苯扎溴銨消毒液殺菌試驗(yàn)觀察

王艷萍

摘要 [目的]探討苯扎溴銨消毒液對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、綠膿桿菌的殺菌效果。[方法]采用工作液直接接種法進(jìn)行試驗(yàn)觀察。[結(jié)果]苯扎溴銨對大腸埃希菌、綠膿桿菌基本無殺菌作用，對金黃色葡萄球菌有良好的殺菌效果，且應(yīng)選擇濃度≥0.10%的苯扎溴銨作用10 min以上具有完全殺菌效力。[結(jié)論]苯扎溴銨濃度≥0.10%時(shí)，適用于對金黃色葡萄球菌消毒。

關(guān)鍵詞 苯扎溴銨；殺菌作用；金黃色葡萄球菌

中圖分類號 S188 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 0517-6611（2014）20-06530-02

Observation on Germicidal Efficacy of Benzalkonium Bromide Disinfectant Solution

WANG Yanping （Chemistry & Textile Engineering Department，Jiangyin Polytechnic College， Jiangyin， Jiangsu 214405）

Abstract [Objective] The research aimed to know the germicidal efficacy of benzalkonium bromide disinfectant solution on Staphylococcus aureus， Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa. [Method] Working fluid direct inoculation method was carried out for experimental observation. [Result]Benzalkonium bromide had no germicidal effect on Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa，but it had a efficacious effect on Staphylococcus aureus. For Staphylococcus aureus， the concentrations of benzalkonium bromide should be more than 0.10% and it was used for more than 10 minutes to complete germicidal efficacy. [Conclusion] Benzalkonium bromide concentrations that was more than 0.10% could be used for the disinfection of Staphylococcus aureus.

Key words Benzalkonium bromide； Germicidal effect； Staphylococcus aureus

苯扎溴銨為最常用的表面活性劑之一，具有潔凈、殺菌、消毒的作用。不同濃度稀釋液可用于外科手術(shù)前洗手、皮膚消毒和霉菌感染、黏膜消毒、創(chuàng)口感染的洗滌消毒[1]，具有高效、毒性小、可溶于水、不受水硬度影響、使用方便、成本低等優(yōu)點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)室對消毒劑殺菌效力的測定方法通常參照美國政府農(nóng)業(yè)化學(xué)師友會（AOAC）制定的消毒劑效力測定方法。標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證消毒劑效力的方法有載體試驗(yàn)法、表面試驗(yàn)法、工作液直接接種法3種[2]。該研究將采用工作液直接接種法進(jìn)行苯扎溴銨的效力驗(yàn)證。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1

試驗(yàn)用菌種。有金黃色葡萄球菌（CMCC 26003）、大腸埃希菌（ATCC 25922）、綠膿桿菌（ATCC 15442）3種。

1.1.2

培養(yǎng)基和稀釋劑。有營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、0.9%無菌氯化鈉、pH 7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液。營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基按干粉培養(yǎng)基說明書配制、分裝，于121 ℃高壓蒸汽滅菌后備用[3]。取氯化鈉9.0 g，加純化水溶解至1 000 ml，過濾，分裝至試管中，于121 ℃，20 min高壓蒸汽滅菌后備用，制得濃度0.9%無菌氯化鈉。取磷酸二氫鉀3.56 g、磷酸氫二鈉7.23 g、氯化鈉4.3 g、蛋白胨1 g，加純化水1 000 ml[4]，然后加熱溶解，過濾，分裝至試管中，于121 ℃，20 min高壓蒸汽滅菌后備用[5]，制得pH 7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖劑。

1.1.3

試驗(yàn)菌懸液的制備。將未用的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、綠膿桿菌儲存于冰箱中，在試驗(yàn)前1 d取出，接種于營養(yǎng)瓊脂斜面，置于32.5 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，取出營養(yǎng)瓊脂斜面用無菌接種環(huán)刮出3種試驗(yàn)菌，分別放入營養(yǎng)肉湯中，搖勻，放入30～35 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。取出培養(yǎng)好的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、綠膿桿菌的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物1 ml，用濃度0.9%無菌氯化鈉溶液10倍稀釋至10-5～10-7，濃度達(dá)50～100 CFU/ ml，經(jīng)活菌計(jì)數(shù)后備用。

1.2 方法

1.2.1

消毒劑的配置。將苯扎溴銨消毒劑用經(jīng)滅菌的純化水稀釋成下列不同濃度，即0.05%、0.08%、0.10%、0.12%、0.15%、0.20%。

1.2.2

濃度0.10%苯扎溴銨消毒液殺菌試驗(yàn)。

取滅菌試管，先加入1 ml試驗(yàn)菌懸液，再加入1 ml濃度0.10%苯扎溴銨消毒液，混勻，立即開始用秒表記錄時(shí)間，5 min時(shí)移植入營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液中。其余10、15 min組的操作同上，但應(yīng)注意加菌液與接種移植時(shí)要嚴(yán)格掌握時(shí)間，不超過規(guī)定時(shí)間±5 s。然后，將3組培養(yǎng)液置于32.5 ℃培養(yǎng)48 h，觀察結(jié)果。若培養(yǎng)液呈渾濁者，則為陽性，表示有菌生長，記為“+”號；若培養(yǎng)液呈澄清透明者，表示無菌生長，則為陰性，記為“-”號。同時(shí)，做平行試驗(yàn)。

