艾滋病病毒檢測(cè)方法研究

艾滋病病毒會(huì)對(duì)人體免疫系統(tǒng)造成較為嚴(yán)重的侵襲，使得人體出現(xiàn)較多的疾病。而艾滋病預(yù)防控制工作的重點(diǎn)就在于正確地診斷出HIV感染[1]， 只有確定了傳染源，才能夠?qū)Π滩鞑ミM(jìn)行更好的控制。而只有通過(guò)檢測(cè)HIV的病毒分離培養(yǎng)、核酸、抗原、特異性抗體等之后，才能夠確診是否感染HIV [2]，從目前來(lái)看，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)HIV的主要方法依舊是血清學(xué)實(shí)驗(yàn)。本文就艾滋病病毒檢測(cè)方法研究進(jìn)展進(jìn)行探討。

1 HIV 抗體檢測(cè)

確證試驗(yàn)和初篩試驗(yàn)是目前較為常用的HIV 抗體檢測(cè)技術(shù)，確證試驗(yàn)包括放射免疫沉淀實(shí)驗(yàn)、條帶免疫實(shí)驗(yàn)、免疫印跡試驗(yàn)；篩查試驗(yàn)包括明膠顆粒凝集試驗(yàn)、膠體金免疫滲濾實(shí)驗(yàn)、免疫熒光、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。

2 HIV核酸測(cè)定

目前臨床上檢測(cè)HIV最為敏感的方法就是HIV核酸測(cè)定，多用于對(duì)病毒載量（HIV RNA 拷貝數(shù)）進(jìn)行測(cè)定。人若感染HIV 后，血漿中病毒載量會(huì)與病情發(fā)展速度呈正相關(guān)關(guān)系。在艾滋病發(fā)病晚期和艾滋病初期感染時(shí)，HIV 病毒載量通常都是處于最高水平，但是也能夠在慢性潛伏期檢出。連接酶酶促鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、核酸序列依賴性擴(kuò)增、分支DNA 信號(hào)放大系統(tǒng)、逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)是四種測(cè)定方法。雖然病毒核酸檢測(cè)方法的靈敏度較高，但是由于HIV 基因存在著較大的多樣性，會(huì)讓檢測(cè)的敏感性存在著較大的限制。此外，在檢測(cè)病毒核酸時(shí)，通常對(duì)于操作人員要求較高，操作復(fù)雜，檢測(cè)試劑昂貴，檢測(cè)儀器昂貴，既不能快速檢測(cè)大量患者，又不能推廣應(yīng)用于基層醫(yī)院[3]。

3 HIV的分離培養(yǎng)

HIV的分離培養(yǎng)通常都采用將受檢者標(biāo)本（精液、血漿、全血、PBMC及其他體液）與靶細(xì)胞（PBMC）共培養(yǎng)的方法，樣本可采用精液、血漿、全血、PBMC及其他體液，但是新鮮抗凝全血是其首選樣本。HIV分離培養(yǎng)結(jié)果為陰性，則不能排除HIV感染；但是只要結(jié)果為陽(yáng)性，那么就說(shuō)明其為HIV感染。HIV的分離培養(yǎng)可輔助診斷HIV感染，也可檢測(cè)HIV表型耐藥性，還可以用于研究HIV生物學(xué)特征[4]。

4 濾紙干血片法（DBSS）

近年來(lái)，傳統(tǒng)方式的樣本儲(chǔ)存、樣本運(yùn)輸、樣本采集等方面的困難都被DBSS HIV-1 抗體檢測(cè)方法所彌補(bǔ)。DBSS HIV-1 抗體檢測(cè)方法能夠定量檢測(cè)HIV-1DNA RNA，生物穩(wěn)定性較佳，實(shí)驗(yàn)的特異性和敏感性也不會(huì)隨著而降低[5]。

