轉(zhuǎn)錄因子YY1在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)研究

摘要：目的 探討轉(zhuǎn)錄因子YY1表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌（non-small-cell lung carcinoma，NSCLC ）發(fā)生和發(fā)展的關(guān)系。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測45例非小細(xì)胞肺癌組織和相應(yīng)癌旁組織中轉(zhuǎn)錄因子YY1的表達(dá)。結(jié)果 轉(zhuǎn)錄因子YY1在非小細(xì)胞癌組織和相應(yīng)癌旁組織中陽性表達(dá)率分別為73.3%和31.1%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.001）；轉(zhuǎn)錄因子YY1表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌分化相關(guān)（P=0.000），與患者年齡、性別，腫瘤分型、分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)。結(jié)論 轉(zhuǎn)錄因子YY1與非小細(xì)胞肺癌發(fā)生和發(fā)展相關(guān)。

關(guān)鍵詞：YY1；非小細(xì)胞肺癌；免疫組化

肺癌是常見的惡性腫瘤，嚴(yán)重危害人類健康。80%的肺癌在組織類型上屬于非小細(xì)胞肺癌[1]。轉(zhuǎn)錄因子YY1是多功能蛋白，參與調(diào)控正常的生理過程，如發(fā)育、分化、復(fù)制和細(xì)胞增殖。越來越多的研究表明，轉(zhuǎn)錄因子YYl通過與不同的蛋白輔助因子相互作用調(diào)控腫瘤相關(guān)基因，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。本研究采用免疫組化的方法檢測非小細(xì)胞肺癌以及相應(yīng)癌旁組織中轉(zhuǎn)錄因子YY1的表達(dá)，以探討轉(zhuǎn)錄因子YY1與非小細(xì)胞肺癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 肺癌組織取自2010年8月～2013年8月，徐州市腫瘤醫(yī)院手術(shù)標(biāo)本45例，鱗癌18例，腺癌27例，其中高分化5例，中分化29例，低分化例11例； 淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移者有23例， 有轉(zhuǎn)移者有22例。臨床分期，依據(jù)1997年國際抗癌聯(lián)盟（Union for International Cancer Control， UICC） TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，其中Ⅰ期20例，Ⅱ期10例，Ⅲ期15例。本組男25例，女20例， 其中≤70歲組22例，>70歲組23例。所有患者術(shù)前均未經(jīng)任何化療和抗腫瘤治療，經(jīng)臨床及病理學(xué)檢查確診為非小細(xì)胞肺癌non-small cell lung cancer （NSCLC）。同時取相應(yīng)癌旁組織（45例）設(shè)為對照，進(jìn)行配對研究。標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，制備切片。

1.2 試劑與方法 即用型鼠抗人YY1免疫組化單克隆抗體（sc-281）和即用型快速免疫組化MaxVi-sionTM檢測試劑盒（KIT-5001）購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。 實(shí)驗(yàn)步驟按照試劑提供的說明書進(jìn)行。PBS替代一抗作為陰性對照，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察結(jié)果和照相。

1.3 結(jié)果判斷 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：YY1蛋白表達(dá)于細(xì)胞核。按陽性細(xì)胞所占的百分比計分：在高倍鏡下取4個不同視野， 各計數(shù)200個細(xì)胞，計算陽性細(xì)胞的百分比，0分為陰性，1分為陽性細(xì)胞≤10%，2分為11%～50%，3分為51%～75%，4分為>75%；按染色強(qiáng)度計分：0分為無色，1分為淺黃色，2分棕黃色，3分為棕褐色。兩項(xiàng)積分乘積≥3分為陽性，否則為陰性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0軟件包對資料進(jìn)行x2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 非小細(xì)胞肺癌組織中YY1的表達(dá) YY1的陽性產(chǎn)物主要定位于細(xì)胞核，胞核被染成棕黃色。 非小細(xì)胞肺癌組織和相應(yīng)的癌旁組織中YY1蛋白陽性表達(dá)率分別為73.3%（33/45）和31.1%（14/45），有顯著性差異（P=0.001），表1和圖1～2。

