MMP—9在子宮腺肌病中的表達及臨床意義

摘要：目的 通過檢測子宮腺肌病組織芯片中基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）的表達，探討其在子宮腺肌病中發(fā)生、發(fā)展的作用。方法 取組織芯片技術(shù)及免疫組化方法檢測42例子宮腺肌病患者異位內(nèi)膜組織（異位內(nèi)膜組）和15例因子宮肌瘤行子宮切除術(shù)患者非瘤區(qū)對照子宮內(nèi)膜組織（對照內(nèi)膜組）MMP-9的陽性細胞的平均光密度值（OD值），及兩組子宮內(nèi)膜組織的增殖期和分泌期的OD值，并進行比較。結(jié)果 MMP-9在異位內(nèi)膜組中OD值明顯高于對照內(nèi)膜組（P<0.05）；異位內(nèi)膜組中OD值，增殖期低于分泌期比較，（P<0.05）。對照內(nèi)膜組OD值，增殖期和分泌期比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。結(jié)論 在子宮腺肌病異位內(nèi)膜中MMP-9高表達，提示其可能與ECM的降解、基底層內(nèi)膜侵入子宮肌層的發(fā)生密切相關(guān)。

關(guān)鍵詞：子宮腺肌病，基質(zhì)金屬蛋白酶-9，組織芯片

子宮腺肌?。╝denomyosis，AM）是子宮內(nèi)膜間質(zhì)和腺體侵及子宮肌層內(nèi)形成多灶性、并伴隨周圍平滑肌增生的一種良性病變。但其表現(xiàn)為局部種植和轉(zhuǎn)移，具有惡性腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移特點。有研究表明細胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）的降解是眾多惡性腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟。而大量資料表明基質(zhì)金屬蛋白酶家族（matrix metalloproteinase MMPs）在細胞外基質(zhì)的降解中起關(guān)鍵作用。本文旨在探討其在AM發(fā)生和發(fā)展中的可能作用， 為研究AM的發(fā)病機制和防治提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機選取2010年10月～2011年10月瀘州醫(yī)學院附屬醫(yī)院婦科，42例年齡35～52歲（43.52士9.65）的子宮腺肌病患者的病灶組織（異位內(nèi)膜組）為研究對象，22例增殖期，20例分泌期。隨機選取15例年齡33～51歲（41.40士5.99）的子宮肌瘤患者，非瘤區(qū)正常子宮內(nèi)膜組織為對照（對照內(nèi)膜組），8例增殖期，7例分泌期。術(shù)前6個月內(nèi)均無激素及對抗子宮腺肌病藥物治療史。

1.2 試劑 兔抗人MMP-9單克隆抗體（Santa Cruz）；生物素標記二抗試劑盒（北京中杉）；免疫組化試劑盒（北京中杉）。

1.3 方法

1.3.1 制作組織芯片 所有組織蠟塊相應的HE染色切片均由兩位病理醫(yī)師閱片核實診斷后，符合入選條件的蠟塊用于制作組織芯片，并標記病灶部位。制作3×2×1cm受體蠟塊。對組織蠟塊標記的病灶部位，用陣列儀取材針進行鉆取，再將鉆取的組織芯片轉(zhuǎn)移至受體蠟塊鉆好的孔中。加溫熔蠟制成含有30個點排布的組織芯片蠟塊。

1.3.2 結(jié)果判定 MMP-9細胞陽性表達為：以細胞核內(nèi)或漿內(nèi)有棕黃色顆粒者視為陽性染色細胞。鏡下于無非特異性著色的不同區(qū)域隨機抽取5個高倍鏡視野采集圖像，采用Image Pro6.0專業(yè)圖像分析系統(tǒng)測量陽性細胞平均光密度值（OD）值。

1.4 統(tǒng)計學處理 實驗結(jié)果以（x±s）表示，應用SPSS17.0統(tǒng)計分析軟件，統(tǒng)計方法采用t檢驗和單因素方差分析，P<0.05為差別有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

MMP-9在異位內(nèi)膜組中OD值明顯高于對照內(nèi)膜組（P<0.05）；異位內(nèi)膜組中OD值，增殖期低于分泌期比較，（P<0.05）。對照內(nèi)膜組OD值，增殖期和分泌期比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表1。

3討論

子宮腺肌病是子宮內(nèi)膜腺體和間質(zhì)細胞向肌層良性浸潤并在其中彌散性生長的疾病，屬于良性疾病，卻具有惡性腫瘤的一些特征，如無限制生長、新生血管生成和凋亡細胞數(shù)量減少等，最顯著的特征是具有細胞侵襲能力，能局部或遠程轉(zhuǎn)移、浸潤其他組織[1]。近年來研究發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜異位癥與細胞外基質(zhì)ECM與基底膜（basement menbrane，BM）的降解密切相關(guān)。MMPs通過降解細胞基底膜，使組織屏障消失，異位內(nèi)膜組織向間質(zhì)浸潤，子宮腺肌病可能存在同樣的情況[2]。有研究表明MMP-9在多種惡性腫瘤的發(fā)展浸潤中起重要作用，且MMP-9的表達與腫瘤的臨床分期、病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預后等相關(guān)[3]。Bruner[4]等在動物實驗中發(fā)現(xiàn)，通過抑制MMPs的分泌，可以阻止異位病灶的形成。本實驗結(jié)果顯示MMP-9主要表達于子宮內(nèi)膜組織的腺上皮細胞胞漿，少量表達于間質(zhì)細胞。MMP-9在異位內(nèi)膜，對照子宮內(nèi)膜組織中均有表達，但異位內(nèi)膜組MMP-9的表達明顯高于對照子宮內(nèi)膜組（P﹤0.05）。說明異位內(nèi)膜中MMP-9的過度表達，使異位內(nèi)膜具有較強的蛋白水解能力，降解異位內(nèi)膜周圍的基底膜及其他ECM成分，使組織屏障消失，病灶向間質(zhì)浸潤及病灶周圍結(jié)締組織。本實驗結(jié)果提示異位內(nèi)膜組織中MMP-9表達增高，可能是子宮內(nèi)膜侵襲性增強的原因。本實驗MMP-9在不同內(nèi)膜中的表達情況與既往實驗結(jié)果一致，子宮腺肌病異位內(nèi)膜組MMP-9的過度表達，且失去周期性變化，MMP-9的過度表達及異常表達與子宮腺肌病與惡性腫瘤具有相似的生物學行為的原因之一，即子宮內(nèi)膜細胞\"異位\"到肌層并向肌層侵潤生長的原因之一[5，6]。本實驗結(jié)果顯示異位內(nèi)膜組織中MMP-9的表達增高，可能是子宮內(nèi)膜侵襲性增強的原因。

組織芯片技術(shù)（TMA）是20世紀末發(fā)展起來的一種新技術(shù)[7]。組織芯片為醫(yī)學病理學提供了一種高通量、大樣本以及快速的分子水平的分析工具。本課題應用組織芯片技術(shù)免疫組化的方法檢測子宮腺肌病異位內(nèi)膜及正常子宮內(nèi)膜中的MMP-9表達水平及意義進行研究。為闡明子宮腺肌病的發(fā)病機制提供新的理論依據(jù)。也為臨床診斷和防治提供新思路。

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