COX—2在子宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)及意義

摘要：目的 探討環(huán)氧化酶-2（COX-2）在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法 采用免疫組織化學(xué)MaxvisionTM法檢測25例宮頸癌、15例宮頸上皮內(nèi)瘤病變，其中5例低度病變（CINⅠ、CINⅡ）、10例高度病變（CINⅢ及原位癌）和5例正常宮頸組織中COX-2蛋白的表達(dá)，分析其與臨床病理特征之間的關(guān)系。結(jié)果 ①宮頸不同病變組間COX-2蛋白的表達(dá)差異有顯著意義（P<0.01）；②COX-2陽性表達(dá)率在不同年齡、病理分級(jí)、腫瘤大小的宮頸癌患者之間，無明顯相關(guān)性（P>0.05）； COX-2蛋白的陽性表達(dá)和宮頸癌臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（相關(guān)系數(shù)分別是r=0.572，P=0.003；r=0.585，P=0.002）。以上結(jié)果提示COX-2與宮頸癌的早期發(fā)生和整個(gè)過程進(jìn)展均有著密不可分的聯(lián)系。結(jié)論 COX-2 在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用，可作為反映宮頸癌生物學(xué)行為的指標(biāo)。

關(guān)鍵詞：宮頸癌；宮頸上皮內(nèi)瘤變；COX-2；免疫組織化學(xué)

環(huán)氧化酶-2（Cyclooxygenase-2， COX-2）是花生四烯酸轉(zhuǎn)變成前列腺素的關(guān)鍵酶。近年研究表明COX-2在宮頸癌中表達(dá)增強(qiáng)，與腫瘤的發(fā)生、浸潤和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[1]。COX-2在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)可以抑制腫瘤細(xì)胞凋亡； 本研究通過免疫組化方法檢測COX-2蛋白在宮頸上皮內(nèi)瘤樣變（CIN）及宮頸癌組織中的表達(dá)，以探討COX-2在宮頸癌組織的表達(dá)規(guī)律及臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇云南省昆明醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院婦瘤科2011年7月～2012年7月手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的宮頸不同病變的病例。根據(jù)宮頸上皮病變程度分為低度病變、高度病變及宮頸浸潤癌3組。宮頸上皮低度病變（ CINⅠ；CINⅡ）患者5例、高度上皮病變（ CINⅢ及原位癌）10例、宮頸癌患者25例存檔石蠟標(biāo)本，另取5例正常宮頸組織為對(duì)照，患者年齡25～65歲，平均年齡44.84歲，≤45歲12例，>45歲13例，25例宮頸癌，年齡34～65歲，平均46.52歲。病理分級(jí)：G1-G2：3例，G2：3例，G2-G3：10例，G3：9例。根據(jù)2003年FIGO臨床分期標(biāo)準(zhǔn)： Ⅰa-Ⅱa期4例，Ⅱb11例，Ⅲ-Ⅳ期10例。腫瘤直徑≤4cm：20例，腫瘤直徑>4cm：5例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者15例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者10例。入選病例均為首次診療病例，具有完整的病史、臨床及病理資料；所有病例宮頸局部均未接受放射、藥物及物理治療。

1.2試劑和免疫組化染色 采用即用型快捷免疫組化MaxvisionTM法進(jìn)行檢測。所有切片均在同一實(shí)驗(yàn)室、同一時(shí)間、由同一技術(shù)人員使用同一批號(hào)的免疫組化試劑完成免疫組化染色。PBS液代替第一抗體作陰性對(duì)照。第一抗體為工作液（兔抗人COX-2單克隆抗體（即用型），（福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司）；以預(yù)實(shí)驗(yàn)宮頸癌的染色陽性切片作陽性對(duì)照， PBS代替一抗作空白對(duì)照。以EDTA液進(jìn)行抗原微波修復(fù)，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，二甲苯透明，中性樹膠封固。

1.3免疫染色的評(píng)估免疫組化染色結(jié)果采用半定量評(píng)分系統(tǒng)，由兩位病理學(xué)家采取盲法獨(dú)立評(píng)定。染色強(qiáng)度分為0～3級(jí)（0級(jí)：陰性； 1級(jí)：弱陽性； 2級(jí)：中等強(qiáng)度陽性； 3級(jí)：強(qiáng)陽性）。根據(jù)組織切片中陽性染色區(qū)域占腫瘤組織區(qū)域的比例，染色的范圍標(biāo)記評(píng)分為0（0）、1（1%～25%）、2（26%～50%）、3（51%～75%）、4（76%～100%）。兩個(gè)等級(jí)評(píng)分之和作為最后的染色積分，其積分≥2被認(rèn)為該組織切片免疫組織化學(xué)染色陽性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析， COX-2蛋白各組間的陽性表達(dá)率用χ2檢驗(yàn)，COX-2蛋白表達(dá)與宮頸癌臨床病理學(xué)的相關(guān)性采用相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 COX-2在不同組別宮頸組織中的表達(dá) COX-2蛋白在25例宮頸癌中有1例弱陽性表達(dá)（+），占4.00%（1/25）；24例均為中強(qiáng)陽性表達(dá)（++-+++）占96.00%（24/25），10例宮頸高度上皮病變（CINⅢ及原位癌）中有1例為陰性表達(dá)，占10.00%（1/10）；5例為弱陽性表達(dá)（+），占50%（5/10）；4例為中強(qiáng)陽性表達(dá)（++-+++）占40.00%（4/10）；5例宮頸上皮低度病變（CINⅠ、CINⅡ）中有1例陰性表達(dá)，占20%（1/5）；4例弱陽性表達(dá)（+），占80%（4/5）；5例正常宮頸組織中僅1例弱陽性表達(dá)（+），占20%（1/5）；其余4例陰性表達(dá)，占80%（4/5）；宮頸不同病變組間COX-2蛋白的表達(dá)差異有顯著意義（P<0.01）。見表1。

