清熱解毒片中黃芩苷的含量測(cè)定

摘要：目的 采用高效液相色譜法測(cè)定清熱解毒片中黃芩苷的含量。方法 用十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑，用甲醇-0.2%磷酸溶液（48：52）為流動(dòng)相，流速1.0 ml·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm。結(jié)果 該試驗(yàn)的結(jié)果為清熱解毒片中黃芩苷進(jìn)樣量在 0.13～0.95μg范圍中線性關(guān)系良好（該區(qū)間中r=0.9996），精密度試驗(yàn)RSD為1.11%，重復(fù)性試驗(yàn)RSD為1.16%，平均回收率為100.13%，RSD為1.30%（n=6 ）。結(jié)論 本方法操作比較簡(jiǎn)便，精密度好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，適用于清熱解毒片中黃芩含量的測(cè)定。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；黃芩苷；清熱解毒片

清熱解毒片收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第二十冊(cè)。該藥的功效主要為清熱解毒，臨床中流感，上感及各種發(fā)熱性質(zhì)的疾病首選該藥。這種藥物的主要成分是金銀花、生石膏、黃芩、龍膽、玄參、地黃、金銀花等12味中藥組成。原標(biāo)準(zhǔn)中未對(duì)黃芩進(jìn)行含量檢測(cè)，在本實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用的較為先進(jìn)的高效液相色譜法，通過該種方法測(cè)定黃芩在該成藥中的含量，該法由于儀器可靠，方法和操作較為簡(jiǎn)單，因此結(jié)果相對(duì)的準(zhǔn)確可靠。

1 資料與方法

1.1一般資料 LC2010A型高效液相色譜儀，黃芩苷對(duì)照品，自中國(guó)食品藥品檢定研究院購(gòu)得（含量測(cè)定用，批號(hào)：110715-201117）；樣品來源于陜西盤龍制藥集團(tuán)有限公司，水為重蒸餾水，甲醇在色譜中是色譜純，乙醇、磷酸在色譜中是分析純。

1.2方法

1.2.1色譜的條件 該試驗(yàn)的填充劑是用的十八烷基硅烷鍵合硅膠，試驗(yàn)中的色譜柱是VP-ODSC18柱（4.6mm×250mm，5μm）；用甲醇-0.2%的磷酸溶液（48︰52）做流動(dòng)相；該實(shí)驗(yàn)中設(shè)置的流速為10ml/min；檢測(cè)的波長(zhǎng)為280nm；溫度檢測(cè)設(shè)置為35℃；理論塔板數(shù)以黃芩苷計(jì)算，不能低于3000。

1.2.2制備對(duì)照品溶液 用精密的方法稱取60℃下已經(jīng)減壓干燥時(shí)間為4h的黃芩苷對(duì)照品適量，加入甲醇溶解該制劑，制成的溶液為每1ml含60μg的黃芩苷做對(duì)照品，即能夠得到。

1.2.3制備供試品溶液 從該成品中隨機(jī)取10片，除去包裹著的糖衣，通過精密工具稱重，然后研磨成粉末狀。取出大約0.5g左右，放入帶有塞子的錐形瓶里，加入甲醇（濃度為60%）25ml，稱得重量之后，通過超聲振蕩20min（功率250W，頻率35kHz），冷卻之后，再測(cè)取其重量，減少的重量用甲醇補(bǔ)足（濃度為60%），然后搖勻，后濾過，測(cè)出濾出的液體5ml，放入25ml的量瓶中，用甲醇（濃度為60%）補(bǔ)至刻度，充分混勻，通過大小為0.22μm微孔濾膜，獲取濾出液，即可制得。

