茸果鷓鴣花不同部位脂溶性成分研究

劉壽柏等

摘 要 為研究茸果鷓鴣花[Trichilia sinensis Bentv.]葉與根的脂溶性成分，采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行分離分析，通過Nist2008和Wiley275質(zhì)譜庫(kù)檢索分別鑒定各化學(xué)成分；經(jīng)面積歸一化法測(cè)定各樣品中化學(xué)成分的相對(duì)百分含量；用濾紙片瓊脂擴(kuò)散法測(cè)定其抗菌活性。結(jié)果分別從茸果鷓鴣花葉、根的脂溶性成分中分離出22、41個(gè)化合物，分別鑒定了其中的20、41個(gè)化合物，所鑒定的化合物其相對(duì)含量分別占各脂溶性成分總量的86.99%、91.33%?？咕钚越Y(jié)果表明：其脂溶性成分對(duì)金黃色葡萄球菌均有抑制作用。

關(guān)鍵詞 茸果鷓鴣花；根葉；脂溶性成分；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用；抗菌活性

中圖分類號(hào) Q949.718.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

Study on the Liposoluble Components from Different Parts

of Trichilia sinensis Bentv.

LIU Shoubai1，2，MEI Wenli2，3， GUO Zhikai2，3， ZENG Yanbo2，3， DAI Haofu2，3 *

1 Horticultural and Garden College， Hainan University， Haikou， Hainan 570228， China

2 Hainan Key Laboratory for Research and Development of Natural Products from Li Folk Medicine / Institute of Tropical

Bioscience and Biotechnology， Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences， Haikou， Hainan 571101， China

3 Haikou Key Laboratory for Research and Development of Tropical Natural Products， Haikou， Hainan 571101 China

Abstract The study was aimed to clarify the chemical constituents of the liposoluble extracts from the roots and leaves of T. sinensis Bentv. The chemical compounds were separated and analyzed by GC-MS， and identified by Mass Spectral Database Nist 2008 and Wiley 275. Antibacterial activity was assayed by paper disk diffusion method. The relative content of each component was determined by area normalization. 41， 22 compounds were separated and 41， 20 compounds were identified from the roots and leaves， respectively. The ratios of identified compounds accounted for 91.33%， 86.99% of total liposoluble components in different parts as well. These liposoluble extracts exhibited inhibitory effect on Staphylococcus aureus.

Key words T. sinensis Bentv.； Roots and leaves； Liposoluble Components； GC-MS； Antibacterial activity

doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2014.08.034

茸果鷓鴣花[Trichilia sinensis Bentv.]別名絨果海木、白骨走馬，是楝科（Meliaceae）鷓鴣花屬（Trichilia）植物，主要產(chǎn)于海南、廣東、廣西等?。▍^(qū)）[1-3]。茸果鷓鴣花的根、葉苦，寒，有輕毒，用于殺蟲、燥濕、止癢、止血[3]。鷓鴣花屬植物富含三萜（主要為四降三萜），甾體，酚性化合物，具有抗腫瘤、抗氧化、殺蟲等生物活性[4-9]。目前，有關(guān)茸果鷓鴣花的化學(xué)成分及生物活性報(bào)道較少，僅岳建民等[10]對(duì)其枝條乙酸乙酯萃取物的四降三萜類化學(xué)成分及抗炎活性的研究報(bào)道，但對(duì)同一植物不同部位的比較研究及其抗菌活性尚未見報(bào)道。本研究對(duì)茸果鷓鴣花根和葉的石油醚萃取物，經(jīng)GC-MS對(duì)其脂溶性成分及含量進(jìn)行了定性定量分析，用濾紙片瓊脂擴(kuò)散法測(cè)定其抗菌活性，并比較不同部位脂溶性成分的異同，為茸果鷓鴣花這一藥用植物資源在臨床的應(yīng)用及其資源的進(jìn)一步合理開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試材料 茸果鷓鴣花根、葉于2011年11月采于海南省萬寧市，由中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所代正福副研究員鑒定為楝科（Meliaceae）鷓鴣花屬（Trichilia）植物茸果鷓鴣花[T. sinensis Bentv.]，憑證標(biāo)本（20111120）存放于中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所。

1.1.2 儀器和試劑 美國(guó)安捷倫公司HP6890/5975C GC/MS聯(lián)用儀，色譜柱為ZB-5MSI 5% Phenyl-95% DiMethylpolysiloxane（30 m×0.25 mm×0.25 μm）彈性石英毛細(xì)管柱。乙醇、石油醚等均為國(guó)產(chǎn)AR。

1.2 方法

1.2.1 提取方法 樣品自然風(fēng)干，粉碎過5目篩，根及葉稱重均為500.0 g，分別用95%乙醇（2.0 L）室溫浸提3次，每次超聲處理30 min，合并提取液，減壓濃縮至無醇味。將乙醇提取物分散于水中成懸濁液，經(jīng)石油醚萃取后減壓濃縮得到油狀提取物。

1.2.2 脂溶性成分的分析鑒定 氣相色譜條件：柱溫50 ℃（保留2 min），以5 ℃/min升溫至310 ℃，保持10 min；汽化室溫度250 ℃；載氣為高純He（99.999%）；柱前壓7.62 psi，載氣流量1.0 mL/min；分流比20 ∶ 1，溶劑延遲時(shí)間：4.0 min。

質(zhì)譜條件：離子源為EI源；離子源溫度230 ℃；四極桿溫度150 ℃；電子能量70 eV；發(fā)射電流34.6 μA；倍增器電壓1364 V；接口溫度280 ℃；質(zhì)量范圍20～480 u。

