天然藥物分析方法的研究進(jìn)展

摘要 綜述了天然藥物有效成分或指標(biāo)性成分的分析方法，重點(diǎn)論述了各種分析方法的特點(diǎn)、應(yīng)用、研究進(jìn)展，并且討論了UPLC及色譜聯(lián)用分析法等新技術(shù)在天然藥物含量測(cè)定中的應(yīng)用，以期望為天然藥物的研究提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞 天然藥物；色譜；含量測(cè)定

中圖分類號(hào)S188文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）29-10059-04

基金項(xiàng)目國(guó)家自然科學(xué)基金（81260512）；云南省大理學(xué)院應(yīng)用開發(fā)研究基金（Kyyy201102）。

作者簡(jiǎn)介謝苗（1989-），女，陜西西安人，碩士研究生，研究方向：天然藥物分析。*通訊作者，教授，碩士生導(dǎo)師，從事天然藥物防齲方面的研究。

我國(guó)傳統(tǒng)藥學(xué)是在人類與疾病長(zhǎng)期斗爭(zhēng)的實(shí)踐中發(fā)展起來(lái)的。在世界回歸自然食療和綠色革命興起的今天，天然藥物越來(lái)越受到關(guān)注。天然藥物包括植物藥、動(dòng)物藥、礦物藥及微生物用藥，而植物藥的研究最成熟，應(yīng)用也最廣泛。該研究主要討論植物藥。天然藥物之所以能防治疾病，必然因它的物質(zhì)基礎(chǔ)，即生物活性物質(zhì)或有效成分。天然活性物質(zhì)往往具有結(jié)構(gòu)新穎、活性高、副作用少的特點(diǎn)，可以作為制藥工業(yè)中新藥研究的活性先導(dǎo)化合物[1]。我國(guó)雖然是天然藥物種植大國(guó)，但并不是天然藥物研究強(qiáng)國(guó)，主要原因有2個(gè)：①天然藥物有效成分結(jié)構(gòu)復(fù)雜，并且影響其藥效的因素眾多；②產(chǎn)生藥效的物質(zhì)不明，如何以有效成分為指標(biāo)來(lái)監(jiān)控藥材質(zhì)量也是一大難題。筆者討論了現(xiàn)代先進(jìn)技術(shù)在天然藥物分析中的應(yīng)用，探索天然藥物有效成分的定性鑒別和含量測(cè)定方法，進(jìn)一步完善天然藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1氣相色譜法（GC）

采用氣相色譜法，分析含有揮發(fā)油及其他揮發(fā)性成分[2]的天然藥物。GC法已成為藥物含量測(cè)定和雜質(zhì)檢查、藥材揮發(fā)油分析、溶劑殘留分析、體內(nèi)藥物分析等的一種重要手段。GC法的優(yōu)點(diǎn)有：分離效能高，可以使一些分配系數(shù)很接近的難以分離的化合物得到很好地分離；高靈敏度，由于檢測(cè)器的靈敏度高，其檢測(cè)限可達(dá)10-11～10-13g；高選擇性，挑選適當(dāng)?shù)墓潭ㄏ?，可以分析同位素、?duì)映體[3]等理化性質(zhì)相似而生物活性不同的成分。

1.1 GC法在天然藥物中的應(yīng)用天然藥物的預(yù)處理是能否更好地應(yīng)用方法進(jìn)行分析的一個(gè)關(guān)鍵技術(shù)。纈草中的揮發(fā)油含有多種化學(xué)成分。昝俊峰等[4]利用頂空固相微萃取技術(shù)（HSSPME），經(jīng)過單因素考察試驗(yàn)得到纈草的最佳萃取條件。該萃取條件的纈草GC圖譜分離度較高。這樣的樣品處理使得GC法更加準(zhǔn)確。此外，減少有機(jī)溶劑使用，使得操作更加安全。游離的香豆素易隨水蒸氣揮發(fā)，將水蒸汽蒸餾提取的當(dāng)歸[5]經(jīng)有機(jī)萃取，再用GC法進(jìn)行組分分析和含量測(cè)定。肖會(huì)敏等[6]也先將椒目仁油中的不飽和脂肪酸衍生化（用氫氧化鉀甲醇溶液酯化），再采用GC法測(cè)定其油酸、亞油酸及α亞麻酸的含量。

