页| 欧美三级亚洲精品| 一级a爱片免费观看的视频| 有码 亚洲区| 色哟哟·www| 国模一区二区三区四区视频| 啦啦啦啦在线视频资源| 亚洲丝袜综合中文字幕| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 亚洲性久久影院| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产真实伦视频高清在线观看| 免费电影在线观看免费观看| а√天堂www在线а√下载| 深爱激情五月婷婷| 久久九九热精品免费| 久久久久性生活片| 久久精品国产亚洲av天美| 国产亚洲欧美98| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 日本黄大片高清| 中文字幕av成人在线电影| 一级a爱片免费观看的视频| 一级毛片电影观看 | 直男gayav资源| 精品国内亚洲2022精品成人| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 亚洲成人中文字幕在线播放| 少妇的逼好多水| 69av精品久久久久久| 久久午夜福利片| av黄色大香蕉| 国产精品亚洲一级av第二区| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 老女人水多毛片| 又黄又爽又免费观看的视频| 午夜a级毛片| 卡戴珊不雅视频在线播放| 又爽又黄a免费视频| 精品福利观看| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 男人和女人高潮做爰伦理| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产精品人妻久久久久久| 寂寞人妻少妇视频99o| 国产男人的电影天堂91| 欧美成人a在线观看| 久久久国产成人精品二区| 色5月婷婷丁香| 国产三级在线视频| 欧美日韩乱码在线| 免费看av在线观看网站| 内射极品少妇av片p| 国产真实伦视频高清在线观看| 亚洲国产精品成人综合色| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 联通29元200g的流量卡| 12—13女人毛片做爰片一| 国产一区亚洲一区在线观看| 一区二区三区四区激情视频 | a级毛色黄片| 亚洲人成网站在线观看播放| 神马国产精品三级电影在线观看| 国产成人福利小说| 精品久久久久久久末码| 午夜久久久久精精品| 亚洲国产高清在线一区二区三| 久久国产乱子免费精品| 中国国产av一级| 国产精品一区www在线观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 波多野结衣巨乳人妻| 中文字幕av成人在线电影| 免费观看人在逋| 久久久色成人| 51国产日韩欧美| 真人做人爱边吃奶动态| 日日啪夜夜撸| 久久综合国产亚洲精品| 国产精品久久电影中文字幕| 免费av不卡在线播放| 国产不卡一卡二| 国产精品久久久久久av不卡| 色尼玛亚洲综合影院| 精品不卡国产一区二区三区| 97超视频在线观看视频| 亚洲国产精品成人久久小说 | av专区在线播放| 男人舔奶头视频| 亚洲性夜色夜夜综合| 一级av片app| 国产精品国产高清国产av| www.色视频.com| 给我免费播放毛片高清在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 欧美又色又爽又黄视频| 成人午夜高清在线视频| 又爽又黄a免费视频| 国产成人精品久久久久久| 最近视频中文字幕2019在线8| 晚上一个人看的免费电影| 在线a可以看的网站| 精品乱码久久久久久99久播| 亚洲va在线va天堂va国产| 老女人水多毛片| 我的老师免费观看完整版| 久久久久久国产a免费观看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 日韩大尺度精品在线看网址| 国产爱豆传媒在线观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 欧美高清性xxxxhd video| 成年女人看的毛片在线观看| 亚洲国产欧美人成| 夜夜夜夜夜久久久久| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 国产精品人妻久久久久久| 欧美日韩精品成人综合77777| 最后的刺客免费高清国语| 免费观看精品视频网站| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 搡老妇女老女人老熟妇| 精品久久久久久成人av| 亚洲一区二区三区色噜噜| 露出奶头的视频| 精品午夜福利视频在线观看一区| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 国产精品av视频在线免费观看| 国产男人的电影天堂91| 久久午夜亚洲精品久久| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 国产成人freesex在线 | 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲一区高清亚洲精品| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 成年女人看的毛片在线观看| 日韩三级伦理在线观看| 美女 人体艺术 gogo| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 国产精品无大码| 我要搜黄色片| 国产精品伦人一区二区| 国产成人freesex在线 | 少妇熟女欧美另类| 