1.2.3

不同濃度的苯扎溴銨消毒液殺菌試驗(yàn)。取滅菌的試管，先加入1 ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，再加入1 ml “1.2.1”中不同濃度的苯扎溴銨消毒液，最后加入0.1 ml金黃色葡萄球菌的菌懸液，混和均勻。將試管置于32.5 ℃培養(yǎng)48 h后，觀察結(jié)果。若培養(yǎng)后呈澄明狀態(tài)，則表明該管無菌生長；若培養(yǎng)后呈現(xiàn)渾濁狀態(tài)，則表明該管有菌生長。從無菌生長的試管中找出最低消毒劑濃度的試管，即為最低抑菌濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 苯扎溴銨消毒液殺菌試驗(yàn)

分別對3種試驗(yàn)菌在每個時(shí)間段驗(yàn)證6株。從表1可以看出，當(dāng)苯扎溴銨消毒劑對大腸桿菌作用5、10、15 min時(shí)，分別只有1、1、3株顯示抑菌作用；對綠膿桿菌作用5、10、15 min時(shí)，分別只有0、1、2株顯示抑菌作用；對金色葡萄球菌作用5、10、15 min時(shí)，分別有2、6、6株顯示抑菌作用。由此可知，苯扎溴銨消毒劑對大腸桿菌和綠膿桿菌均沒有顯示出抑菌效果，對金色葡萄球菌顯示出抑菌效果。苯扎溴銨消毒劑作用于金黃色葡萄球菌的時(shí)間為5 min時(shí)，滅菌率達(dá)33.3%；作用10、15 min時(shí)，苯扎溴銨消毒劑對金黃色葡萄球菌有完全的殺菌效果。所以，苯扎溴銨消毒劑對金黃色葡萄球菌作用時(shí)間為10 min以上時(shí)具有完全的殺菌效果。

2.2 不同濃度的苯扎溴銨消毒液殺菌試驗(yàn)

從表2可以看出，試驗(yàn)共測金黃色葡萄球菌9株。當(dāng)苯扎溴銨消毒液濃度≤0.05%時(shí)，不能殺滅金黃色葡萄球菌；當(dāng)苯扎溴銨消毒液濃度為0.08%時(shí)，有5株金黃色葡萄球菌有耐藥性；當(dāng)苯扎溴銨消毒液濃度為0.10%時(shí)，還有1株金黃色葡萄球菌有耐藥性；當(dāng)苯扎溴銨消毒液濃度≥0.12%時(shí)，所有菌株都被殺滅。所以，當(dāng)用苯扎溴銨消毒液殺滅金黃色葡萄球菌時(shí)，選擇濃度大于0.10%時(shí)可殺滅全部菌株。

3 結(jié)論

苯扎溴銨為季銨鹽陽離子表面活性廣譜殺菌劑，能降低水溶液表面張力，改變細(xì)胞膜的通透性，使得細(xì)菌蛋白質(zhì)變性。其分子結(jié)構(gòu)中的疏水基因與親水基因可分別滲入細(xì)胞漿膜的類脂質(zhì)和蛋白質(zhì)層，使細(xì)菌的通透性發(fā)生變化，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)流失而使細(xì)菌死亡。研究表明，在不了解消毒劑的性狀、作用機(jī)理的情況下，不能隨意使用消毒劑對細(xì)菌進(jìn)行消毒，如苯扎溴銨消毒劑并不是對每種細(xì)菌都具有殺菌作用，只顯示對金黃色葡萄球菌具有殺菌效果，苯扎溴銨濃度大于0.10%且作用時(shí)間大于10 min時(shí)殺菌效果良好。這為在今后的使用過程避免了盲目性。

參考文獻(xiàn)

[1]

彭義剛，王秀云，都國基.苯扎溴銨消毒液抑菌試驗(yàn)及應(yīng)用效果觀察[J].中國消毒學(xué)雜志，2006，23（5）：397.

[2] 馬緒榮，蘇德模.藥品微生物學(xué)檢測手冊[K].北京：科學(xué)出版社，2000.

[3] 陳德源.醫(yī)學(xué)微生物學(xué)[M].4版.北京：人民衛(wèi)生出版社， 1996.

[4] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000.

[5] 汪穗福.微生物檢測驗(yàn)證技術(shù)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2005.