天然藥物的質(zhì)量安全問題是限制其發(fā)展的重中之重。GC法也可以用于控制天然藥物的質(zhì)量。李得堂[7]在測(cè)定冰片和薄荷腦的含量時(shí)先超聲萃取制劑，再采用直接進(jìn)樣毛細(xì)管GC法，確定冰片1.178 3～5.891 5 mg/ml和薄荷腦0.509 9～2.549 5 mg/ml的線性范圍，計(jì)算出冰片和薄荷腦的含量相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為1.96%和2.49%。該方法為療筋涂膜劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)。逄楠楠等[8]在同時(shí)測(cè)定芫花中棕櫚酸和亞油酸的含量時(shí)采用毛細(xì)管GC法，先經(jīng)柱前衍生化（將棕櫚酸與亞油酸甲酯化），再用GC法測(cè)定其酯的含量，結(jié)果表明棕櫚酸甲酯和亞油酸甲酯線性濃度范圍分別為0.079～1.578 g/L和0.030～0.591 g/L，含量的平均值分別為2.795和1.306 mg/g，RSD分別為2.6%、1.9%。該方法快速、準(zhǔn)確，可作為芫花的質(zhì)量控制方法。

此外，GC法還可以用于藥材溶劑殘留分析和農(nóng)藥限量檢測(cè)，進(jìn)一步保證天然藥物的質(zhì)量。李志剛等[9] 在測(cè)定丹酚酸A中乙醇和乙酸乙酯殘留量時(shí)，采用GC法和FID檢測(cè)器，結(jié)果準(zhǔn)確測(cè)出乙醇、乙酸乙酯的平均殘留量分別為0.08%和0.04%，符合中國(guó)藥典2010 版對(duì)有機(jī)溶劑殘留量的要求，證明該方法適用于丹酚酸A 中有機(jī)溶劑殘留量的測(cè)定。在研究葉酸片中溶劑殘留量試驗(yàn)中，彭炳先等[10]測(cè)得葉酸片3批樣品中丙酮?dú)埩袅糠謩e為292.6、300.4、267.4 μg/g，而未檢測(cè)到甲醇、三氯甲烷和甲苯，表明葉酸片有機(jī)溶劑殘留量符合國(guó)家要求。中國(guó)藥典2010一部規(guī)定了有機(jī)氯類、有機(jī)磷類、擬除蟲菊酯類的測(cè)定方法。除另有規(guī)定外，均采用GC法測(cè)定有關(guān)農(nóng)藥殘留量。顧利紅等[11-12] 均采用彈性石英毛細(xì)管柱和電子捕獲檢測(cè)器（ECD ）進(jìn)行GC法測(cè)定有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量，前者以外標(biāo)法計(jì)算供試樣品中20種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量，后者先將樣品經(jīng)有機(jī)溶劑超聲提取、以濃硫酸磺化后，再用外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量均低于中國(guó)藥典2010年版一部的規(guī)定要求。因此，該方法可作為天然藥物中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法。

1.2 GCMS聯(lián)用技術(shù)在天然藥物中的應(yīng)用 GCMS聯(lián)用技術(shù)是指混合藥物經(jīng)GC分離成各個(gè)單一組分，再由接口進(jìn)入MS儀進(jìn)行分析測(cè)定。它集GC法的高速、高分離效能、高靈敏度和MS的高選擇性于一體。天然藥物分子在MS離子化過程中易裂解，生成碎片離子，經(jīng)檢測(cè)器分析檢測(cè)，得出的MS圖譜經(jīng)軟件包檢索核對(duì)，即可對(duì)組分進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。由于MS對(duì)分析樣品的純度要求較高，可認(rèn)為GC為MS分析提供色譜純化的樣品，而MS儀給出樣品化學(xué)結(jié)構(gòu)的數(shù)據(jù)信息。羅蘭等[13]利用GCMS技術(shù)分析毛大丁草的揮發(fā)油成分，先采用水蒸氣蒸餾法提取出其中的揮發(fā)油成分，再經(jīng)GCMS鑒定揮發(fā)油成分 ，從揮發(fā)油中鑒定了17個(gè)化合物，其中含量較高的成分為Neryl（s）2methylbutanoate（35.99%）、4羥基3甲基苯乙酮（ 8.74%）、棕櫚酸（7.48%）等。該試驗(yàn)利用GCMS法進(jìn)行指標(biāo)性成分的分析，并且運(yùn)用計(jì)算機(jī)自動(dòng)檢索核對(duì)鑒定藥材的主要成分。Liu等[14]在研究款冬花揮發(fā)性成分的試驗(yàn)中，使用水蒸氣蒸餾法提取款冬花藥材的揮發(fā)油成分，采取GC法進(jìn)行分離，采取面積歸一化法測(cè)定、計(jì)算各組分的相對(duì)含量，最后用MS檢測(cè)各組分化學(xué)結(jié)構(gòu)。該方法鑒定出65個(gè)化學(xué)成分，占總揮發(fā)油的80%以上，表明該方法不僅適用于檢測(cè)款冬花中揮發(fā)油成分，而且可以測(cè)定各組分的含量。Li等[15] 采用GCMS聯(lián)用技術(shù)，發(fā)現(xiàn)無(wú)花果樹葉中有121種揮發(fā)性成分，果實(shí)中有108種，并且確定樹葉中揮發(fā)油主要為補(bǔ)骨脂素、β大馬酮、芐醇和二十二烷酸，果實(shí)中主要為糠醛、5methyl2furaldehyde和苯乙醛，表明該方法可用于無(wú)花果揮發(fā)性成分的檢測(cè)。

