養(yǎng)殖場利用ELISA方法建立自家IB抗體基準(zhǔn)線的意義

李玉燕等

雞傳染性支氣管炎（IB）是由傳染性支氣管炎病毒（IBV）引起雞的一種急性、高度接觸性傳染病，主要侵害雞的呼吸、泌尿生殖和消化系統(tǒng)等。IBV對(duì)不同日齡的雞產(chǎn)生不同程度的危害：雛雞感染后，開產(chǎn)時(shí)變成假母雞，引起生殖系統(tǒng)受損，如輸卵管永久性退化，輸卵管短小，管腔狹窄，閉塞，導(dǎo)致生產(chǎn)力衰竭，甚至發(fā)生死亡；產(chǎn)蛋雞感染后產(chǎn)蛋下降，蛋品質(zhì)降低，飼料報(bào)酬降低，死淘率增加。該病致使國內(nèi)養(yǎng)雞業(yè)的直接經(jīng)濟(jì)損失達(dá)數(shù)億元人民幣。目前，傳染性支氣管炎呈世界分布，是危害世界養(yǎng)禽業(yè)的重大傳染病之一。

目前IB血清學(xué)診斷方法有病毒中和試驗(yàn)（VN）、血凝試驗(yàn)（HA）和血凝抑制試驗(yàn)（HI）、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（AGP）、干擾試驗(yàn)、免疫熒光技術(shù)（IFA）、ELISA技術(shù)、膠體金檢測方法（DIGFA）和對(duì)流免疫電泳等。其中ELISA方法靈敏性高、特異性強(qiáng)，是檢測群特異性抗體的常用方法，適于做傳染性支氣管炎的血清學(xué)鑒定和免疫狀態(tài)的評(píng)估。酶聯(lián)免疫系統(tǒng)被證明在IBV抗體水平的定量檢測中是有效的，適用于雞群免疫狀態(tài)的監(jiān)測。

ELISA技術(shù)需要檢測目前IB抗體滴度值是否在正常范圍內(nèi)，證實(shí)沒有野毒感染。這就需要有大量的數(shù)據(jù)積累作參考，以便對(duì)新的檢測數(shù)據(jù)和以前檢測儲(chǔ)存的數(shù)據(jù)做比較，必須有大量的數(shù)據(jù)積累做參考。常規(guī)的血清學(xué)群體監(jiān)測需要各養(yǎng)殖企業(yè)建立自己的基準(zhǔn)線，也就是所謂的“baseline values”。我們必須認(rèn)識(shí)到“baseline values”是雞場特異性的，它受飼養(yǎng)品種、日齡、免疫程序、疫苗類型及其他的環(huán)境因素的影響。但是一旦建立了屬于自己的基線，就會(huì)快速的監(jiān)測免疫程序是否合理，整個(gè)雞群有無潛在的安全隱患。如果檢測的滴度值遠(yuǎn)高于正常的抗體滴度，則存在野毒感染的可能性；如果檢測的滴度值低于預(yù)期的疫苗免疫應(yīng)答滴度，就表明免疫程序不合理或者疫苗的質(zhì)量有問題。

如何建立各養(yǎng)殖企業(yè)自己的基準(zhǔn)線呢？以BioChek公司的IB檢測試劑盒為例，不同類型疫苗產(chǎn)生抗體的平均抗體效價(jià)是在一定范圍內(nèi)的，低于這個(gè)范圍存在免疫的失敗可能，需要與疫苗生產(chǎn)商或試劑生產(chǎn)商討論；如果高于這個(gè)范圍則存在野毒感染的可能性，如表1所示。

以上僅僅是舉例說明不同類型的疫苗對(duì)抗體基準(zhǔn)線的影響，在現(xiàn)場養(yǎng)殖工作中，需要綜合考慮各種因素，建立各養(yǎng)殖企業(yè)自己的基準(zhǔn)線。首先要與“標(biāo)準(zhǔn)的陰性對(duì)照做比較”，即根據(jù)各養(yǎng)殖企業(yè)自己的免疫程序，統(tǒng)計(jì)幾批健康雞群不同時(shí)期采集的抗體滴度，合理評(píng)估制定出正常的抗體滴度范圍。表2為山東省某公司種雞不同周齡正常的抗體滴度及可疑野毒感染范圍。

根據(jù)以上統(tǒng)計(jì)結(jié)果，若IB ELISA抗體滴度異常升高3000～4000，則存在野毒感染的可能。

通過建立各養(yǎng)殖企業(yè)自己的基準(zhǔn)線，能夠快速地監(jiān)測傳染性支氣管炎疫情，及時(shí)采取防控措施。根據(jù)疫情統(tǒng)計(jì)，2周齡內(nèi)及開產(chǎn)前感染野毒的幾率較高，這兩個(gè)時(shí)間段內(nèi)感染對(duì)雞群的危害最嚴(yán)重，由此造成的經(jīng)濟(jì)損失也最大。所以針對(duì)傳支的發(fā)病周齡，各養(yǎng)殖企業(yè)必須落實(shí)好生物安全控制措施，制定出合理的免疫程序，按照既定計(jì)劃進(jìn)行采血檢測抗體水平，使抗體水平符合公司的抗體基準(zhǔn)線范圍，達(dá)到免疫保護(hù)作用。筆者根據(jù)現(xiàn)場管理經(jīng)驗(yàn)，建議采取以下防控措施：

空舍期落實(shí)好各種消毒措施，養(yǎng)殖場需要一個(gè)真正的隔離時(shí)間，這是最基礎(chǔ)有效的工作，也是防止IB野毒的入侵前提。

雛雞的早期感染是引發(fā)腎臟病變和輸卵管發(fā)育抑制造成假母雞的重要原因，所以防止早期感染是防制IB的重要措施。建議將首免放在1日齡，可使用毒力較弱的H120或Ma5，最好的免疫方式是滴鼻或點(diǎn)眼。因噴霧免疫操作簡便，父母代的批量較大，目前父母代養(yǎng)殖場采取群體免疫方式較多。

IB血清型多，臨床癥狀復(fù)雜，定性困難，免疫效果不理想。在尚不能確定本地主要流行株的地區(qū)，建議多種血清型的疫苗交叉免疫程序，利用相互之間抗原決定簇的交叉保護(hù)來預(yù)防變異株。

不要忽視消化道的免疫，因?yàn)樵摬课痪植棵庖吡Σ钍乖絹碓蕉嗟淖儺愔陱哪c道分離出來，毒力強(qiáng)、死亡率高。

弱毒苗免疫之后要用滅活苗加強(qiáng)免疫，使機(jī)體產(chǎn)生較高的循環(huán)抗體保護(hù)腎臟和卵巢。

蛋雞和種雞開產(chǎn)后也要重視IB的免疫，常采用Clone30-Ma5噴霧免疫。

免疫前后應(yīng)避免一切應(yīng)激反應(yīng)，供應(yīng)充足飲水，并在飲水中添加電解多維素或腎腫解毒藥。

避免同場多批次雞群的問題，若確實(shí)難以避免，盡量將免疫程序調(diào)整為同步進(jìn)行。