公安干警脂溢性角化癥皮損MMP—1的表達(dá)及干預(yù)

摘要：目的 比較公安干警脂溢性角化癥（Seborrheic keratosis，SK）患者的長時(shí)間接受紫外線照射曝光部位的皮損、非曝光部位皮損以及正常皮膚MMP-1的表達(dá)，探討SK的發(fā)病與皮膚光老化之間的關(guān)系。 方法 ①選取曝光部位的SK皮損50例，非曝光部位皮損50例，正常皮膚30例。采用免疫組化Elivison法來檢測曝光部位、非曝光部位皮損以及正常皮膚MMP-1的表達(dá)情況；②選取SK皮損90例，分為三組，分別為外用遮光劑二氧化鈦霜組，外用安慰劑組和未用藥組，用藥后3個(gè)月比較三組皮損MMP-1表達(dá)有無差異。結(jié)果 ①曝光部位SK皮損MMP-1的表達(dá)陽性率為60.00%，正常對(duì)照組陽性率為（30.00%），二者有顯著性差異，非曝光部位SK皮損MMP-1的表達(dá)陽性率為42.00%，與正常無顯著性差異；②3個(gè)月后，二氧化鈦霜組、安慰劑組、未用藥組SK皮損MMP1的表達(dá)陽性率分別為36.67%、56.67%、60.00%。外用二氧化鈦霜組MMP1的表達(dá)陽性率明顯減低（P<0.05）。結(jié)論 MMP-1在曝光部位的SK中呈現(xiàn)高表達(dá)。長期紫外線照射導(dǎo)致的皮膚光老化可能是曝光部位SK發(fā)生的一個(gè)誘發(fā)因素。

關(guān)鍵詞：SK；MMP-1；皮膚光老化

脂溢性角化癥（Seborrheic keratosis，SK），是表皮的良性腫瘤。在老年人高發(fā)，其病因尚未完全闡明，有研究認(rèn)為可能與遺傳因素，年齡、HPV感染等多種因素有關(guān)[1]。其中，紫外線照射在SK發(fā)生中的作用近年來日益受到學(xué)者們的重視[2]?；|(zhì)金屬蛋白酶MMP是一類鋅離子依賴的蛋白酶，在細(xì)胞外基質(zhì)的降解和重塑中起著重要的作用。同時(shí)參與了血管生成、炎癥反應(yīng)、腫瘤形成等多種生理及病理過程。其中MMP-1又稱間質(zhì)膠原酶，與皮膚光老化有關(guān)[3]。本研究采用免疫組化Elivison法來檢測SK患者曝光部位皮損、非曝光部位皮損以及正常皮膚MMP-1的表達(dá)，以期對(duì)SK的發(fā)病與皮膚光老化的關(guān)系做出一定的探討。

1 資料與方法

1.1一般資料 實(shí)驗(yàn)一：所有患者均來自2011年～2014年來我院門診就診的公安干警，選取均為皮損典型、臨床和病理診斷明確的SK患者作為研究對(duì)象，觀察組由從事交通協(xié)勤等戶外工作5年以上的公安人員中選取，對(duì)照組由從事非戶外性工作的公安人員中選取，所有患者均為男性，皮膚外科門診手術(shù)切除或病理室環(huán)鉆取材，石蠟包埋組織塊。觀察組選取曝光部位（面部，手背，前臂等處）的SK皮損50例，患者年齡29～57歲，平均（48.59±6.86）歲。非曝光部位（腹、背、臀部等處）的SK皮損50例，患者年齡26～58歲，平均（48.61±6.25）歲。對(duì)照組選取非曝光部位正常皮膚30例，年齡32～60歲，平均（48.70±6.61）歲。

實(shí)驗(yàn)二：選取曝光部位（面部，手背，前臂等處）發(fā)生的SK共90例，全部患者均為男性，年齡30～58歲，平均（47.71±6.78）歲。隨機(jī)分為三組，每組30例，觀察組、對(duì)照組、安慰劑組樣本在性別、年齡方面具有可比性（P>0.05）。

1.2主要試劑 ①兔抗人MMP-1多克隆抗體（購自武漢博士德生物工程有限公司，產(chǎn)品編號(hào)：BA0568）；②增強(qiáng)型二步法免疫組化檢測試劑盒（購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，通用性kit，產(chǎn)品編號(hào)：PV-6000）。

1.3藥物 ①二氧化鈦霜：由天津市公安醫(yī)院制劑室提供。主要成分組成：每100g二氧化鈦霜含二氧化鈦5g，基質(zhì)成分：單硬脂酸甘油酯，液體石蠟，硬脂酸，羊毛脂，白凡士林，三乙醇胺，羥苯乙酯。批準(zhǔn)文號(hào)：津藥制字H2007129。SPF值：9；②安慰劑采用市售凡士林霜。

1.4方法

1.4.1標(biāo)本制備及免疫組化染色 所有標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，4μm厚度連續(xù)切片，進(jìn)行免疫組化染色。

1.4.2免疫組化染色 采用增強(qiáng)型二步法（Elivison法）進(jìn)行檢測，按試劑盒說明書操作：常規(guī)石蠟切片于多聚賴氨酸處理的防脫片上，67℃烤片2h；切片放入二甲苯中浸泡2次，10min/次；梯度乙醇水化；微波抗原修復(fù)；滴加一抗，4℃孵育過夜；PBS沖洗3次，每張切片滴加1滴酶二抗聚合物， 常溫孵育30min；PBS沖洗3次，DAB顯色；自來水沖洗5min；蘇木素復(fù)染，水洗；1%鹽酸乙醇分色2s；梯度乙醇脫水；二甲苯透明，中性樹膠封片，觀察結(jié)果，顯微鏡拍照。