一个人看视频在线观看www免费| 日本与韩国留学比较| 精品免费久久久久久久清纯| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 欧美日韩国产亚洲二区| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲精品影视一区二区三区av| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 精品一区二区三区人妻视频| 国产精品日韩av在线免费观看| 99热全是精品| 亚洲色图av天堂| 97超视频在线观看视频| 一进一出抽搐动态| 日本熟妇午夜| 亚洲精品日韩av片在线观看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 乱码一卡2卡4卡精品| 2021天堂中文幕一二区在线观| 国产精品女同一区二区软件| 人妻少妇偷人精品九色| 97超碰精品成人国产| 黄片wwwwww| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 国产一区二区在线观看日韩| av视频在线观看入口| 国产精品久久电影中文字幕| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 偷拍熟女少妇极品色| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲欧美精品自产自拍| 精品久久国产蜜桃| 麻豆乱淫一区二区| 国产午夜精品论理片| 2021天堂中文幕一二区在线观| 日韩欧美免费精品| 91精品国产九色| 国语自产精品视频在线第100页| 久久精品国产清高在天天线| 日本欧美国产在线视频| 可以在线观看毛片的网站| 悠悠久久av| 听说在线观看完整版免费高清| 性欧美人与动物交配| av.在线天堂| 欧美性猛交黑人性爽| 直男gayav资源| 亚洲一区二区三区色噜噜| 97在线视频观看| 日韩 亚洲 欧美在线| 久久久久久久久中文| 亚洲精品日韩在线中文字幕 | 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产男人的电影天堂91| 国产真实乱freesex| 免费一级毛片在线播放高清视频| 亚洲电影在线观看av| 亚洲熟妇熟女久久| 国产亚洲欧美98| 99久久九九国产精品国产免费| 精品午夜福利在线看| 在线观看午夜福利视频| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 免费无遮挡裸体视频| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 18禁黄网站禁片免费观看直播| 一级毛片我不卡| 亚洲成av人片在线播放无| eeuss影院久久| 精品一区二区三区视频在线| 中国美白少妇内射xxxbb| 精品国产三级普通话版| 一本一本综合久久| a级一级毛片免费在线观看| 国产大屁股一区二区在线视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 日韩制服骚丝袜av| 2021天堂中文幕一二区在线观| 色播亚洲综合网| 看片在线看免费视频| 在线免费观看的www视频| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 欧美日韩在线观看h| 久久久国产成人免费| 白带黄色成豆腐渣| 观看美女的网站| 久久久国产成人免费| 欧美一级a爱片免费观看看| 在线播放无遮挡| 热99在线观看视频| 亚洲va在线va天堂va国产| 真实男女啪啪啪动态图| 亚洲美女黄片视频| 午夜影院日韩av| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 天堂动漫精品| 欧美丝袜亚洲另类| 伊人久久精品亚洲午夜| 在线免费观看的www视频| 桃色一区二区三区在线观看| av福利片在线观看| 99九九线精品视频在线观看视频| 午夜福利成人在线免费观看| 日本黄大片高清| 亚洲av一区综合| 久久人妻av系列| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 99在线人妻在线中文字幕| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产极品精品免费视频能看的| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 又爽又黄无遮挡网站| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 成人午夜高清在线视频| 天堂网av新在线| 色在线成人网| 人妻少妇偷人精品九色| 白带黄色成豆腐渣| 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲第一电影网av| 精品一区二区三区人妻视频| 一夜夜www| 波多野结衣巨乳人妻| 久久久成人免费电影| 51国产日韩欧美| 小说图片视频综合网站| 日韩欧美免费精品| 中文字幕久久专区| www日本黄色视频网| 毛片女人毛片| 国产亚洲精品av在线| 国产精品av视频在线免费观看| 男人和女人高潮做爰伦理| 免费无遮挡裸体视频| 久久精品综合一区二区三区| 99久久成人亚洲精品观看| av天堂在线播放| 人妻少妇偷人精品九色| 波野结衣二区三区在线| a级毛片免费高清观看在线播放| 欧美另类亚洲清纯唯美| av天堂在线播放| 一个人观看的视频www高清免费观看| 又爽又黄无遮挡网站| 不卡一级毛片| 日本免费a在线| 天堂网av新在线| 久久精品国产自在天天线| 久99久视频精品免费| 