2高效液相色譜法（HPLC）

HPLC法因其對(duì)混合組分具有強(qiáng)大的分離能力，是天然藥物及其制劑含量測(cè)定的首選方法，也是應(yīng)用最廣泛的方法。HPLC法的特點(diǎn)為：分離效率高，使用顆粒極細(xì)小、規(guī)則均勻的固定相，柱效高；選擇性高，可選擇不同極性的流動(dòng)相，來(lái)分離極性不同的組分；分析速度快，采用高壓輸液泵輸送流動(dòng)相，流速快，一般試樣的分析幾分鐘就可完成；高靈敏度檢測(cè)器的使用提高了靈敏度，紫外檢測(cè)器（UVD）的最小檢測(cè)限（LOD）可達(dá)10-9g，而熒光檢測(cè)器（FD）的LOD可達(dá)10-12g；操作自動(dòng)化，儀器有自動(dòng)進(jìn)樣裝置、柱溫控制器和數(shù)據(jù)處理裝置；應(yīng)用范圍更廣，由于無(wú)需考慮藥物的揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性，幾乎可以分析一切天然藥物。常見的HPLC法有根據(jù)流動(dòng)相極性強(qiáng)弱區(qū)分的反相（RP）HPLC法[16] 和正相（NP）HPLC法[17]以及離子抑制色譜法（ISC）和反相離子對(duì)色譜法（RPIPC）。

2.1 HPLC法在天然藥物中的應(yīng)用天然藥物及其制劑因其主要含有弱極性成分而多選用RPHPLC法。固定相常為非極性鍵合相，如十八烷基硅烷（C18）；流動(dòng)相則是以水作為基礎(chǔ)溶劑，再加入一定量的有機(jī)溶劑與水混溶制成的混合溶劑，有機(jī)溶劑可降低流動(dòng)相的極性，因此固定相極性比流動(dòng)相弱。RPHPLC法是其中應(yīng)用最廣泛的的色譜法，適合分析含有非極性至中等極性組分的天然藥物。在格列風(fēng)內(nèi)酯含量測(cè)定的首次報(bào)道中，Niu等[18]采用迪馬Kromasil ODS色譜柱，以甲醇-水（含0.01%三氟醋酸，0.05%四氫呋喃） 為流動(dòng)相，測(cè)得9個(gè)樣本的平均回收率為98.77%，RSD為2.77%，證明該方法可以用于格列風(fēng)內(nèi)酯含量的測(cè)定，并且為天葵子藥材質(zhì)量控制提供依據(jù)。

