紅外分光光度法鑒別阿苯達(dá)唑原料

章安源 張志民 李淑花 劉道中 （山東省獸藥質(zhì)量檢驗所 濟(jì)南 250012）

紅外分光光度法鑒別阿苯達(dá)唑原料

章安源 張志民 李淑花 劉道中 （山東省獸藥質(zhì)量檢驗所 濟(jì)南 250012）

本研究建立了阿苯達(dá)唑快速、專屬的鑒別方法。分別采用直接檢測樣品法和以乙醇為溶劑進(jìn)行提取法，進(jìn)行紅外鑒別。作精密度和比對分析。乙醇提取法在含量測定、與標(biāo)準(zhǔn)圖譜相似度較直接監(jiān)測樣品法有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。結(jié)果表明，本法專屬性好，可準(zhǔn)確地鑒別本品。

紅外分光光度法 阿苯達(dá)唑 溴化鉀

阿苯達(dá)唑(abendazuo)為抗蠕蟲藥，對于其原料藥鑒別方法為一般的化學(xué)反應(yīng)和紅外吸收圖譜。而紅外吸收光譜是有機(jī)化合物的重要特征之一，具有高 度的專屬性和特異性，是藥品檢驗中鑒別有機(jī)藥物的重要方法。“英國藥典2009凡例Ⅱ[1]中說明當(dāng)紅外鑒別用于需要一定預(yù)處理樣品時，有可能無法達(dá)到嚴(yán)格一致，此時樣品光譜需與對照光譜大致相同”。為快速有效地鑒別阿苯達(dá)唑原料藥，本文研究了用兩種不同方法處理阿苯達(dá)唑，對兩種方法作一定的評價。

1 材料和方法

1.1 儀器與試藥 傅立葉65紅外分光光度儀(美國PE公司)、UV-2550紫外分光光度計(日本島津公司)、BT125D電子天平(美國賽多利斯公司)。阿苯達(dá)唑?qū)φ掌?中國藥品生物制品檢定所、批號100373-200502，純度100.0%)、阿苯達(dá)唑原料(常州亞邦齊暉醫(yī)藥化工有限公司，批號60118327、60112471、60112017)，無水乙醇、溴化鉀均為分析純。

1.2 方法 （1）直接制備對照品片及供試品(簡稱方法1)：將溴化鉀在120℃干燥5h后，取溴化鉀約300mg，置瑪瑙研缽中研細(xì)，壓片，作為溴化鉀空白片。目測，空白片呈透明狀，上機(jī)后譜圖顯示基線透光率大于75%。取阿苯達(dá)唑?qū)φ掌放c樣品各約0.5mg，分別與經(jīng)干燥的溴化鉀約70mg，置瑪瑙研缽中混合，研細(xì)后壓片，制得對照品，供試品。上機(jī)后，扣除空白片背景后，光譜圖顯示基線透光率大于80%。制備的對照品和供試品透光率均符合紅外圖譜要求。（2）處理后制備對照品片及供試品(簡稱方法2)：根據(jù)阿苯達(dá)唑在丙酮中微溶，在乙醇中幾乎不溶，在水中不溶的性質(zhì)，選擇以無水乙醇溶解[2]。取對照品和供試品適量，分別溶于無水乙醇中，研磨使溶解，濾過，濾液置水浴上蒸干后，105℃干燥1h后[3,4]，取殘渣，滴加1ml左右液狀石蠟，置研缽中研成均勻的糊狀物，取適量糊狀物均勻涂抹與兩個空白溴化鉀片之間，制得對照品和供試品。二者的光譜圖顯示基線透光率大于80%。符合檢測要求。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用spss10.0統(tǒng)計軟件，檢測數(shù)據(jù)以x±S表示，兩種方法比較用t檢驗，以P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 精密度試驗 對照品和供試品各3批，每批進(jìn)行2個樣品平行試驗，同一天不同時間、不同天重復(fù)3次，所得紅外譜線基本一致[5]。