1.2.4制備陰性對(duì)照液 按照該藥物中的處方比例和制備工藝制備缺黃芩的陰性樣品，按2.3項(xiàng)下制備陰性供試品溶液。

1.2.5線性關(guān)系考察 分別用精密儀器量出對(duì)照品溶液（120μg·ml-1）1，2，4，6，8ml，分別放入容量為10ml的容量瓶里，用甲醇（濃度為60%）補(bǔ)足到刻度，充分振蕩均勻，吸取各分組的稀釋液各10μl，按照供試品項(xiàng)下試驗(yàn)方法，加入到液相色譜儀中。首先測(cè)量峰面積，然后用該面積和對(duì)照品的進(jìn)樣量X（μg），用最少二乘法進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：Y=217.1X-146.1 r=0.9996。線性范圍為0.12μg～0.96μg。

1.2.6精密度試驗(yàn) 2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液，在同一天里連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣10μl/次，該峰面積的積分值的RSD為1.11% （n=6）。

1.2.7穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批清熱解毒片供試品溶液，分別于供試品溶液制備后第0，3，6，9，12，15，24h進(jìn)樣測(cè)定黃芩苷的峰面積，結(jié)果黃芩苷峰面積積分值的RSD為0.95%，該數(shù)據(jù)顯示，在24h內(nèi)供試品溶液的性質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定。

1.2.8重復(fù)性試驗(yàn) 取同批清熱解毒片（批號(hào)為20120701）內(nèi)容物，按照供試品溶液制備方法平行制備6份供試品溶液，測(cè)定黃芩苷的峰面積，測(cè)得平均含量為6.17mg·片-1，RSD為1.16%。

1.2.9加樣回收率試驗(yàn) 稱取供試品6份（各約0.40g，已知含量），稱定后，加入已知濃度的黃芩苷對(duì)照品溶液5ml，按照制備供試品溶液的方法法進(jìn)行提取，測(cè)定含量，計(jì)算該組的回收率，見表1。

1.2.10樣品的測(cè)定 分別取不同批號(hào)的清熱解毒片3批，按照制備供試品溶液的方法項(xiàng)下方法試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測(cè)量并記錄峰面積，試驗(yàn)結(jié)束后測(cè)得每片黃芩苷的含量分別為6.43mg、6.06mg、6.19mg。

2 討論

2.1對(duì)流動(dòng)相磷酸的含量進(jìn)行了比較，結(jié)果以磷酸的濃度為0.2%為宜，測(cè)得黃芩苷的分離度和峰形均較好。

2.2本試驗(yàn)考察了不同溶媒的（甲醇、70%甲醇、60%甲醇、乙醇），溶媒的用量（25、40、60 ml），提取方式（超聲法、回流法、冷浸法），提取時(shí)間（20、30、50 min）對(duì)黃芩苷含量的影響，結(jié)果表明以60%甲醇為提取溶媒，超聲20min為提取含量最高。

2.3本方法的陰性對(duì)照品在不會(huì)產(chǎn)生干擾峰（在黃芩苷對(duì)照品的吸收峰處），并且方法相對(duì)的簡(jiǎn)單易行、可以重復(fù)進(jìn)行，所有試驗(yàn)步驟均必須在精密儀器測(cè)量下進(jìn)行，試驗(yàn)的精密度良好，由此得出的黃芩苷的含量可以當(dāng)做清熱解毒片中的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，由此試驗(yàn)的出的結(jié)果提示，需要在以后的標(biāo)準(zhǔn)修訂中，適當(dāng)增加黃芩苷的含量測(cè)定。

本試驗(yàn)對(duì)黃芩苷、連翹苷對(duì)照品進(jìn)行了200～400nm紫外光譜掃描，結(jié)果表明，黃芩苷在278nm處有較強(qiáng)的吸收，在315nm處有次強(qiáng)吸收；連翹苷在228nm處有較強(qiáng)吸收，在278nm處有次強(qiáng)吸收，考慮到黃芩苷的含量較高，故在278nm處測(cè)定含量。

參考文獻(xiàn)：

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[2]吳永芹，馮凱，周慧，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定葛根芩連片中葛根素和黃芩苷的含量[J].中國(guó)藥事，2012，26（03）：282-284.

編輯/哈濤