熊果酸抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞HT—29增殖作用的研究

【摘 要】 目的 探討熊果酸在體外對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29的增殖抑制作用。方法 采用MTT法觀察熊果酸對(duì)HT-29細(xì)胞的增殖抑制作用。結(jié)果 熊果酸對(duì)HT-29細(xì)胞的增殖抑制作用呈明顯的濃度和時(shí)間依賴性。結(jié)論 熊果酸對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞系HT-29有較強(qiáng)的增殖抑制作用，該作用呈濃度和時(shí)間依賴性。

【關(guān)鍵詞】 熊果酸；人結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29

【中圖分類號(hào)】 R735.3+5 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A

熊果酸（Ursolic acid，UA），又名烏索酸，烏蘇酸，為三萜酸類化合物，在自然界中分布廣泛，主要存在于熊果、山楂、女貞、白花蛇舌草等多種草藥以及植物中，具有護(hù)肝、抗炎、免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)活性[1-3]，近年來熊果酸的抗腫瘤作用越來越受到重視，它可以抑制腫瘤的發(fā)生、生長、侵襲轉(zhuǎn)移以及抗腫瘤血管生成、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化和凋亡[4，5]。本實(shí)驗(yàn)研究了熊果酸在體外對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29的增殖抑制作用。

1 資料與方法

1.1 材料 人結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29購自北京大學(xué)。UA、四甲基偶氮唑藍(lán)[3-（4、5-dimethylthiazol-2YL）-2，5-diphenyl tetrazolium bromide，MTT]購自Sigma公司。RPMI-1640培養(yǎng)基購自HYCLONE公司。小牛血清購自三利公司。胰酶（1：250）購自Amresco公司。二甲基亞砜（DMSO）為AMRESCO公司產(chǎn)品。PBS粉：中國北京中山生物技術(shù)公司產(chǎn)品。酶標(biāo)儀為澳大利亞TECAN公司產(chǎn)品，型號(hào)：GENiOS VA200。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 人結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29接種于含10%新生小牛血清RPMI-1640培養(yǎng)基中，置37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每2-3天傳代，取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 增殖抑制實(shí)驗(yàn) 將處于對(duì)數(shù)生長期的HT-29細(xì)胞調(diào)節(jié)濃度至5×104個(gè)/mL，加入96孔培養(yǎng)板中，然后加入熊果酸使其終濃度分別為10 mol/L、20mol/L、30mol/L、40 mol/L和50mol/L，并設(shè)立不含UA（0μmol/L）的對(duì)照組，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。將96孔板置于培養(yǎng)箱內(nèi)分別培養(yǎng)12、24、36、48h后每孔加入5 mg/mL MTT溶液，37℃培養(yǎng)4 h，2500 rpm離心10 min，棄上清，每孔加入DMSO 100μL，震蕩混勻后用酶標(biāo)儀在570 nm波長下讀取各孔的光吸收值（OD值），計(jì)算增殖抑制率=[（對(duì)照組OD值-處理組OD值）/對(duì)照組OD值] ×100%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析（ANOVA）。

2 結(jié)果

2.1 UA對(duì)HT-29細(xì)胞的增殖抑制作用 MTT檢測結(jié)果表明熊果酸對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29具有增殖抑制作用，并呈劑量和時(shí)間依賴性。隨著UA濃度增加，作用時(shí)間延長，細(xì)胞的存活率逐漸降低，細(xì)胞增殖抑制作用明顯增強(qiáng)（圖1）。50μmol/L熊果酸作用48小時(shí)后，HT-29細(xì)胞增殖幾乎停止。熊果酸作用于HT-29細(xì)胞12、24、36、48小時(shí)IC50值分別為52.73μmol/L，43.23μmol/L，37.39μmol/L，32.04μmol/L。

3 討論

結(jié)腸癌是消化道常見的惡性腫瘤之一，隨著人們生活方式的改變，結(jié)腸癌的發(fā)病率逐年上升，對(duì)其進(jìn)行有效的防治顯得尤為重要。熊果酸具有廣泛的生物學(xué)活性，其突出作用為抗腫瘤，它對(duì)多種惡性腫瘤細(xì)胞有明顯的細(xì)胞毒作用和抗血管生成作用，其抗癌作用已越來越引起人們的重視。

在該實(shí)驗(yàn)中，我們研究了UA在體外對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29的作用。MTT實(shí)驗(yàn)表明從30μmol/L起，UA對(duì)HT-29細(xì)胞開始具有較顯著的增殖抑制作用，隨著作用時(shí)間延長，UA濃度增加，細(xì)胞增殖抑制作用隨之增強(qiáng)，呈現(xiàn)出明顯的濃度和時(shí)間依賴性。

綜上所述，熊果酸在體外對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29有較強(qiáng)的增殖抑制作用，具體作用機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

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