2.2 COX-2蛋白表達(dá)與宮頸癌患者臨床病理特征的關(guān)系 由表2可見，COX-2陽性表達(dá)率在不同年齡、病理分級(jí)、腫瘤直徑的宮頸癌患者間，無相關(guān)性（r和P值分別是0.352，0.018；-0.053，0.803；0.208，0.319）。但隨著宮頸癌臨床分期的進(jìn)展，COX-2蛋白的陽性表達(dá)呈上升趨勢，其表達(dá)率及表達(dá)強(qiáng)度均增高，在Ⅰa-Ⅱa期、Ⅱb期、Ⅲ-Ⅳ期宮頸癌中強(qiáng)陽性率（+++）分別是25%（1/4）、72.72% （8/11）、100.00%（9/9），它們之間呈正相關(guān)（相關(guān)系數(shù)r=0.572，P=0.003）。這表明宮頸癌的臨床分期越晚COX-2蛋白的表達(dá)就越高。另外，COX-2蛋白的表達(dá)還與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有密切的關(guān)系，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者其COX-2蛋白的強(qiáng)陽性（+++）率分別為93.33%（14/15），40.00%（4/10）。 它們之間亦呈正相關(guān)（相關(guān)系數(shù)r=0.0.585，P=0.002），故有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者其COX-2蛋白的表達(dá)率及表達(dá)強(qiáng)度就越高。見圖1、圖2。

3 討論

3.1 COX-2與腫瘤生物學(xué)特性的關(guān)系 COX-2對(duì)細(xì)胞周期、腫瘤血管形成、細(xì)胞凋亡及腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移有著重要影響。近年來流行病學(xué)、動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)等多方面的研究表明，COX-2在多種腫瘤中普遍存在過度表達(dá)的現(xiàn)象，Masferrer等[2]在150多種各類腫瘤中檢測到COX-2的表達(dá)，而且在大多數(shù)腫瘤新生血管中可以清楚地檢測到COX-2的存在，這表明COX-2有可能在腫瘤誘導(dǎo)的新生血管和隨之而來的轉(zhuǎn)移性疾病中起作用。這些現(xiàn)象提示COX-2在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展及轉(zhuǎn)移中有重要的生理功能，其表達(dá)的增加可能是腫瘤發(fā)生的一個(gè)早期事件，檢測COX-2的水平可能有助于腫瘤的早期診斷，抑制COX-2的表達(dá)可能有助于腫瘤的治療。

3.2 COX-2與宮頸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系 宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變（CIN）是一組與宮頸浸潤癌密切相關(guān)的癌前病變的統(tǒng)稱，根據(jù)不典型增生的程度CIN可以分為CINI、CINⅡ和CINⅢ。CIN級(jí)別越高，則病變持續(xù)存在或發(fā)展為浸潤癌的可能性就越大。Farley[3]等應(yīng)用免疫組化方法研究了62例CIN行宮頸環(huán)型電切除術(shù)（loop electrosuigical excisional Procedure，LEEP）切除的標(biāo)本，并進(jìn)行了隨訪，發(fā)現(xiàn)COX-2的表達(dá)隨著CIN級(jí)別的增高，表達(dá)率增加。本研究結(jié)果與Farley一致，隨著CIN級(jí)別的增高，COX-2的表達(dá)逐漸增加，雖差異無顯著性，這可能與研究中樣本量小、實(shí)驗(yàn)方法及靈敏度有關(guān)。提示COX-2可能是宮頸癌發(fā)生的一個(gè)早期事件。彭蕓花等[4]從mRNA和蛋白水平研究了COX-2在不同宮頸組織的表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果顯示，COX-2在宮頸正常組織無表達(dá)，在炎性組織和CIN組織表達(dá)，而在癌組織表達(dá)明顯增加；由此可以推測COX-2蛋白在宮頸炎、CIN及宮頸癌之間存在潛在的分子生物學(xué)聯(lián)系：COX-2不僅參與炎癥發(fā)生，而且促進(jìn)宮頸新生血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長，促進(jìn)癌的發(fā)生與發(fā)展。

在本實(shí)驗(yàn)中，我們觀察到COX-2蛋白陽性表達(dá)率總的趨勢是以正常子宮頸、CIN、子宮頸癌依次增高。這與彭蕓花等的研究相同，宮頸不同病變組間COX-2蛋白的表達(dá)差異有顯著意義（P<0.01）。Murata H[5]等研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤組織COX-2的過度表達(dá)與腫瘤侵襲淋巴管和發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，COX-2過度表達(dá)的患者預(yù)后較差。

本研究中COX-2蛋白表達(dá)與患者年齡、腫瘤大小、病理組織學(xué)分級(jí)無相關(guān)性（P>0.05），但它在宮頸癌的不同臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間表達(dá)有明顯相關(guān)性，且均呈正相關(guān)（相關(guān)系數(shù)r分別是0.572，0.585，P<0.01）。提示宮頸癌的臨床分期越晚，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，COX-2的表達(dá)就越強(qiáng)。本研究顯示結(jié)果與Murata H的一致，這些現(xiàn)象提示COX-2在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展及轉(zhuǎn)移中有重要的生理功能，其表達(dá)的增加可能是腫瘤發(fā)生的一個(gè)早期事件，檢測COX-2的水平亦可能有助于宮頸癌的早期診斷及判斷其預(yù)后。抑制COX-2的表達(dá)可能有助于腫瘤的治療。

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編輯/哈濤