培養(yǎng)基對果蠅幼蟲生長發(fā)育的影響

【摘要】為了篩選出最適果蠅幼蟲生長的培養(yǎng)基，以黑腹果蠅為試驗對象，比較了4種不同培養(yǎng)基對果蠅發(fā)育周期、三齡幼蟲的重量和數(shù)量等指標的影響。實驗結(jié)果表明配方A培養(yǎng)基所培養(yǎng)的果蠅三齡幼蟲個體數(shù)量較多，體型肥大，發(fā)育周期較短。

【關(guān)鍵詞】培養(yǎng)基；果蠅；生長發(fā)育；

果蠅( Drosophlia ) 作為一種良好的動物實驗材料，具有生長迅速、繁殖力強、后代數(shù)量大、個體小、飼養(yǎng)管理方便和變異類型多等優(yōu)點。果蠅唾液腺染色體是典型的巨大染色體，由于其本身巨大型及結(jié)構(gòu)特征，是遺傳學研究染色體變異、基因表達比較好的實驗材料。培養(yǎng)出適合實驗的三齡幼蟲是制備出好的染色體標本的關(guān)鍵所在，而培養(yǎng)基是影響三齡幼蟲培養(yǎng)效果的主要因素之一。本文通過研究四種配方的培養(yǎng)基對果蠅幼蟲生長發(fā)育的影響，為培養(yǎng)三齡幼蟲合適的飼養(yǎng)條件提供參考。

一、材料和方法

（一）實驗動物及飼養(yǎng)

配制4種培養(yǎng)基，按表1-1 中的比例稱取各種成分。將紅糖、瓊脂、玉米粉和麩皮（配方B中不加）倒入燒杯中， 加適量水攪拌，微波爐加熱煮沸， 待培養(yǎng)基稍冷卻后加入干酵母，攪拌均勻，最后加入丙酸，調(diào)勻倒入果蠅培養(yǎng)瓶中。

選擇黑腹果蠅野生型，體大健壯者作為實驗動物，每組取5對，接種于3種培養(yǎng)基中，每種培養(yǎng)基做三個重復，放于20℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng)，交配2天后將成蠅移除，避免由于幼蟲密度大而導致三齡幼蟲個體太小，影響實驗效果。一齡幼蟲出現(xiàn)后，每天在培養(yǎng)基表面滴加4%的酵母液，二齡幼蟲出現(xiàn)后每天在培養(yǎng)基表面滴加10%的酵母液。

表1-1 培養(yǎng)基配方

（二）試驗儀器及用具

微波爐、電子分析天平、恒溫培養(yǎng)箱、燒杯、麻醉瓶、玻璃棒、毛筆、吸水紙、放大鏡、培養(yǎng)瓶、棉塞等。

（三）檢測指標

1.果蠅的發(fā)育

觀察記錄從成蠅交配到出現(xiàn)一齡幼蟲的時間，一齡幼蟲到三齡幼蟲的時間，三齡幼蟲到蛹的時間。

2.果蠅三齡幼蟲的數(shù)量

接種后8天，計算果蠅瓶中三齡幼蟲的數(shù)量，取三個重復的平均值。

3.果蠅三齡幼蟲的重量

接種后8天，在同一處理的三個培養(yǎng)瓶內(nèi)隨機取10只三齡幼蟲稱重，計算平均體重。

（四）統(tǒng)計分析

試驗所得數(shù)據(jù)用SPSS20.0統(tǒng)計分析軟件進行方差分析，用Duncan’s進行多重比較，結(jié)果均以“平均值±標準差”表示。

二、實驗結(jié)果

從交配到出現(xiàn)幼蟲的時間，4個配方培養(yǎng)基之間沒有差異，均為2天。

一齡幼蟲到三齡幼蟲的發(fā)育時間：配方A中飼養(yǎng)的一齡幼蟲到三齡幼蟲的發(fā)育時間，顯著低于其它三種配方（p＜0.05），而配方B中飼養(yǎng)的一齡幼蟲到三齡幼蟲的發(fā)育時間顯著高于其它三種配方（p＜0.05），配方C和配方D飼養(yǎng)的一齡幼蟲到三齡幼蟲的發(fā)育時間差異不顯著（p＞0.05）。