1.4.3用藥方法 三組皮損，分別為外用二氧化鈦霜組；安慰劑組和未用藥組。在同一患者的相同部位分別外用二氧化鈦霜和凡士林，用藥3個(gè)月后取材，免疫組化檢測。

1.5結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 以表皮細(xì)胞胞漿和真皮淺中層細(xì)胞胞漿和出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性結(jié)果。隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野（×400），計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞中陽性細(xì)胞數(shù)，先按染色強(qiáng)度打分：無色0分，淺黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；再按陽性細(xì)胞所占百分比打分：陽性細(xì)胞<5%為0分，5%～25%為1分，25%～50%為2分，50%～75%為3分，>75%為4分。將染色程度和陽性細(xì)胞百分比的乘積進(jìn)行評(píng)分：0-4分為陰性（-），大于4分為陽性（+）。

1.6主要分析軟件及統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 主要分析軟件采用北航圖象中心病理圖文管理系統(tǒng)4.10版。統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

正常對(duì)照組皮膚MMP-1表達(dá)陽性率為30.00%（9/30），曝光部位SK皮損MMP-1的表達(dá)陽性率為60.00%（30/50），經(jīng)χ2檢驗(yàn)二者有顯著性差異（P<0.05）；非曝光部位SK皮損MMP-1的表達(dá)陽性率為42.00%（21/50），與正常對(duì)照組無顯著性差異（P>0.05）。見表1。外用二氧化鈦霜和安慰劑3個(gè)月后，二氧化鈦霜組、安慰劑組、未用藥組皮損MMP1的表達(dá)陽性率分別為36.67%（11/30）、56.67%（17/30）、60.00%（18/30）。外用二氧化鈦霜組MMP1的表達(dá)陽性率明顯減低（P<0.05）。安慰劑組與未用藥組MMP1的表達(dá)陽性率無顯著性差異（P>0.05）。見表2。

3 討論

SK是發(fā)生于角質(zhì)形成細(xì)胞的一種腫瘤，與遺傳因素有關(guān)，發(fā)病機(jī)制尚不明確，近年有學(xué)者研究認(rèn)為，日光紫外線的照射在SK的發(fā)生中起到重要的作用。Yeatman的研究發(fā)現(xiàn)日光暴露區(qū)域比非暴露區(qū)域更容易發(fā)生SK[4]。

基質(zhì)金屬蛋白酶MMP是一類鋅離子依賴的蛋白酶家族[5]。MMP分為四個(gè)亞組，即膠原酶、明膠酶、基質(zhì)溶解素、膜型基質(zhì)金屬蛋白酶，可降解各類膠原、蛋白多糖及基質(zhì)蛋白?；|(zhì)金屬蛋白酶的作用可被MMP抑制劑所抑制，其中MMP-1的作用以降解Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型膠原為主[3]，與皮膚光老化有關(guān)。皮膚光老化的基本特征之一是細(xì)胞外基質(zhì)持續(xù)或反復(fù)的蛋白酶解。紫外線的照射可以誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞和真皮的成纖維細(xì)胞分泌的基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-1、 MMP-3產(chǎn)生過量[6]，降解皮膚細(xì)胞外基質(zhì)成分，基質(zhì)金屬蛋白酶的活化在皮膚紫外線光老化中起到至關(guān)重要的作用[7]。MMP-1在正常皮膚組織中呈現(xiàn)低表達(dá)[7]。Tsukifuji等的研究發(fā)現(xiàn)，紫外線損傷的皮膚中有MMP-1、 MMP-7的沉積[8]。紫外線作用于皮膚后，表皮和真皮細(xì)胞的生長因子受體和細(xì)胞因子受體被活化，進(jìn)一步激活絲裂原，從而活化蛋白激酶途徑，其效應(yīng)為激活轉(zhuǎn)錄因子激活蛋白，刺激基質(zhì)金屬蛋白酶基因的轉(zhuǎn)錄[9]。

我們的研究結(jié)果顯示，皮膚光老化的特征性指標(biāo)-MMP-1在曝光部位SK皮損呈現(xiàn)高表達(dá)，提示紫外線照射導(dǎo)致的皮膚光老化在SK的發(fā)病中起到了一定的作用，皮膚光老化可能是曝光部位SK發(fā)生的一個(gè)誘發(fā)因素。而非曝光部位SK皮損MMP-1的表達(dá)與正常對(duì)照組無顯著性差異，提示非曝光部位SK的發(fā)病可能還存在其它多種復(fù)雜的因素。

二氧化鈦屬物理性遮光劑，是無機(jī)防曬劑中使用最多的成分。對(duì)紫外線可以起到反射、散射及部分吸收的作用。二氧化鈦對(duì)中長波紫外線都具有防護(hù)作用[10]，我們的研究顯示防曬劑二氧化鈦可以減少曝光部位SK皮損MMP-1的表達(dá)，提示防曬劑對(duì)曝光部位發(fā)生SK具有一定的保護(hù)作用。因此，長期接受紫外線照射的室外工作者如果能加強(qiáng)對(duì)紫外線的遮光防護(hù)可能對(duì)預(yù)防SK的發(fā)生有裨益。

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編輯/哈濤