2.1.1 色譜條件的選擇對(duì)天然藥物分析的影響。含有黃酮類、酚酸類成分的天然藥物可選擇乙腈-水-酸的混合系統(tǒng)作為流動(dòng)相。張麗等[19]研究青天葵藥材中7種黃酮的含量時(shí)，就以0.4%磷酸-乙腈為流動(dòng)相，在不同溫度下測(cè)定且計(jì)算出供試品7種組分的色譜峰面積RSD分別為1.04%、0.89%、2.61%、1.08%、0.65%、1.68%和2.56%，結(jié)果表明該方法可以作為黃酮的含量測(cè)定方法，而且總黃酮的量可以作為青天葵藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)；當(dāng)含有弱酸性成分時(shí)，可在流動(dòng)相中加入適量醋酸等酸性試劑作為改性劑，以降低酸性藥物的分解。Yu等[20-21]在測(cè)定阿魏酸松柏酯和有機(jī)酸時(shí)均在流動(dòng)相加入適量的酸性試劑，發(fā)現(xiàn)在流動(dòng)相中加入弱酸可以使RPHPLC法更加準(zhǔn)確、快速地進(jìn)行天然藥物分析，并且為其質(zhì)量控制提供依據(jù)；而酸性組分較強(qiáng)的天然藥物，也可以使用IPC法，常用的反離子試劑有四丁基溴化銨等。馬廉舉等[22]采用Diamonsil C18柱和UVD測(cè)定莽草酸含量時(shí)，在流動(dòng)相中加入離子對(duì)試劑四丁基溴化銨，測(cè)出莽草酸對(duì)照品在5～300 μg/ml濃度范圍內(nèi)與峰面積明顯呈線性關(guān)系，莽草酸樣品的平均回收率為97.51%，說明該方法可以準(zhǔn)確地測(cè)定馬尾松松針中莽草酸含量；當(dāng)分析堿性較強(qiáng)的組分時(shí)，如測(cè)定小檗堿，多采用RPIPC法，在酸性流動(dòng)相中加入烷基硫酸鹽等作為反離子試劑。鄢丹等[23]采用RPIPC法測(cè)定左金丸中7個(gè)生物堿的含量，并且在流動(dòng)相中加入十二烷基硫酸鈉（離子對(duì)試劑），使用Diamonsil C18柱和DAD檢測(cè)器，測(cè)得鹽酸小檗堿等7個(gè)生物堿的LOD分別為0.38、0.11、0.14、0.32、0.29、0.35、0.47 μg/ml，證明該方法可用于左金丸的質(zhì)量監(jiān)控。

2.1.2 供試樣品的制備對(duì)天然藥物分析的影響。天然藥物及其制劑多為復(fù)雜的混合物。在HPLC分析前，都需要采用一定的萃取技術(shù)或柱色譜分離方法來(lái)純化樣品。在測(cè)定赤小豆中兒茶素7OBD吡喃葡萄糖苷的含量時(shí)，穆合塔爾·卡德爾哈孜等[24]先比較了超聲提取和加熱回流萃取2種方法，結(jié)果表明二者提取效率相當(dāng)，故選擇操作簡(jiǎn)單且安全性高的超聲提取。當(dāng)有多種試驗(yàn)設(shè)計(jì)且試驗(yàn)效果相近時(shí)，藥物分析工作者更傾向于簡(jiǎn)單快速、安全無(wú)污染的方法。陳魁霞等[25] 在測(cè)定金銀花中10個(gè)酚酸類含量時(shí)也先將樣品經(jīng)濃度50%乙醇超聲30 min提取，再進(jìn)行HPLC分析。

HPLC常用的檢測(cè)器為選擇性檢測(cè)器（如UV），只能檢測(cè)具有某些結(jié)構(gòu)的藥物分子。衍生化法在擴(kuò)大HPLC應(yīng)用范圍、提高檢測(cè)靈敏度、改善分離效能等方面是一種簡(jiǎn)單、有效的途徑。翟旭峰等[26] 采用RPHPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地靈芝中6種氨基酸的含量時(shí)，用異硫氰酸苯酯將無(wú)紫外吸收的氨基酸轉(zhuǎn)化為有紫外吸收的衍生物，便于用UV檢測(cè)器（波長(zhǎng)254 nm）檢測(cè)，結(jié)果表明該方法適用于氨基酸的含量分析，并且為氨基酸的質(zhì)量監(jiān)控提供依據(jù)。