国语自产精品视频在线第100页| 欧美一区二区亚洲| 成年女人毛片免费观看观看9| 激情 狠狠 欧美| 午夜精品一区二区三区免费看| 日韩精品中文字幕看吧| 欧美一区二区国产精品久久精品| 极品教师在线视频| 又粗又爽又猛毛片免费看| 天美传媒精品一区二区| 一本精品99久久精品77| 国产精品福利在线免费观看| 午夜精品在线福利| 内射极品少妇av片p| 黑人高潮一二区| 中文字幕免费在线视频6| 国内精品美女久久久久久| 99国产精品一区二区蜜桃av| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲成人久久性| 免费人成视频x8x8入口观看| 99热精品在线国产| 精品国产三级普通话版| 国产麻豆成人av免费视频| 色综合色国产| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 99热全是精品| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲欧美成人精品一区二区| 国产一区二区三区av在线 | 国产一区二区在线av高清观看| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 色哟哟哟哟哟哟| 日韩av在线大香蕉| 91在线观看av| 在线免费观看的www视频| 91精品国产九色| 大型黄色视频在线免费观看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| a级毛片免费高清观看在线播放| 中文在线观看免费www的网站| 亚洲精品日韩av片在线观看| aaaaa片日本免费| 黄色一级大片看看| 国产高清视频在线观看网站| 国产乱人偷精品视频| 国产av在哪里看| 禁无遮挡网站| 亚洲最大成人中文| 中国国产av一级| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 欧美性猛交黑人性爽| 国产激情偷乱视频一区二区| 99在线人妻在线中文字幕| 国产免费又黄又爽又色| 最近最新中文字幕免费大全7| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产极品粉嫩免费观看在线 | 成人漫画全彩无遮挡| 精品一区二区三卡| 欧美bdsm另类| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 亚洲国产欧美在线一区| 久久久a久久爽久久v久久| 精品国产乱码久久久久久小说| 青春草国产在线视频| 久久99一区二区三区| 国产免费一区二区三区四区乱码| 久久av网站| 有码 亚洲区| 久久久久久久亚洲中文字幕| 看非洲黑人一级黄片| 欧美3d第一页| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 国产淫片久久久久久久久| 熟女电影av网| 91精品国产国语对白视频| 内射极品少妇av片p| 18禁在线播放成人免费| 久久久精品免费免费高清| 黑人猛操日本美女一级片| 亚洲三级黄色毛片| 亚洲av福利一区| av在线老鸭窝| 成人国产av品久久久| 两个人免费观看高清视频 | 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲av.av天堂| 亚洲图色成人| 色婷婷av一区二区三区视频| 日日啪夜夜爽| 国产一区二区在线观看av| 国产日韩欧美亚洲二区| 日韩三级伦理在线观看| 亚洲三级黄色毛片| 丰满乱子伦码专区| 午夜免费观看性视频| 国产精品欧美亚洲77777| 中文字幕久久专区| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 精品亚洲成国产av| 精品一区二区免费观看| 中文字幕亚洲精品专区| 久久国产乱子免费精品| 国产日韩欧美视频二区| 日韩一本色道免费dvd| 国产精品久久久久久精品电影小说| 久久人妻熟女aⅴ| 99久国产av精品国产电影| 国产av精品麻豆| 日韩免费高清中文字幕av| 欧美日韩综合久久久久久| 大片免费播放器 马上看| 久久久久国产网址| 欧美性感艳星| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 久久综合国产亚洲精品| 免费看不卡的av| 九色成人免费人妻av| 丝袜喷水一区| 97超视频在线观看视频| 久久久a久久爽久久v久久| 久久久久久久久大av| 日日啪夜夜爽| 爱豆传媒免费全集在线观看| av在线老鸭窝| 精品午夜福利在线看| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 精品人妻一区二区三区麻豆| 久久久久久伊人网av| 久久久a久久爽久久v久久| 国产男女内射视频| 日韩在线高清观看一区二区三区| 亚洲国产精品一区三区| 欧美人与善性xxx| 国产成人a∨麻豆精品| 在线天堂最新版资源| 大香蕉97超碰在线| 寂寞人妻少妇视频99o| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲精品亚洲一区二区| 亚洲精品第二区| 亚洲美女黄色视频免费看| 丝袜在线中文字幕| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 最新的欧美精品一区二区| 免费黄色在线免费观看| 国产精品无大码| 晚上一个人看的免费电影| 日韩中字成人| 99热这里只有精品一区| 亚洲美女视频黄频| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 国产日韩欧美在线精品| 免费av中文字幕在线| kizo精华| 午夜免费鲁丝| av有码第一页|