2.2 穩(wěn)定性試驗 取對照品和供試品各3批，放入干燥器，每隔1h測定1次，12h內(nèi)所得所得紅外圖譜基本一致。

2.3 重復(fù)性試驗 取對照品和供試品按每批進(jìn)行2個樣品平行試驗，連續(xù)測定3批，重復(fù)3次。所得紅外譜線基本一致。

2.4 樣品的含量測定 取兩種方法制下制備合格的對照品和供試品，按《中國獸藥典》紫外-可見分光法測定阿苯達(dá)唑含量，所有對照品和供試品含量均合格，符合紅外光譜測定的要求。（1）對照品和供試品分別用兩種不同的處理方法(方法1和方法2)連續(xù)進(jìn)行18次盲測，經(jīng)t檢驗分析，結(jié)果表明兩種不同方法測定對照品的含量值之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)；不同方法測定供試品的含量值之間的總體差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)果見表1。

表1 二種不同前處理方法測定含量(±S) (%)

表1 二種不同前處理方法測定含量(±S) (%)

注：*P＜0.05，下表類同。

測試方法 對照品 供試品方法1 99.9±0.10 99.2±0.05方法2 100.0±0.01 99.4±0.26*

2.5 對照品和供試品紅外圖譜測定 經(jīng)過計算機(jī)對多次測定得到的對照品和供試品紅外圖譜進(jìn)行平均化處理，作為紅外標(biāo)準(zhǔn)圖譜[6]，見圖1、2、3、4、5。

圖1 對照品(方法1)

圖2 供試品(方法1)

圖3 對照品(方法2)

圖4 供試品(方法2)

圖5 阿苯達(dá)唑標(biāo)準(zhǔn)圖譜(獸藥典)

2.6 數(shù)據(jù)處理 標(biāo)準(zhǔn)化后的對照品和供試品圖譜與2010版《獸藥典》提供的阿苯達(dá)唑標(biāo)準(zhǔn)圖譜進(jìn)行比較。計算機(jī)自動計算其相似度，相似度最低限的閾值為90%.0[6]。這些數(shù)據(jù)可以作為評價方法1和方法2是否對紅外圖譜有影響。經(jīng)t檢驗分析，結(jié)果表明兩種不同前處理后測得的對照品圖譜與標(biāo)注圖譜之間差異不顯著(P＞0.05)；兩種不同方法處理的供試品圖譜與標(biāo)準(zhǔn)圖譜之間差異顯著(P＜0.05)。結(jié)果見表2。

表2 兩種不同前處理方法后的譜線比對試驗(x±S) (%)