2.2 非小細(xì)胞肺癌中YY1的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 非小細(xì)胞肺癌組織中YY1的表達(dá)與年齡、性別、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分型和 TNM分期無關(guān)。低分化和中分化的非小細(xì)胞肺癌組織中YY1的陽性表達(dá)率分別為100% （11/11）和72.4%（21/29），高分化的非小細(xì)胞肺癌中YY1無表達(dá)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.000）。見表2。

3討論

YY1又稱δ、NF-E1、UCRBP或CF1是鋅指類轉(zhuǎn)錄因子GLI-Krüppel家族中的一員，也是多梳蛋白家族（polycomb protein group，PcG）中的一員。目前國內(nèi)外學(xué)者對YY1 研究廣泛，除了細(xì)胞增殖、分化、凋亡方面的研究外，還包括B細(xì)胞發(fā)育、基因印跡、X染色體失活、病毒感染等[2-3]。YY1在大部分腫瘤組織和細(xì)胞中表達(dá)升高的現(xiàn)象，表明其可能參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。Seligson等用免疫組織化學(xué)方法檢測發(fā)現(xiàn)，YYl蛋白在前列腺癌和正常組織之間的表達(dá)存在差異，前列腺癌及前列腺上皮內(nèi)瘤變組織中YYl的表達(dá)明顯高于正常或良性前列腺肥大組織，轉(zhuǎn)移灶內(nèi)YYl的表達(dá)明顯高于原發(fā)灶，表明YY蛋白隨著臨床分期及病理分級的升高而升高。de Nigris等通過免疫組化方法發(fā)現(xiàn)骨肉瘤組織較正常對照YY1 高表達(dá)，且進(jìn)一步研究表明原發(fā)骨肉瘤YY1 高表達(dá)的病人與骨肉瘤的轉(zhuǎn)移和預(yù)后質(zhì)量差相關(guān)。本研究中，45例NSCLC中陽性表達(dá)率為73.3%， 顯著高于癌旁組織的31.1%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）， 缺失表達(dá)率在癌組織和相應(yīng)癌旁組織分別為26.7%和68.9%。 進(jìn)一步提示YY1的過表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌相關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)YY1表達(dá)與非小細(xì)胞癌的分化程度相關(guān)。有研究報道YYl在急性髓細(xì)胞樣白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤中也呈高表達(dá)，且高度惡性淋巴瘤（如彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤）組織內(nèi)YYl表達(dá)水平明顯高于低度惡性淋巴瘤和正常B細(xì)胞，YYl高表達(dá)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長并增強(qiáng)其侵襲性，YYl的表達(dá)水平可作為分析高度惡性淋巴瘤有效的主要臨床和生物學(xué)指標(biāo)，生存分析顯示YYl表達(dá)增高與預(yù)后不良有關(guān)。YYl在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移中起重要作用。本實(shí)驗(yàn)45例NSCLC中高、中分化病理類型陽性表達(dá)率分別為0%和72.4%，顯著低于低分化病理分型陽性表達(dá)（100%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），本研究發(fā)現(xiàn)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的非小細(xì)胞癌中YY1陽性率高于未有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者；TNM分期Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組中YY1陽性率逐漸升高，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，這可能和樣本數(shù)量較小有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)鱗癌中YY1陽性表達(dá)率為72.2%，腺癌中YY1陽性表達(dá)率為66.7%，但差異無顯著意義，對YYl進(jìn)行更深一步的研究會給人NSCLC基礎(chǔ)研究和臨床工作提供更加有力的幫助。

參考文獻(xiàn)：

[1]Yang L，Parkin DM，F(xiàn)erlay J，et al.Estimates of cancer incidence in China for 2000 and projections for 2005[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2005，14（1）：243-50.

[2] Pan X，Jones M，Jiang J，et al.Increased expression of PcG protein YY1 negatively regulates B cell development while allowing accumulation of myeloid cells and LT-HSC cells[J].PLoS One，2012，7（1）：e30656.

[3] Thiaville MM，Kim J .Oncogenic potential of yin yang 1 mediated through control of imprinted genes[J].Crit Rev Oncog，2011，16（3-4）：199-209.

編輯/王海靜