五味子降酶膠囊中五味子醇甲含量測(cè)定

摘要：目的 建立五味子降酶膠囊中五味子醇甲的含量測(cè)定方法。方法 采用高效液相色譜法測(cè)定，Agilent C18 （4.6mm×250mm，5μm）色譜柱，以甲醇-水（65∶35）為流動(dòng)相；流速1.0 ml·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm；柱溫為30℃。結(jié)果 五味子醇甲在0.0664～0.332 mg·ml-1（r=0.9999）范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好；平均回收率99.34%，RSD=1.97% （n=6）。結(jié)論 本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可用于五味子降酶膠囊的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：五味子降酶膠囊；五味子醇甲；含量測(cè)定

五味子降酶膠囊由五味子、板藍(lán)根、敗醬草等四味中藥組成，是經(jīng)太和縣中醫(yī)院臨床實(shí)踐研制的純中藥制劑。具有保肝降酶的功效，用于急慢性肝炎、肝硬化、ALT升高者[1]。方中藥材五味子起主要藥效作用，以五味子醇甲作為指標(biāo)成分，采用HPLC法測(cè)定五味子降酶膠囊中五味子醇甲含量，有效控制制劑質(zhì)量。

1 儀器與試劑

Agilent1220高效液相色譜儀；電熱恒溫干燥箱（型號(hào)101-1A，上海申光儀器儀表有限公司）；十萬(wàn)分之一電子天平（型號(hào)AUW120D，島津），超聲清洗機(jī)（型號(hào) JK-500DB，合肥金尼克機(jī)械制造公司）。五味子降酶膠囊（自制，批號(hào)：121201、121202、121203）；五味子醇甲對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110857-201010）；甲醇為色譜純；水為二次純化水；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件[2-4] 色譜柱為Agilent C18 （4.6mm×250mm，5μm）；以甲醇-水（65：35）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm；理論板數(shù)按五味子醇甲峰計(jì)算應(yīng)不低于2000；進(jìn)樣量為20μl。

2.2溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液的制備 取五味子醇甲對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含五味子醇甲0.3mg的溶液，即得。

2.2.2供試品溶液的制備[5] 取本品10粒，傾出內(nèi)容物，取粉末約1.5g，精密稱定，置25ml具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20ml，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率20kHz）20min，取出，放冷，再稱定重量，補(bǔ)足失重，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3陰性制劑溶液的制備 按全方比例稱取缺五味子的其他藥材，按制劑工

藝制備成粉末，取約1.5g，精密稱定，其余步驟同供試品溶液的制備方法。精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液各20μl，進(jìn)樣測(cè)定，在此色譜條件下，五味子醇甲分離良好，陰性組分無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

2.3線性關(guān)系考察 分別吸取濃度為0.332 mg·ml-1的對(duì)照品溶液2，4，6，8，10ml于10ml的容量瓶中，用甲醇定溶即得濃度梯度，用上述色譜條件對(duì)各濃度進(jìn)行測(cè)定。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，以對(duì)照品的峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=6×108X-701706，r=0.999 4。表明在0.0664～0.332 mg·ml-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4精密度考察 精密吸取對(duì)照品溶液20μl，在上述色譜條件下連續(xù)測(cè)定6次，用對(duì)照品的峰面積計(jì)算精密度，其RSD為1.85%（n=6）。

2.5重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取五味子降酶膠囊樣品（批號(hào)：121201）粉末6份，每份約1.5g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法提取供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定。分別求出其含量，計(jì)算得平均含量為1.965 mg·g-1，RSD為1.60%（n=6）。

2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 用取樣品（批號(hào)：121201）一份，按供試品溶液的制備方法提取供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12h進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜峰面積，計(jì)算其RSD為1.41%，表明供試品溶液在12h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7加樣回收率實(shí)驗(yàn)[6-8] 精密稱取已知含量的樣品（批號(hào)：121201）粉末6份，每份約0.75g，精密加入五味子醇甲對(duì)照品適量，按供試品的制備方法進(jìn)行制備。用上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，見(jiàn)表1。

2.8樣品含量測(cè)定 取3個(gè)批號(hào)的樣品，按\"2.2.2\"項(xiàng)下方法制成供試品，分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，見(jiàn)表2。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)分別考察了超聲、回流、冷浸3種提取方法。結(jié)果表明，超聲提取效率高于其它兩種方法；同時(shí)，與回流法相比減少了能源損耗，故本采用超聲法。同時(shí)又對(duì)提取溶劑、提取時(shí)間和次數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，最終確定了提取方法。該方法提取完全，簡(jiǎn)單易行，樣品前處理簡(jiǎn)便省時(shí)。有關(guān)HPLC法測(cè)定五味子醇甲含量的文獻(xiàn)中，流動(dòng)相條件多以甲醇-水為洗脫系統(tǒng)。

本文研究表明，以甲醇-水系統(tǒng)為流動(dòng)相測(cè)定五味子醇甲，可使五味子醇甲的分離度、理論塔板數(shù)、峰的對(duì)稱性及出峰時(shí)間達(dá)到滿意的結(jié)果。

參考文獻(xiàn)：

[1]楊放，袁軍，付平.五味子的研究概況[J].華西藥學(xué)雜志，2003，18（6）：326-327.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部，2010：227.

[3]吳曉鳳，陳虹，趙志茹.HPLC法測(cè)定生脈飲中五味子醇甲的含量[J].中國(guó)中藥雜志，2003，28（1）：39-40.

[4]廖彩霞，戴德雄，諸葛周.HPLC法測(cè)定參芪五味子分散片中五味子醇甲[J].中草藥，2012，43（3）：505-506.

[5]李維衛(wèi)，胡鳳祖，等.參鹿扶正膠囊中五味子醇甲含量測(cè)定的方法研究[J].第十五次全國(guó)學(xué)術(shù)色譜報(bào)告文集[M].533-534.

[6]歐金梅，羅捷華.HPLC法測(cè)定生脈飲中五味子醇甲含量測(cè)定[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，25（1）：33-34.

[7]劉穎.高效液相色譜法測(cè)定保肝丸中五味子醇甲的含量研究[J].河南醫(yī)學(xué)研究，2013，22（5）：787-788.

[8]韓寧寧，鄭芳.高效液相色譜法測(cè)定益氣固本糖漿中五味子醇甲的含量[J].河北中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，15（3）：36-38.

編輯/哈濤