水貂犬瘟熱抗體檢測(cè)及其分析

戴秀美 王清明 惠涌泉 王秋菊 常維山*

（①山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 山東 泰安 271018 ②山東菁華農(nóng)牧發(fā)展有限公司 山東 諸城③ 山東諸城市皮毛動(dòng)物研究所）

犬瘟熱是犬類、毛皮動(dòng)物和部分海洋哺乳動(dòng)物的一種多發(fā)性、高度接觸性烈性傳染病[1]，病死率差異很大，為30%～80%。早期以雙相熱、結(jié)膜炎、支氣管炎、卡他性肺炎、胃腸炎為特征，后期出現(xiàn)明顯的神經(jīng)癥狀，部分病例足墊過(guò)度角質(zhì)化。自1973年我國(guó)首次發(fā)現(xiàn)犬瘟熱以來(lái)，該病已給毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，是毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖三大疫病之一。雖然犬瘟熱疫苗在中國(guó)毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)中得到了推廣應(yīng)用，但犬瘟熱引起貂、狐和貉等毛皮動(dòng)物死亡率仍然較高(平均23.2%)[2]。雖然有犬瘟熱疫苗出售，但仍存在免疫失敗現(xiàn)象。為了解使用激素后水貂犬瘟熱免疫效果，2013年9～10月筆者對(duì)大連市、諸城市部分水貂養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行了CDV血清學(xué)調(diào)查與分析。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 樣品采集 2013年9～10月水貂出欄期間對(duì)諸城市和大連市部分水貂養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行隨機(jī)心臟采血取樣，共100份血清。其中諸城市50份，大連市50份。水貂養(yǎng)殖場(chǎng)均使用齊魯動(dòng)物保健廠CDV-11株犬瘟熱活疫苗進(jìn)行犬瘟熱的免疫。

1.1.2 主要試劑及儀器 CDV-Ab ELISA 48孔和96孔檢測(cè)試劑盒(美國(guó)RB公司生產(chǎn))、酶標(biāo)儀、50ml移液槍、50ml排槍、300ml排槍、37℃溫箱、濕盒、黃白槍頭等。

1.2 方法

1.2.1 采血和血清分離 隨機(jī)采集的100份血樣，心臟采血后將離心管靜置放置20min，后3000r/min離心3～5min，收集血清置于-20℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA) 按照美國(guó)RB公司CDV-Ab ELISA 檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明步驟進(jìn)行，以96孔板為例，每板設(shè)置陰陽(yáng)性對(duì)照8孔，并加入陰陽(yáng)性各50ml；待測(cè)樣本孔加待測(cè)樣本10ml，再加樣本稀釋液40ml；然后陰陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗原100ml，用封板膜封住反應(yīng)板，37℃溫箱孵育60min。棄去液體，在吸水紙上拍干，每孔加入200ml洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，洗板5次。每孔加入底物A、B各50ml，37℃避光孵育15min。每孔加入終止液50ml，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。結(jié)果判定：臨界值= 陰性對(duì)照孔平均值+0.15；陰性判定: 樣品D450nm值<臨界值者為犬瘟熱病毒(CDV)抗體陰性；陽(yáng)性判定：樣品D450nm值>臨界值者為犬瘟熱(CDV)抗體陽(yáng)性。

2 結(jié)果

諸城市部分地區(qū)采集的50份激素貂血清，CDV抗體平均陽(yáng)性率為36%，本地區(qū)陽(yáng)性率見(jiàn)表1。大連莊河市部分地區(qū)采集的50份出欄水貂血清，CDV抗體平均陽(yáng)性率為32%，本地區(qū)陽(yáng)性率見(jiàn)表2。

表1 山東諸城市部分地區(qū)CDV抗體陽(yáng)性率 (%)

表2 大連莊河市部分地區(qū)CDV抗體陽(yáng)性率 (%)

3 小結(jié)與討論

犬瘟熱是困擾毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的三大疫病之一，對(duì)使用過(guò)激素的水貂進(jìn)行犬瘟熱抗體的監(jiān)測(cè)能夠?qū)θ翢崦庖咝Ч斜容^直觀的了解。于2013年9～10月間對(duì)山東諸城市和大連莊河市激素貂的100份血清進(jìn)行了犬瘟熱抗體ELISA檢測(cè)。結(jié)果表明山東諸城市和大連莊河市激素貂的CDV抗體平均陽(yáng)性率相近，為30%左右。在使用相同疫苗免疫的條件下，犬瘟熱抗體陽(yáng)性率與犬瘟熱疫苗的免疫次數(shù)密切相關(guān)，已完成犬瘟熱二次免疫的水貂養(yǎng)殖場(chǎng)的抗體陽(yáng)性率明顯高于只進(jìn)行過(guò)一次免疫及未進(jìn)行過(guò)免疫的。大連莊河市藍(lán)店鄉(xiāng)雖然進(jìn)行過(guò)2次犬瘟熱疫苗免疫，但其抗體陽(yáng)性率仍然較低，主要原因可能是二次免疫時(shí)機(jī)不對(duì)，不能很好地掌握二次免疫間隔時(shí)間，導(dǎo)致免疫空白期的出現(xiàn)，造成免疫失敗，犬瘟熱抗體產(chǎn)生量低。

總之，犬瘟熱的有效控制需要合理的疫苗免疫程序。本研究提醒水貂養(yǎng)殖戶：規(guī)范、合理、嚴(yán)格的免疫接種至關(guān)重要，且一定要重視二次免疫，只有這樣才能產(chǎn)生堅(jiān)實(shí)的疫苗保護(hù)力，防止犬瘟熱暴發(fā)造成不必要的經(jīng)濟(jì)損失。

[1]Martella V，Elia G，Buonavoglia C.Canine distemper virus [J]Vet Clin North Am Small Anim Pract, 2008, 38(4): 787-797.

[2]王珺瑋.貂、狐、貉源犬瘟熱病毒分離鑒定與分子生物學(xué)特性研究[D].南京: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué), 2008