臨床化學(xué)發(fā)光免疫法檢測AFP的分析性能驗證及實驗方法分析

孫輝

【摘要】目的對臨床化學(xué)發(fā)光免疫法檢測AFP的分析性能驗證及實驗方法進行分析與探討。方法對我院2013年1月至2013年3月的60例臨床送檢血清標(biāo)本的臨床資料進行統(tǒng)計分析，將上述案例隨機性地分成兩組，每組30人，即對照組與實驗組。對照組：采用醫(yī)院放射免疫法，實驗組：采用化學(xué)發(fā)光免疫法檢測。結(jié)果對臨床資料進行統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，實驗組的對照組，無顯著性差異，有很好的相關(guān)性。結(jié)論化學(xué)發(fā)光免疫法的準(zhǔn)確性與精密度均優(yōu)于放射免疫法。

【關(guān)鍵詞】化學(xué)發(fā)光免疫法；放射免疫法；AFP；分析性能；實驗方法

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2014.01.672文章編號：1004-7484（2014）-01-0556-02

化學(xué)發(fā)光免疫分析是一種新型的標(biāo)記免疫分析技術(shù)，是繼放射免疫、酶免疫、熒光免疫分析等分析方法之后的新一代標(biāo)記免疫分析技術(shù)，是將免疫測定與化學(xué)發(fā)光相結(jié)合的新型技術(shù)。整個過程均在全封閉的反應(yīng)體系中進行，且能夠全自動操作，儀器具有反應(yīng)迅速，靈敏度高，檢測限低等優(yōu)點，總的來說包括抗原抗體特異性結(jié)合與化學(xué)發(fā)光兩部分過程[1]。甲胎蛋白（AFP）是原是胚胎的肝細胞，嬰兒兩個月便逐漸消失，但近些年發(fā)現(xiàn)AFP在部分成人體內(nèi)出現(xiàn)，并發(fā)現(xiàn)它是原發(fā)性肝癌最靈敏，也是最特異的腫瘤標(biāo)志物。為了進一步考察該儀器對AFP生物檢測限和AFP功能靈敏度的測量，我院參照IUPAC（國際純粹和應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會）的規(guī)定評價方案，現(xiàn)將60例臨床送檢血清標(biāo)本的臨床資料進行報道如下：

1材料與實驗方法

1.1應(yīng)用材料與儀器檢測樣選用我院2013年1月至2013年3月的60例臨床送檢血清標(biāo)本。

儀器采用美國Bayer Centaur 240全自動化學(xué)發(fā)光儀，并配套相關(guān)檢測試液（包括標(biāo)記的抗原抗體、含磁性的固相顆粒、稀釋液、AFP清洗液、發(fā)光試劑等），均采用拜耳公司提供的試劑。放射免疫法采用上海產(chǎn)的γ計數(shù)儀（SN-682 型），并配套運用 AFP 試劑盒（中國原子能科學(xué)研究所研制）。

1.2方法檢測時運用AFP稀釋液作為空白樣品，取一新鮮的血清作為試樣，做重復(fù)性實驗，記錄每次檢測的濃度值和光強度值。核實兩者的精密度、靈敏度與檢出限等，數(shù)據(jù)處理采用線性回歸處理。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法根據(jù)SPSS13.0軟件對提供的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)的分析，計量資料為t檢驗，對所有統(tǒng)計結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（χ±s）的形式表示，運用軟件進行處理（檢驗水準(zhǔn)α=0.05，雙側(cè)檢驗）作為統(tǒng)計學(xué)的評定標(biāo)準(zhǔn)具有統(tǒng)計學(xué)的差異。

2結(jié)果

2.1線性試驗以AFP稀釋液作為空白試劑，再根據(jù)要求將標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋成不同濃度的溶液，放射免疫法取5ppb、10ppb、50ppb、200ppb、400ppb為標(biāo)準(zhǔn)濃度測定標(biāo)準(zhǔn)曲線，化學(xué)發(fā)光免疫法取5ppb、10ppb、50ppb、200ppb、400ppb、800ppb為標(biāo)準(zhǔn)濃度測定標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果兩組數(shù)據(jù)均有較好的線性關(guān)系。

2.2重復(fù)性試驗取一新鮮的血清作為試樣，兩種方法均進樣10次，查看兩者的重復(fù)性差別，兩組儀器均能滿足RSD<10%的標(biāo)準(zhǔn)。

