監(jiān)測(cè)俄克拉荷馬州發(fā)病豬場(chǎng)外不同距離處的空氣樣本中豬流行性腹瀉病毒

中圖分類(lèi)號(hào)：S855 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1001-0769（2014）02-0005-02

美國(guó)首次發(fā)生豬流行性腹瀉（Porcine Epidemic Diarrhea，PED）是在2013年。因會(huì)引起斷奶前仔豬的高死亡率，此病正給豬場(chǎng)帶來(lái)慘重的經(jīng)濟(jì)損失。俄克拉荷馬州鍋柄狀地區(qū)的許多豬場(chǎng)在短時(shí)間內(nèi)感染了PED，且常見(jiàn)的傳染源不詳，懷疑經(jīng)空氣（懸浮塵粒）傳播。眾所周知，與PEDv相似的冠狀病毒在干燥環(huán)境中相對(duì)穩(wěn)定，且此類(lèi)環(huán)境還可增加其通過(guò)空氣傳播的可能性。所以，有必要確定是否可在空氣樣本中檢測(cè)到PEDv。

1 試驗(yàn)材料和方法

用大容量空氣采樣器采集空氣樣本（Midwest Micro-Tek，美國(guó)Brookings公司）（圖1）。開(kāi)始時(shí)在每個(gè)取樣點(diǎn)將11 mL運(yùn)輸培養(yǎng)基（MEM，anti-anti，牛血清蛋白、胰蛋白、慶大霉素）放在貯存器中，然后讓空氣取樣器運(yùn)行30 min。在距發(fā)生PED疫情的豬場(chǎng)不同距離的地方采集空氣樣本。剩余的運(yùn)送培養(yǎng)基注入15 mL離心管中，在遞交至明尼蘇達(dá)大學(xué)獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室用PCR方法檢測(cè)PED病毒前一直置于干冰中保存。取樣后的殘留物用蒸餾水沖洗。采樣器所有表面和內(nèi)部充分地噴灑70 %的乙醇溶液進(jìn)行消毒，設(shè)備消毒后在每次采樣間需放置30 min以上。再次采樣前，消毒劑殘留液用蒸餾水沖洗干凈，并用紙巾擦干。采樣器的儲(chǔ)存器和紡紗裝置用無(wú)菌棉拭（液體Stuart媒介）進(jìn)行采樣，隨后用PCR方法檢測(cè)PEDv。從發(fā)病豬場(chǎng)順風(fēng)方向的最遠(yuǎn)點(diǎn)開(kāi)始，連續(xù)采集樣本。

PCR陽(yáng)性空氣樣本進(jìn)行生物學(xué)鑒定，以確定采集到的病毒顆?；盍?。為提高檢測(cè)的敏感性，我們用10日齡仔豬（圖2）進(jìn)行測(cè)定。選取9份PCR陽(yáng)性樣本，進(jìn)行生物學(xué)鑒定，以代表距檢測(cè)到多個(gè)陽(yáng)性樣本[（18.288 m（60 ft），1.609 344 km（1 mi），4.828 032 km（3 mi）]的豬場(chǎng)外的不同距離。盡管在距離豬場(chǎng) 16.09 344 km（10 mi）處采集的樣本只有一個(gè)陽(yáng)性樣本，但選取第10份PCR陽(yáng)性樣本仍具有重要意義。15頭豬分別放入13個(gè)獨(dú)立的房間中，并接種病毒。我們加入1份陽(yáng)性對(duì)照樣本（Ct 16）、1份稀釋的陽(yáng)性對(duì)照樣本（估測(cè)的Ct 36-38，在檢測(cè)時(shí)呈陰性）和1份陰性對(duì)照樣本。所有試驗(yàn)仔豬在接種48 h后進(jìn)行安樂(lè)死，其組織用PCR方法檢測(cè)PEDv。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

在采用機(jī)械通風(fēng)的母豬場(chǎng)和自然通風(fēng)的肥育豬場(chǎng)外的多個(gè)空氣樣本中，用PCR方法檢測(cè)到了PEDv。在距已知陽(yáng)性豬場(chǎng)外順風(fēng)方向9.144 m（30 ft）、18.288 m（60 ft）、91.44 m（300 ft）、0.402 336 km（0.25 mi）、0.804 672 km（0.5 mi）、1.609 344 km （1 mi）、3.218 688 km（2 mi）、4.828 032 km（3 mi）、8.04672（5 mi）、16.09 344 km （10 mi）和24.14 016 km（15 mi）處，共采集64份樣本，經(jīng)PCR檢測(cè)其中11份樣本呈陽(yáng)性。各距離處檢測(cè)到的陽(yáng)性樣本數(shù)分別為18.288 m（60 ft）（3/6）、0.804 672 km（0.5 ft）（1/5）、1.609 344 km（1 mi）（3/13）、4.828 032 km（3 mi）（3/7）和16.09 344 km（10 mi）（1/3）；未檢測(cè)到陽(yáng)性樣本的地方分別距豬場(chǎng)9.144 m（30 ft）（0/1）、91.44 m（300 ft）（0/6）、0.402 336 km（0.25 mi）（0/5）、3.218 688 km（2 mi）（0/4）、8.04 672（5 mi）（0/8）和24.14 016 km（15 mi）（0/4）（圖3）。

唯一出現(xiàn)腹瀉癥狀的豬為接種低水平Ct的陽(yáng)性對(duì)照樣本的豬。腸道樣本經(jīng)PCR檢測(cè)呈陽(yáng)性。所有其他豬臨床和PCR檢測(cè)均呈陰性。

3 結(jié)論與論述

PEDv可以在遠(yuǎn)離豬場(chǎng)16.09 344 km （10 mi）外的空氣中檢測(cè)出?？諝鈽颖镜纳飳W(xué)鑒定結(jié)果呈陰性說(shuō)明：

● 本研究中較低的病毒濃度可能低于10日齡仔豬的最小感染劑量。

● PCR陽(yáng)性空氣樣本中無(wú)活病毒。

● 接種低濃度病毒的仔豬可能需要待48 h以上供病毒復(fù)制，以便用生物學(xué)鑒定法進(jìn)行檢測(cè)?！酢?/p>

原題名：Detection of Porcine Epidemic Diarrhea virus in air samples at varying distances to epidemic farms in Oklahoma（英文）

原作者：Dane Goede、R. Robbins、L. Dufresne、M. Engle、A. Rovira、Robert Morrison