三齡幼蟲到蛹的發(fā)育時間：配方A中飼養(yǎng)的三齡幼蟲到蛹的發(fā)育時間，顯著低于其它三種配方（p＜0.05），配方B、配方C 和配方D之間差異不顯著（p＞0.05）。

三齡幼蟲的數(shù)量：配方A中飼養(yǎng)的三齡幼蟲的數(shù)量顯著高于其它三種配方（p＞0.05），而配方B中飼養(yǎng)的三齡幼蟲數(shù)量顯著低于其它三種配方（p＞0.05），配方C和配方D飼養(yǎng)的三齡幼蟲的數(shù)量兩者之間差異不顯著（p＞0.05）。

三齡幼蟲的重量：配方A中飼養(yǎng)的三齡幼蟲的重量顯著高于其它三種配方（p＞0.05），而配方B中飼養(yǎng)的三齡幼蟲數(shù)量顯著低于其它三種配方（p＞0.05），配方C和配方D飼養(yǎng)的三齡幼蟲的數(shù)量兩者之間差異不顯著（p＞0.05）。

表2-1 不同培養(yǎng)基對果蠅發(fā)育的影響

三、討論

配方B為實驗室中常常采用的果蠅培養(yǎng)基，其培養(yǎng)效果要差于另外三種培養(yǎng)基。

配方C與配方B相比多添加了麩皮，配方C在發(fā)育時間上，三齡幼蟲的重量和數(shù)量上均優(yōu)于配方B，本實驗結(jié)果與陳宗禮的研究結(jié)果相似。可能的原因是加入麩皮的培養(yǎng)基比較疏松，透氣性好，可提供充足的氧氣，利于酵母菌的生長繁殖，從而為果蠅生長發(fā)育提供了豐富的食物來源。另一方面，加入麩皮的培養(yǎng)基松軟度比較適宜，活酵母發(fā)酵會產(chǎn)生氣泡，可使培養(yǎng)基變得疏松，利于果蠅幼蟲鉆洞取食，從而促進果蠅幼蟲的生長發(fā)育。

配方D與配方C相比多添加了酵母粉，酵母粉是果蠅飼料中不可缺少的成分， 研究表明增加酵母粉攝入量可使雌果蠅的產(chǎn)卵數(shù)增多。也可促進果蠅精子發(fā)生各階段細胞數(shù)量的增加，與不添加酵母粉組相比， 含酵母粉組果蠅產(chǎn)卵數(shù)量和生育期都具有明顯優(yōu)勢， 且產(chǎn)卵高峰明顯提前， 持續(xù)時間延長， 蟲卵發(fā)育成蛹的天數(shù)也大大縮短。本研究結(jié)果表明，配方D在發(fā)育時間上，三齡幼蟲的重量和數(shù)量與配方C之間均無顯著性差異，可見多添加的酵母并沒有對果蠅的發(fā)育起到促進作用，推測可能的原因是兩配方酵母的濃度差異不大，并且幼蟲出現(xiàn)后在培養(yǎng)基中又定期追加了酵母液，導致培養(yǎng)基中初始酵母濃度的差異對幼蟲的作用不明顯。

配方A與配方D相比多添加了紅糖，與配方C相比多添加了紅糖和酵母，配方A在發(fā)育時間上，三齡幼蟲的重量和數(shù)量均優(yōu)于配方C和配方D，可能的原因是高濃度的紅糖本身為黑腹果蠅的交配、產(chǎn)卵及幼蟲發(fā)育提供更為豐富的營養(yǎng)條件，另外可能是紅糖和酵母的協(xié)同作用，紅糖提供了酵母菌繁殖所必需的外部條件，為果蠅生長發(fā)育提供了充足的營養(yǎng)，利于果蠅的生長發(fā)育。

四、結(jié)論

玉米、麩皮、高糖、高酵母的配方A培養(yǎng)基顯著縮短了果蠅的發(fā)育時間，顯著增加了三齡幼蟲的數(shù)量和重量，適于在實驗室推廣。

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