2.1.3 檢測(cè)方法的選擇對(duì)天然藥物分析的影響。 由于天然藥物成分復(fù)雜，使用內(nèi)標(biāo)法會(huì)增加分離難度，雜質(zhì)成分易干擾內(nèi)標(biāo)峰，在進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)多采用外標(biāo)法。當(dāng)藥物具有紫外吸收時(shí)，檢測(cè)時(shí)選擇UV檢測(cè)器；若藥物分子能產(chǎn)生熒光，則可以使用FD檢測(cè)器。但是，還有大部分藥物沒有紫外吸收，就需要使用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）。它是一種通用型質(zhì)量檢測(cè)器。在測(cè)定黃芪甲苷含量時(shí)，由于它無(wú)紫外吸收，陳海明[27]在試驗(yàn)中采用ELSD檢測(cè)器。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法可以使待測(cè)化合物達(dá)到很好地分離。試驗(yàn)數(shù)據(jù)也說明，ELSD可以用于黃芪甲苷的檢測(cè)。如果樣品的成分比較簡(jiǎn)單，且雜質(zhì)峰不干擾內(nèi)標(biāo)峰時(shí)，那么就可以使用內(nèi)標(biāo)峰測(cè)定含量。陳千良等[28]測(cè)定知母中菝葜皂苷元含量時(shí)，發(fā)現(xiàn)菝葜皂苷元沒有紫外吸收，ELSD檢測(cè)器是比較好的選擇，以膽固醇（知母中不含有膽固醇）為內(nèi)標(biāo)物，它的峰并不干擾菝葜皂苷元，是較好內(nèi)標(biāo)物。

2.2 HPLCMS聯(lián)用技術(shù)在天然藥物中的應(yīng)用HPLCMS聯(lián)用技術(shù)是集HPLC的高分離能力與MS的高靈敏度于一體的新技術(shù)。相比于GCMS技術(shù)，HPLCMS對(duì)藥物的熱穩(wěn)定性不作要求，可以分析范圍更廣的藥物。謝婷婷等[29]采用HPLCMS/MS測(cè)定伏馬毒素B1和B2的含量，HPLC采用C18色譜柱，流動(dòng)相為濃度0.1%甲酸乙腈溶液-濃度0.1%甲酸水溶液，MS使用ESI、正離子模式檢測(cè)。試驗(yàn)結(jié)果表明，4種藥材伏馬毒素B1的平均回收率分別為93.7%、90.3%、92.0%和91.4%，伏馬毒素B2的平均回收率分別為93.9%、96.1%、92.3%和94.8%，另檢測(cè)10種藥材伏馬毒素的總含量為82.4～2349 μg/kg。該分析方法靈敏度高，適合于多種藥材的伏馬毒素限量檢查，可用于藥材質(zhì)量控制。Du等[30]利用LCMS測(cè)定異黃酮苷及苷元時(shí)，檢測(cè)出2個(gè)主要未知色譜峰的結(jié)構(gòu)，分別為毛蕊異黃酮苷6′′′O丙二酸酯和芒柄花苷6′′′O丙二酸酯。試驗(yàn)結(jié)果表明，異黃酮苷類成分藥材含量高于飲片，苷元含量則低于飲片。結(jié)果證明，LCMS法可用于黃酮苷類成分的含量分析，并且通過軟件可以鑒別未知化合物的結(jié)構(gòu)。

2.3 LCNMR聯(lián)用技術(shù)在天然藥物中的應(yīng)用HPLC雖然可以被廣泛地用于天然藥物、生物樣品等復(fù)雜混合物的定量分析，但它只能測(cè)定已知化合物的含量，而難以檢測(cè)未知物的結(jié)構(gòu)信息。NMR是測(cè)定未知待測(cè)物結(jié)構(gòu)信息最有效的技術(shù)之一。相反地，NMR對(duì)樣品的純度要求很高，樣品必須為純凈物，對(duì)混合物的檢測(cè)難以得到準(zhǔn)確的結(jié)果[31]。LCNMR聯(lián)用技術(shù)融合了兩者的優(yōu)點(diǎn)，近年來(lái)取得巨大進(jìn)步，被廣泛地應(yīng)用于天然藥物未知成分的結(jié)構(gòu)鑒定。Fan等[32]使用HPLCNMR分析小花異裂菊，由RPHPLC分離得到3個(gè)新的化合物，使用二維的氫譜和碳譜檢測(cè)到它們的結(jié)構(gòu)，并且最終確定它們的化學(xué)式。Yang等[33]采用RPC18色譜柱對(duì)無(wú)葉假木賊進(jìn)行分離，得到6個(gè)化合物，再利用HNMR譜、CNMR譜以及IR等技術(shù)對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒別，得出一個(gè)新的化合物pacetylphenol 1OβDxylopyranosyl（1→2）βDglucopyranoside和piceine等5個(gè)已知化合物。