3 討論

（1）精密度反映實驗結(jié)果的重現(xiàn)性，其中批內(nèi)精密度反映的同1份標(biāo)本在一天內(nèi)使用同一試劑不同時間點檢測結(jié)果的重現(xiàn)性，批間精密度反映的是同1份標(biāo)本在不同天內(nèi)檢測結(jié)果的重現(xiàn)性，二者都對實驗室結(jié)果常規(guī)檢測質(zhì)量的評價有重要影響[5]。本試驗設(shè)計對照品和供試品分別檢測3批，每批2個平行樣品，重復(fù)3次，從結(jié)果表2中可以看出，本試驗對兩種不同方法處理過的對照品和供試品的圖譜相似度的批內(nèi)、批間CV均小于5%，重復(fù)性好，兩種方法總體間CV符合情況很好，可以滿足紅外圖譜測定要求；可能是方法2前處理包括藥品的提純及干燥去水的過程，而且制片為非傳統(tǒng)的石蠟糊法制片，因而檢測的重復(fù)性好，從而可以大大提高紅外檢測的靈敏度和分析的特異性。是一種較理想的測定方法。從表1和表2結(jié)果顯示方法2處理過的供試品無論是含量還是與標(biāo)注圖譜的相似度兩個指標(biāo)都較方法1差異顯著(P＜0.05)。（2）紅外分光光度法已廣泛應(yīng)用于藥物的定性鑒別中。而光譜圖的質(zhì)量很大程度上取決于樣品的制備。對于原料藥可直接取樣壓片，但如果測得的光譜圖與《藥品紅外光譜集》所收載的對照圖譜不一致時，在排除可能影響測定的外在因素后，可按該藥物光譜圖中備注的方法或藥品標(biāo)準(zhǔn)中該品種項下規(guī)定的方法進(jìn)行預(yù)處理后，再錄制光譜圖與對照圖譜比對[7]。本試驗對分析得到的阿苯達(dá)唑圖譜與獸藥典提供的標(biāo)準(zhǔn)圖譜進(jìn)行了對比，阿苯達(dá)唑供試品未經(jīng)處理(方法1)直接壓片后得出的紅外圖譜與《獸藥紅外光譜集》所收載的標(biāo)準(zhǔn)圖譜在1380cm-1處的吸收峰有差異，與標(biāo)準(zhǔn)圖譜比較相似度在91%左右。分子的紅外光譜是發(fā)生紅移還是藍(lán)移，是多種因素綜合作用的結(jié)果[8]。目前由多晶型藥物引起紅外光譜的差異占全部晶型藥物的數(shù)量還很有限[9]。丙酮作粉碎或分散促進(jìn)劑情況下，往往會加速晶型轉(zhuǎn)變[10]，多晶型的變化會導(dǎo)致紅外光譜的差異，因此，當(dāng)紅外光譜不一致時，首先應(yīng)考慮樣品的純度是否符合要求，不純的樣品雜質(zhì)檢出率有時可低至1%[11]。所以本試驗設(shè)計乙醇提取后既能提取有效成份，也可能除去了絕大部分的輔料，而且去掉部分輔料，供試品的純度較高，結(jié)果顯示供試品圖譜的相似度較方法1有提高(P＜0.05)。（3）另外水分的存在也會使紅外譜圖失真，也應(yīng)考慮采取有效的方法去除水分的干擾。無論是原料藥還是制劑的提取物，對于非揮發(fā)性或熔點較高(105℃以上)的樣品在壓片前均應(yīng)進(jìn)行干燥處理[12]。阿苯達(dá)唑的熔點在206～212℃，所以經(jīng)過溶劑提取后作者又根據(jù)供試品自身的理化性質(zhì)采用了105℃，時間在1h。（4）雖然在粉劑樣品制樣中，壓片法是最優(yōu)先選用的方法，但易受潮或空氣而產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)，重現(xiàn)性差，用方法2處理過的樣品是使用的石蠟糊法，試驗的穩(wěn)定性良好[13]，這是因為石蠟里的油質(zhì)能包裹住研磨好的粉狀樣品的顆粒表面，樣品如糊狀平鋪于兩塊空白溴化鉀空白片之間，能夠?qū)悠沸纬杀Ｗo(hù)的外環(huán)境，容易得到穩(wěn)定不變的紅外光譜圖。（5）經(jīng)過方法2處理后的對照品和供試品，測得的紅外譜線，與標(biāo)準(zhǔn)圖譜進(jìn)行比較，供試品圖譜與標(biāo)注圖譜相似度均在 93.0% 左右，并且特征峰明顯，重現(xiàn)性好。證明了應(yīng)用紅外鑒別阿苯達(dá)唑原料的可行性。因此推斷，輔料和水分均有可能干擾阿苯達(dá)唑的紅外分光光度法測定。

由圖可見，經(jīng)過處理(方法2)過的阿苯達(dá)唑供試品與《獸藥紅外光譜集》所收載的標(biāo)準(zhǔn)圖譜大體一致。因此，本法可作為阿苯達(dá)唑原料的鑒別方法之一，省時，準(zhǔn)確。從而更好地為檢測紅外的任務(wù)服務(wù)。

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S818.9

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1007-1733(2014)04-0005-03

2013–12–23）