山楂含片中熊果酸的含量測(cè)定

摘要：目的 建立山楂片中熊果酸的含量測(cè)定方法。 方法 采用高效液相色譜法測(cè)定熊果酸。色譜柱：phenomenex Kinete x2.6u XB-C18 100A柱（100 mm×4.6 mm ，5μm），流動(dòng)相：以乙腈-0.1%磷酸水洗脫，流速1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm，柱溫40℃。結(jié)果 陰性對(duì)照無(wú)干擾，熊果酸在13.5～53.9ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9999），平均回收率為98.3%，RSD=0.9（n=9）， 該法操作簡(jiǎn)便，方法穩(wěn)定，專屬性強(qiáng)，可作為三箭草和堂山楂含片的質(zhì)量控制方法。

關(guān)鍵詞：山楂含片； HPLC；熊果酸；含量測(cè)定

三箭草和堂山楂含片由山楂、白砂糖制成。山楂中富含熊果酸等成分，具有疏肝理氣，活血化瘀，助消化等功效，主要用于治療脂肪肝和肝纖維化等癥狀。本研究采用 HPLC法對(duì)三箭草和堂山楂含片中指標(biāo)成分熊果酸進(jìn)行含量測(cè)定。經(jīng)查閱文獻(xiàn)，尚未有對(duì)其成分熊果酸做含量測(cè)定的報(bào)道。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Aglient 1260生物惰性四元高效液相色譜儀 ，德國(guó)梅特勒-托利多XA205DU電子分析天平。

1.2樣品 山楂含片：廣西梧州三箭制藥有限公司保健品廠出品（批號(hào)20120816，20121217，20120320）；陰性樣品：按處方缺山楂按工藝制備。熊果酸對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所（批號(hào)：110742-200517，供含量測(cè)定用）；其他化學(xué)試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱phenomenex Kinete x2.6u XB-C18 100A柱（100 mm×4.6 mm ，5μm）；乙腈-0.1%磷酸水溶液（68：32）為流動(dòng)相；流速為1.0ml.min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取熊果酸對(duì)照品1.078mg置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制成每1ml含107.8μg的溶液。

2.3 供試品溶液的制備 精密量取本品粉末3g，置于50ml錐形瓶中，精密加入20ml甲醇，稱定重量，超聲20min，放置室溫后用甲醇補(bǔ)足重量，搖勻，用微孔濾膜（0.22μm）濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4 測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品和供試品溶液各 4μl，注入高效液相色譜儀，測(cè)定峰面積積分值。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。

2.5 專屬性考察 取陰性樣品， 按2.3制備陰性供試品溶液，按2.1 色譜條件測(cè)定。結(jié)果表明在該色譜條件下，陰性對(duì)照無(wú)干擾，見圖1。

2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取熊果酸對(duì)照品10.78mg，置10ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋到刻度（濃度為： 1.078mg.mL-1）作為對(duì)照品儲(chǔ)備液，精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液，1ml置10ml容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋到刻度（濃度為：0.1078mg.mL-1），搖勻，用微孔濾膜（0.22μm）濾過(guò)，取續(xù)濾液，按2.1色譜條件分別進(jìn)樣分別吸取上述對(duì)照品溶液1、5、8、10、20μl，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y），熊果酸對(duì)照品進(jìn)樣量（mg）為橫坐標(biāo)（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程： Y=1941.82X +0.185（r=0.9999）結(jié)果表明：熊果酸在13.5～53.9ng范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度實(shí)驗(yàn) 取同一份供試品溶液，按2.1色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積積分值，RSD=0.3%。表明儀器精密度良好。

2. 8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一份樣品溶液，放置0、2、4、6、8、10h， 按2. 1色譜條件，分別測(cè)定峰面積積分值，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算RSD為0.8%。結(jié)果表明待測(cè)物在10小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密稱取同一批的樣品（批號(hào)：20120816），按2.3 供試品溶液的制備方法試驗(yàn)，平行操作5份，按2.1色譜條件近樣測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，結(jié)果平均含量是5.3mg.g-1，RSD=0.6%。 結(jié)果表明本方法重復(fù)性良好。

2.10 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取已測(cè)定含量的山楂含片（批號(hào)：20120816），（熊果酸含量為5.3mg.g-1）1.0g，平行取樣9份。分別上述濃度為1.078mg.mL-1的熊果酸對(duì)照品溶液0.5、0.8、1ml，每個(gè)加樣量平行做3份。按2.3 供試品溶液的制備方法制備供試品溶液、按2.1色譜條件測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算回收率，平均回收率為98.3%（n=9），RSD=0.9%。

2.11 樣品含量測(cè)定 按2.3 供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，2.1的色譜條件， 2.4 測(cè)定法測(cè)定了本品2批樣品中的熊果酸含量，見表1。

3討論

3.1 提取方法的比較 比較甲醇加熱回流與超聲提取的對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，結(jié)果熊果酸含量基本一致；甲醇超聲20、30、50min的比較，發(fā)現(xiàn)超聲時(shí)間熊果酸含量一致，說(shuō)明甲醇超聲20min乙腈能把山楂含片中熊果酸完全提取出來(lái)，出于對(duì)簡(jiǎn)便易行的考慮，決定采用超聲20min；故采用甲醇作為提取液，超聲20min提取熊果酸。

3.2 流動(dòng)相的選擇 比較甲醇-0.1%磷酸（68：32），乙腈-0.1%磷酸（68：32）的效果，結(jié)果有機(jī)相選用乙腈時(shí)，峰型分離度較好。

3.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 參考《中國(guó)藥典》2010年版一部木瓜中熊果酸的檢測(cè)[1]，選擇210nm作為熊果酸的檢測(cè)波長(zhǎng)。

參考文獻(xiàn)：

[1]中國(guó)藥典：一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010（一部）：57.編輯/許言