3薄層色譜掃描法（TLCS）

TLCS系用一定波長(zhǎng)的光對(duì)薄層板上具有紫外吸收、可見光吸收或可以發(fā)射出熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，將掃描得到的圖譜或數(shù)據(jù)用于鑒別和含量測(cè)定的分析方法。TLCS可以作為HPLC法的補(bǔ)充，用于測(cè)定無(wú)紫外吸收的藥物組分。采用TLCS法分析樣品的前提是選擇合適的色譜條件。該條件應(yīng)能使組分完全分離，斑點(diǎn)對(duì)稱不拖尾且有合適的Rf。沈靜等[34]采用TLCS法測(cè)定游離棉酚含量，使用含濃度0.5% CMCNa的硅膠G高效薄層板，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸-丁酮（體積比50.0∶8.0∶1.5∶1.0）為展開劑，測(cè)定波長(zhǎng)550 nm，參比波長(zhǎng)750 nm，掃描方式雙波長(zhǎng)紫外反射法掃描。試驗(yàn)表明，選擇該展開劑有利于棉酚與棉籽油中其他物質(zhì)的分離。結(jié)果證明，TLCS法可用于棉籽油中游離棉酚含量的測(cè)定。測(cè)定槐米中的蘆丁和槲皮素含量的試驗(yàn)[35]采用TLCS法，十二烷基硫酸鈉-正丁醇-正己烷-水-甲酸為展開劑，檢測(cè)波長(zhǎng)370 nm，參比波長(zhǎng)550 nm，雙波長(zhǎng)鋸齒狀掃描。該展開劑可以使蘆丁和槲皮素完全分離，表明該方法可作為蘆丁和槲皮素的含量分析方法。

4超高效液相色譜（UPLC）

隨著天然藥物研究的不斷深入，分析方法和分析儀器始終都向著靈敏、專一、準(zhǔn)確、快速、微量的方向發(fā)展，同時(shí)對(duì)方法和儀器的自動(dòng)化、智能化和微型化提出更高的要求。一種基于小顆粒填料的液相色譜分析技術(shù)——超高效液相色譜（UPLC）應(yīng)運(yùn)而生。UPLC不僅繼承了HPLC優(yōu)點(diǎn)，而且提高了速度、分離度和靈敏度[36]。傅曉燕等[37]分別采用HPLC和UPLC法對(duì)比測(cè)定2種川芎中阿魏酸含量，HPLC法采用Agilent TCC18色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-濃度0.085%磷酸溶液（17∶83），而UPLC法采用Acquity UPLC HSS T3色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-濃度0.085%磷酸溶液（15∶85），檢測(cè)波長(zhǎng)均為316 nm，2種方法測(cè)得的阿魏酸含量均準(zhǔn)確、可靠，但與HPLC相比，UPLC法檢測(cè)靈敏度更高、分析速度更快的優(yōu)點(diǎn)使得它可以代替HPLC法來(lái)測(cè)定川芎藥材中阿魏酸的含量。

42卷29期謝 苗等天然藥物分析方法的研究進(jìn)展UPLC超強(qiáng)分離能力提高了目標(biāo)成分與雜質(zhì)的分離，降低了雜質(zhì)對(duì)靈敏度的影響，所以UPLCMS聯(lián)用可以獲得更高的靈敏度以及更好的分離效果。天然藥物及其制劑成分多樣，含量不等。UPLCMS聯(lián)用技術(shù)可以對(duì)其進(jìn)行分析。Zhao等[38]利用UPLCTOF-MS技術(shù)測(cè)定知母中7個(gè)甾體皂苷的含量，使用T3色譜柱，以乙腈-水（濃度0.1%甲酸）為流動(dòng)相，MS數(shù)據(jù)采集模式是MSE，數(shù)據(jù)采集范圍為50～1 500 D，樣品的平均回收率分別為101.30%、99.52%、99.29%、97.13%、101.98%、98.21%和101.57%，RSD≤5%。該試驗(yàn)提供了一種快速分析知母中7種甾體皂苷含量的新方法，可用于知母藥材的質(zhì)量控制。