數(shù)據(jù)處理及質(zhì)譜檢索：對(duì)總離子流圖中的各峰經(jīng)質(zhì)譜計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)系統(tǒng)檢索及核對(duì)Nist2008和Wiley275標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖進(jìn)行鑒定，用峰面積歸一化法測(cè)定了各化學(xué)成分的相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

1.2.3 抗菌活性測(cè)定 以金黃色葡萄球菌為指示菌，采用濾紙片法[11]測(cè)定脂溶性成分的抗菌活性。將金黃色葡萄球菌制成一定濃度的菌懸液（105～107 cfu/mL），用棉簽將其均勻涂布于供試無菌平板，制成含菌平板。選用直徑為6 mm 滅菌濾紙片，將脂溶性成分配成濃度為20 mg/mL樣品溶液，并加25 μL于濾紙片上，待溶劑揮干后放置于含菌平板上，每處理重復(fù)3次，以硫酸卡那霉素為陽(yáng)性對(duì)照，37 ℃恒溫培養(yǎng)。24 h后觀察結(jié)果，測(cè)量并記錄抑菌圈直徑。

2 結(jié)果與分析

2.1 GC-MS 分析結(jié)果

按上述條件對(duì)茸果鷓鴣花根、葉脂溶性成分進(jìn)行GC-MS分析，對(duì)總離子流圖中的各峰經(jīng)質(zhì)譜計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)系統(tǒng)檢索及核對(duì)Nist2008和Wiley275標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖進(jìn)行鑒定，采用色譜峰面積歸一化法計(jì)算其相對(duì)含量，具體結(jié)果見表1和表2，總離子流圖見圖1和圖2。

茸果鷓鴣花根中共鑒定出41個(gè)化合物，占總量的91.33%，含量大于1%的有15個(gè)，含量大于5%的有5個(gè)，其含量較高的成分依次為棕櫚酸甲酯（18.39%）、亞油酸甲酯（18.09%）、油酸甲酯（10.86%）、2，3-二甲基-4（E）-己烯酸（5.34%）、油酸（5.13%）；根脂溶性成分主要為脂肪酸類化合物。

茸果鷓鴣花葉脂溶性成分中共鑒定出20個(gè)化合物，占總量的86.99%，含量大于1%的有11個(gè)，含量大于5%的有6個(gè)，其含量較高的成分依次為穿貝海綿甾醇（26.41%）、麥角-5-烯醇（12.65%）、茂瑞烯醇（12.60%）、豆甾醇（7.04%）；葉脂溶性成分主要為甾體類化合物。

茸果鷓鴣花根與葉脂溶性成分中共有成分較少，共有成分分別為棕櫚酸甲酯、棕櫚酸、硬脂酸，且含量明顯不同，棕櫚酸甲酯根中含量比葉中高出17.67%，棕櫚酸葉中含量比根中高出1.96%。

2.2 活性測(cè)定結(jié)果

以濾紙片瓊脂擴(kuò)散法測(cè)定脂溶性成分的抗菌活性，結(jié)果表明，茸果鷓鴣花根與葉脂溶性成分對(duì)金黃色葡萄球菌均有抑制作用，抑菌圈直徑分別為11.23 mm（28.85 mm），8.15 mm（26.76 mm）（括號(hào)中為陽(yáng)性對(duì)照）。

3 討論與結(jié)論

本研究從茸果鷓鴣花根及葉中共鑒定出59種化學(xué)成分，這些化學(xué)成分在茸果鷓鴣花化學(xué)成分已有研究中均未見報(bào)道。根脂溶性成分主要為脂肪酸類化合物，此外，還有一些倍半萜、長(zhǎng)鏈醇、醛、含氮化合物等；葉脂溶性成分主要為甾體類化合物，此外也含有一些脂肪酸類化合物、含氮化合物等。茸果鷓鴣花與鷓鴣花在親緣關(guān)系上較近，為同屬植物，同屬植物化學(xué)成分的類型具有一定的相似性，然而本研究與前人關(guān)于該屬植物主要脂溶性成分的研究結(jié)果具有一定的差異，Agarwal G等[12]用水蒸氣蒸餾法從鷓鴣花根中得到的脂溶性成分主要成分是倍半萜類化合物（69.3%），包括β-花柏烯、α-畢橙茄醇、δ-杜松烯、順-去氫白菖烯、β-石竹烯、β-桉葉醇、金鐘烯醇等。Kumar R等[13]用乙酸乙酯提取的鷓鴣花根中脂溶性成分主要是倍半萜類化合物（30.7%），包括β-花柏烯、α-香柑油烯等；單萜類化合物（15.7%），包括甘菊環(huán)、Heminellitene等。Senthilkumar N等[14]用甲醇提取鷓鴣花葉中脂溶性成分包括棕櫚酸甲酯（13.4%）、萘（8.5%）、Benzene，1-（1，5-dimethyl-4-hexyl-4-methyl（5.2%）、Phenol，2，4-bis（1，1-dimethylethyl）（5.2%）以及一些含氮化合物（8.5%）等。Kumar R等[13]用乙酸乙酯提取的鷓鴣花葉中脂溶性成分主要是單萜類化合物 （9.1%）和倍半萜類化合物（9.7%），包括甘菊環(huán)、蒎烯、β-石竹烯等；這些差別可能與生長(zhǎng)環(huán)境、采集季節(jié)以及提取方法的差別有關(guān)。

本文首次對(duì)茸果鷓鴣花根與葉脂溶性化學(xué)成分及其抗金黃色葡萄球菌的活性進(jìn)行了初步研究，豐富了該植物的化學(xué)成分，拓寬了該藥用植物的用途，為尋找植物源抗菌劑提供了理論依據(jù)，抗菌活性可能是多種物質(zhì)協(xié)同作用的結(jié)果，但其主要抗菌物質(zhì)及其抗菌作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

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責(zé)任編輯：葉慶亮