5 免疫功能檢查

通 常都采用非流式細(xì)胞儀測(cè)定法和流式細(xì)胞儀測(cè)定法來(lái)計(jì)數(shù)CD8+T淋巴細(xì)胞和CD4+淋巴細(xì)胞，檢測(cè)設(shè)備多采用流式細(xì)胞儀，HIV感染者免疫狀況可以通過(guò)CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)， 以此來(lái)作為臨床治療和分級(jí)指標(biāo)的輔助條件； 可判斷是否需要預(yù)防性治療及預(yù)后狀況，也能夠?qū)IV感染者的感染風(fēng)險(xiǎn)和疾病進(jìn)展進(jìn)行有效地評(píng)估。據(jù)研究，CD4T淋巴細(xì)胞/CD8T淋細(xì)胞越低，那么則證明免疫缺陷越嚴(yán)重。

6 抗原檢測(cè)

p24 抗原檢測(cè)技術(shù)是目前臨場(chǎng)上較為常見(jiàn)的HIV 抗原檢測(cè)。 p24抗原在病毒的成熟過(guò)程和包裝過(guò)程中往往都會(huì)起到較為重要的作用，是HIV的主要結(jié)構(gòu)蛋白。缺失 p24，會(huì)造成無(wú)法正常組裝病毒的情況，p24 抗原是較好地檢測(cè)機(jī)體是否感染 HIV的病原學(xué)標(biāo)志。 HIV在感染后2～3w就能夠被有效地檢測(cè)出來(lái)，抗原高峰期則是在感染后1～2 月。 隨著時(shí)間的推移，HIV 感染者就會(huì)進(jìn)入到無(wú)癥狀期，p24 抗原濃度會(huì)出現(xiàn)大幅度地降低，直至難以測(cè)出。當(dāng)血清中HIV 抗原再度增長(zhǎng)，那么就說(shuō)明HIV感染者已瀕臨艾滋病發(fā)作期，免疫系統(tǒng)被破壞，病毒大量繁殖。HIVp24在艾滋病的基礎(chǔ)研究、新疫苗的評(píng)價(jià)、藥物療效評(píng)價(jià)、鑒定新生兒感染、早期診斷HIV 感染、判斷預(yù)后、監(jiān)測(cè)病程進(jìn)展等方面具有極為重要的作用。

HIVp24 抗原檢測(cè)主要包括IFA（免疫熒光分析技術(shù)）、RIA（放射免疫分析）、ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）三種技術(shù)，其中，對(duì)HIV 感染檢測(cè)最為敏感的常規(guī)方法就是測(cè)定 p24 抗原技術(shù)，以?shī)A心法 ELISA 為基礎(chǔ)。

7 HIV耐藥性檢測(cè)

HIV 耐藥變異株隨著HAART（高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒聯(lián)合療法）的廣泛開(kāi)展而不斷出現(xiàn)，還很容易出現(xiàn)藥物交叉耐藥的現(xiàn)象。從目前來(lái)看，表型檢測(cè)法和基因型檢測(cè)法是檢測(cè)各種HIV-1耐藥性的主要方法。

8 HIV-1新近感染檢測(cè)

總之，特異度高、靈敏度高的分析方法能夠便于早期診斷HIV，有利于對(duì)疾病進(jìn)程進(jìn)行監(jiān)測(cè)和預(yù)測(cè)，避免漏檢，縮短檢測(cè)的窗口期。隨著醫(yī)療技術(shù)的快速發(fā)展，HIV 的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)正朝著自動(dòng)化、準(zhǔn)確、敏感、快速、簡(jiǎn)便的方向不斷發(fā)展。

參考文獻(xiàn)：

[1] 姜擁軍，王亞男，張子寧，等. 艾滋病病毒感染者/艾滋病病人臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法研究[J]. 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志. 2013，26（03）：102-104.

[2] 趙立慶，雷素萍，李連學(xué)，等. ELISA法檢測(cè)尿液中HIV-1抗體的研究分析[J]. 中國(guó)艾滋病性病. 2013，33（05）：130-136.

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