5展望

5.1 我國(guó)天然藥物的研究現(xiàn)狀 目前，我國(guó)天然藥物的研究?jī)?nèi)容主要是活性成分的提取、分離、結(jié)構(gòu)鑒定及藥理作用的研究。天然藥物的研究工作主要有兩大類：一是在傳統(tǒng)天然藥物原有藥理作用的基礎(chǔ)上進(jìn)行活性成分提取、分離；二是在活性成分已清楚的傳統(tǒng)天然藥物中，尋找且發(fā)現(xiàn)新的活性組分進(jìn)行提取、分離?，F(xiàn)代先進(jìn)技術(shù)的快速發(fā)展使得上述兩類工作可以更加簡(jiǎn)便、快速地進(jìn)行，得到的活性單體再利用IR、MS、NMR等手段進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。搞清活性成分的結(jié)構(gòu)，是為了探索它們的人工合成或半合成方法，也是一種新藥研究的途徑。新抗生素的獲得就是利用天然抗生素為母體，進(jìn)行化學(xué)合成加上或去掉某些基團(tuán)以提高它的抗生素效率或降低其毒副作用。HPLCMS、HPLCNMR等新技術(shù)的發(fā)展極大地促進(jìn)了天然藥物的研究，使得復(fù)雜混合體系中的微量組分也可以得到純化分離，并且確定其化學(xué)結(jié)構(gòu)。

5.2我國(guó)天然藥物研究的發(fā)展趨勢(shì)我國(guó)是天然藥物原料生產(chǎn)大國(guó)，也是天然藥物的消費(fèi)大國(guó)。部分珍貴的動(dòng)植物資源匱乏。從資源可持續(xù)利用的角度來(lái)看，開展大規(guī)模系統(tǒng)、規(guī)范的化學(xué)成分研究，建立天然藥物的質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)，加強(qiáng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)這一政策符合我國(guó)國(guó)情。我國(guó)天然藥物研究的發(fā)展趨勢(shì)主要有：一是加強(qiáng)單一活性組分的研究，單一組分特別是活性組分的化學(xué)結(jié)構(gòu)的研究是選擇天然先導(dǎo)化合物和新藥創(chuàng)制的基礎(chǔ)；二是有效利用天然活性先導(dǎo)化合物，天然先導(dǎo)化合物很有希望成為治療重大疾病的新藥，而且天然產(chǎn)物的藥理作用篩選的命中率比有機(jī)合成化合物更高；三是天然藥物的生物學(xué)研究，通過藥理試驗(yàn)研究天然藥物ADME的動(dòng)態(tài)變化及個(gè)體化、種族之間的差異；四是加強(qiáng)天然藥物復(fù)方藥效的研究，天然藥物的獨(dú)特療效往往并不是通過一種藥物體現(xiàn)，而是多種藥物的聯(lián)合使用的結(jié)果。復(fù)方藥效是藥效物質(zhì)多成分、多途徑、多受體的綜合作用，因此研究藥效物質(zhì)是天然藥物復(fù)方研究的核心。揭示復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，闡明復(fù)方藥效作用機(jī)制及處方配伍關(guān)系，也是21世紀(jì)天然藥物研究的重要內(nèi)容。

5.3天然藥物的研究對(duì)我國(guó)新藥創(chuàng)制的影響 新藥創(chuàng)制是一項(xiàng)高投入、高風(fēng)險(xiǎn)、長(zhǎng)周期的系統(tǒng)工程，而我國(guó)的天然藥物資源豐富，經(jīng)濟(jì)能力較弱，從天然產(chǎn)物中尋找創(chuàng)新藥物適合我國(guó)現(xiàn)階段國(guó)情。天然先導(dǎo)化合物的發(fā)現(xiàn)為新藥的目標(biāo)化合物提供了基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)，在天然活性成分的結(jié)構(gòu)上進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)生物學(xué)的結(jié)構(gòu)修飾和活性研究，分析結(jié)構(gòu)對(duì)活性的影響，再進(jìn)一步設(shè)計(jì)目標(biāo)新藥化合物。新藥創(chuàng)制涉及分子生物學(xué)、生物工程學(xué)等多學(xué)科，又是微量分離分析技術(shù)、基因重組技術(shù)等多種技術(shù)的聯(lián)合應(yīng)用。我國(guó)的新藥研究和國(guó)際先進(jìn)水平還有很大差距，最根本的原因是基礎(chǔ)科學(xué)研究水平較低?；A(chǔ)科學(xué)研究水平的提高根本在于創(chuàng)新?；A(chǔ)研究經(jīng)驗(yàn)的累積可以開拓新的思路，從而間接地促進(jìn)新藥的開發(fā)。隨著生命科學(xué)和各種現(xiàn)代新技術(shù)的發(fā)展，我國(guó)天然藥物基礎(chǔ)研究和創(chuàng)新藥物的開發(fā)研究必將取得輝煌的成就。

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