2.3相關(guān)性試驗采用2.2中的方法用上述兩種檢測法對受檢血清標(biāo)本進行適當(dāng)定量分析。結(jié)果顯示，兩種方法無顯著差異（P>0.05），且相關(guān)系數(shù)r=0.995，回歸方程為y=-1.059+0.921x，兩組方法所得數(shù)據(jù)的相關(guān)性良好。

2.4回收率試驗取混合血清后，再加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)定值血清，用兩組方法分別對其進行平均回歸率實驗，實驗得出，放射免疫法的回收率為91.2-108.1%，化學(xué)發(fā)光免疫法的回收率為92.0-107.8%?；瘜W(xué)發(fā)光免疫法略優(yōu)于放射免疫法。

2.5檢出限以每次做的空白RLUs為基值，以該空白的RLUs值的3倍作為樣品中具有的AFP量，或稱本法的檢測低限。分別對兩種方法進行檢出限測量，得出化學(xué)發(fā)光免疫法的檢出限為0.95ppb，放射免疫法的檢出限為5ppb?；瘜W(xué)免疫法在檢出限上明顯優(yōu)于放射免疫法[2]。

2.6精密度試驗取三個梯度濃度（分為低、中、高三個梯度）的試劑分別進行精密度實驗，并運用兩種方法進行整理對比，見表1。

3討論

化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)作為一種新型的分析技術(shù)，既具有運用發(fā)光檢測時的高度敏感性，也同時具有免疫分析時的高度特異性。其原理為將激發(fā)態(tài)分子回到基態(tài)時所釋放而產(chǎn)生的發(fā)光現(xiàn)象，再運用化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)來為抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)做指示系統(tǒng)，從而進行定量檢測抗原或抗體的濃度方法，是一種直接的運用發(fā)光劑標(biāo)記抗體的免疫分析方法。由于運用丫啶酯發(fā)光劑的優(yōu)點可以很好的減少非特異性干擾，反應(yīng)較為簡單且迅速，反應(yīng)靈敏度高，據(jù)有關(guān)資料顯示，該發(fā)光劑也很穩(wěn)定（有效期可長達1年以上）。

放射免疫法是目前臨床上較為常用的分析方法，其原理是放射性標(biāo)記的抗原和非標(biāo)記抗原全部同時與限量的特異性抗體進行競爭性可逆的結(jié)合反應(yīng)，反應(yīng)的靈敏度較低，標(biāo)記物的有效期也較短（一般只有1個月左右）。從工作人員角度來說，也會對他們的身體健康帶來很多負面影響。從以上的結(jié)論可以看出，兩種方法的檢測結(jié)果無顯著性差異，且相關(guān)性較好。但從檢出限、靈敏度、精密度等方面進行比較，化學(xué)發(fā)光免疫法就明顯優(yōu)于放射免疫法，而且其試劑穩(wěn)定性高、毒性小，對環(huán)境無過大污染，方便、易操作且安全。

本實驗采用的全自動化學(xué)發(fā)光儀可以很好地對血清標(biāo)本進行很好地采樣，處理和檢測，基本上能夠達到樣品隨到隨測，檢測迅速，很快可以得到檢測結(jié)果，大大縮短了檢測所用的時間，能滿足臨床上的檢驗需求[3]。從上述數(shù)據(jù)可以確認，該方法的檢測結(jié)果均可以達到臨床運用水平，又基于其高度特異性、靈敏度高、重復(fù)性好等優(yōu)勢，值得臨床進一步廣泛應(yīng)用。

參考文獻

[1]張紅祥.化學(xué)發(fā)光免疫法與放射免疫法檢測血清AFP臨床分析[J].中國現(xiàn)代藥學(xué)應(yīng)用，2010，4（7）：41-42.

[2]孫蕾，鄭松柏，徐建華，張秀明，林蓮英.化學(xué)發(fā)光免疫法檢測AFP的分析靈敏度核實實驗及評價[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2007，22（3）：61-62.

[3]張泉，杜英，秦東春.磁微粒甲胎蛋白（AFP）化學(xué)發(fā)光免疫檢測系統(tǒng)的研究及臨床應(yīng)用[D].鄭州：鄭州大學(xué)，2011：1-77.