常規(guī)方法測定LDH測量不確定度的評定

摘要：目的 探討測量不確定度評定在臨床檢驗常規(guī)測量中的應用。方法 以常規(guī)方法測定乳酸脫氫酶（LDH-L）為列，按測量不確定度評定過程，分析不確定度的來源并分別按A類和B類進行評定，合成標準不確定度，計算拓展不確定度。結果 當LDH濃度為水平1時，A類不確定度UA=1.09，B類不確定度UB=3.32，合成標準不確定度UC=3.49，拓展不確定度U=6.84。當LDH濃度為水平2時，A類不確定度UA=0.58，B類不確定度UB=3.32，合成標準不確定度UC=3.37，拓展不確定度U=6.61。結論 該研究只評估測量過程的不確定度，各實驗室應參照《測量不確定度表示指南》建立本實驗室各項檢測項目不確定度評定程序并進行評定，以確保實驗結果的可靠性。

關鍵詞：不確定度；乳酸脫氫酶；評定

\"不確定度（ uncertainty）\"起源于1927年德國[1]。1998年我國發(fā)布了國家計量技術規(guī)范JJF1001-1998《通用計量術語及定義》。它是指\"表征合理地賦予被測量之值的分散性，與測量結果相聯(lián)系的參數(shù)\"。測量不確定度的概念及其評定和表示方法的采用，是計量科學的一個新進展[2]。測量不確定度的來源甚廣，我們在進行測量工作時無法做到消除，只能盡量減少其來源[3]。隨著經(jīng)濟發(fā)展全球化，不確定度是國際檢測實驗室之間互認和通用準則接軌的基礎[4]。本文將對使用臨床常規(guī)方法測定人乳酸脫氫酶的結果進行不確定度評定，并對影響不確定度評定因素進行了逐項分析，探討測量不確定度評定在臨床檢驗常規(guī)測量中的應用。

1 資料與方法

1.1一般資料 日本株式會社日立公司7600全自動生化分析儀，德賽診斷系統(tǒng)（上海）有限公司試劑和試劑配套的LDH校準液，購自德賽診斷系統(tǒng)（上海）有限公司的LDH質控品，分別為水平1和水平2。

1.2方法

1.2.1 LDH檢測原理 IFCC和德國臨床化學學會（DGKC）推薦的紫外檢測法，該法簡單快速、精確度高、重復性好，適宜于常規(guī)檢驗。

L-乳酸+NAD+？圮LDH 丙酮酸+NADH+H

1.2.2規(guī)定被測量物 用雙波長（主波長：340nm，次波長：405nm）速率法檢測LDH。測量過程嚴格按照湖南省婦幼保健院檢驗科生化室編制的作業(yè)指導書，其中分析參數(shù)由德賽診斷系統(tǒng)（上海）有限公司提供，儀器操作遵循日本株式會社日立公司的用戶手冊。結果計算公式如下：LDH（u/l）=測定（△E/min[S-BI]）/校準（△E/min[S-BI]）×標準液活性（u/l）（公式1）。本次實驗在1d 內(nèi)完成，重復測定樣本15次，結果均在控，將測定結果記錄后進行統(tǒng)計學分析。

1.2.3識別不確定度來源 經(jīng)過分析，測定LDH的測量不確定度主要來源于分析前和分析中兩個階段。分析前的不確定度主要來自受試者的準備和標本采集、儲存與制備過程，在臨床檢驗實踐中，個體間的生物學變異也是分析前不確定度的重要來源。但是分析前過程存在很多臨床實驗室無法控制的情況，且這些情況各異，故對于這一部分不予評定。關于分析中階段由公式1可知，如果校準品賦值不準確，或校準品所攜帶的值不確定度過大，故分析中階段帶來的不確定度可根據(jù)廠家溯源性報告進行評定。

1.2.4評定不確定度分量

1.2.4.1評定A 類不確定度（UA） 通過實驗和適當?shù)慕y(tǒng)計學處理，對估計值的不確定度進行評定。前面識別的各分量中，總不精密度所致的不確定度為A類，為平均值的一倍標準差，即UA=■■=■S■ （公式2） （其中■=■，S■=■）。■是與測量次數(shù)n、置信概率P有關的量，可從專門的數(shù)據(jù)表中查得。在P=0.95時，■的部分數(shù)據(jù)可從表1查得：

1.2.4.2評定B類不確定度（UB） 利用相關信息對估計值的不確定度進行評定。

1.2.5合成標準不確定度（UC） 評定各不確定度分量后，各分量以方差的形式合成。合成不確定度為合成方差的正平方根。在本研究中，各分量互不相關，且為相對數(shù)，計算公式應為： UC=■。

1.2.6 計算擴展不確定度（U） 擴展不確定度等于合成不確定度與包含因子（κ） 的乘積，根據(jù)臨床檢驗專業(yè)的需要，一般取κ = 1.96，置信概率P為0.95。所以U = 1.96 × UC 。

2 結果

2.1 A類不確定度評定 見表2。

2.2 B類不確定度評定

2.2.1制造商提供的定標液LDH濃度的擴展不確定度為6.5，按正態(tài)分布，置信概率為0.95，K取1. 96，則標準品的相對標準不確定度為Urel（Ccal）=6.5/1.96 =3.32。

2.2.2標準品復溶時由刻度吸管容積誤差引入的不確定度：5mL刻度吸管校正時的容量不確定度為0.005mL，按矩形分布，其標準不確定度為：U1=0.005/■=2.887×10-3mL。相對標準不確定度為Urel（V1）= 2.887×10-3/3=0.10%。

2.2.3溫度變化引入的相對標準不確定度Urel（V2）：假設實驗溫度為（25±2）℃，水在25℃時的溶脹系數(shù)為2.57×10-4，按矩形分布，則Urel（V2）=5×2.57×10-4/■= 0.07%。

B類不確定度分量：UB=■=3.32

2.3計算合成不確定度及拓展不確定度 當LDH濃度為水平1時：合成不確定度 UC= ■=3.49

拓展不確定度 U=k×UC=6.84。當LDH濃度為水平2時：合成不確定度 UC=■=3.37，拓展不確定度 U=k×UC=6.61。

3 討論

臨床檢驗是一個受多因素制約，也是實驗室內(nèi)部不可控因素較多的實踐活動。關于檢測系統(tǒng)的偏倚問題，引用本室參加衛(wèi)生廳臨床檢驗中心的室間質評回報結果進行評定。在分析過程中，涉及到多個步驟的不確定度分量，一般可分為兩類。其中A類不確定度是用統(tǒng)計學方法評定的不確定度，本實驗中即樣品或標液吸光度測定引入的不確定度，包括儀器的加樣、加試劑、攪拌、水浴溫度、光學檢測、儀器修約等諸多因素。B類不確定度是用非統(tǒng)計學方法評定的不確定度，其主要來源于以下幾個方面：①制造商根據(jù)標準參考物質并通過參考方法所測得的定標液中LDH濃度的不確定度；②定標液復溶時引入的不確定度；③試驗溫度變化引入的不確定度。

本實驗按照《測量不確定度評估和報告的通用要求》的要求通過常規(guī)方法對人血清LDH不確定度進行評定，深入了解臨床實驗室不確定度評定的方法、評定程序及注意事項，只能反映本實驗室對人血清乳酸脫氫酶測定的不確定度。對連續(xù)監(jiān)測法檢測血清中LDH整個測量過程的各種因素所引入的不確定度分別進行A類和B類評定，結果由儀器本身所引入測量不確定度（A類）小于或等于1.09，而由標準品濃度所引入的測量不確定度達3.37，故選購質量好的標準品是保證連續(xù)監(jiān)測法檢測血清中LDH結果準確性的關鍵。

根據(jù)筆者查閱相關文獻可知，醫(yī)學實驗室的測量不確定度與傳統(tǒng)用準確度表示的誤差相比，更能反映測量的水平，且對檢測結果的臨床應用有實際指導意義。

參考文獻：

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[2]Yao Feng-Mei， LIN Erda， Boken Vijendra ect. Uncertainties in assessing the effect of climate change on agriculture using model simulation and uncertainty processing methods[J].Chinese Science Bulletin，2011，56（8）：729-737.

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[4]Turner TT， Bang HJ， Lysiak JL， et al.The molecular pathol-ogy of experimental testicular torsion suggests adjuncttherapy to surgical repair [J].J Urol，2004，172（6）：2574-2578.

編輯/哈濤