參藶加顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

楊天悅 解穎 姜德友

【摘 要】目的：建立參藶加顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法鑒別人參、紅景天、淫羊藿；高效液相色譜法對(duì)人參皂苷進(jìn)行含量測定。結(jié)果：試驗(yàn)中薄層斑點(diǎn)清晰，陰性對(duì)照組無干擾。每袋參藶加顆粒中含人參皂苷總含量不低于99.6mg。結(jié)論：本法簡便、快速、準(zhǔn)確、靈敏，可作為參藶加顆粒質(zhì)量控制的有效方法。

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法；薄層色譜法；參藶加顆粒；人參皂苷。

【中圖分類號(hào)】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1004-7484（2014）04-2174-02

【Abstract】Objective：To establish the quality standard of Shenlijia Granule. Methods：TLC method of ginseng， rhodiola root， Epimedium； combined with HPLC was used to determine the content of ginsenoside. Result：The TLC spots were clear， without interference of negative control group. Particles with each bag of Shenlijia ginsenoside content of not less than 99.6mg.Conclusion：The method is simple， rapid， accurate， sensitive， can be used as an effective method for quality control of Shenlijia Granule.

【Key words】HPLC；TCL；Ginsenoside；Shenlijia Granule.

參藶加顆粒組方為黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)姜德友教授在《金匱要略》所載葶藶大棗瀉肺湯的基礎(chǔ)上結(jié)合多年臨床經(jīng)驗(yàn)加減而成。參藶加具有益氣溫陽、強(qiáng)心利水的功效，主要用于慢性充血性心力衰竭的治療，臨床療效顯著。為有效控制制劑質(zhì)量，采用薄層色譜法對(duì)人參、紅景天、淫羊藿進(jìn)行定性鑒別。用高效液相色譜法檢測制劑中的人參皂苷含量，作為控制該制劑的含量指標(biāo)，為制劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

20A型高效液相色譜儀、SPD-20A紫外—可見檢測器、LCsolution數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)工作站（日本島津）；Diamonsil -C18（4. 6 mm×200 mm， 5μm ）色譜柱（迪馬公司）。

人參皂苷Re、Rb1、Rg1標(biāo)準(zhǔn)品（110754-200822、110704-200420、110703-200726）；淫羊藿標(biāo)準(zhǔn)品（100737-200415），紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品（110736-200108），購自中國藥品生物檢定所；甲醇、乙腈（HPLC級(jí)，美國迪馬），其余為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1定性鑒別

2.1.1 人參的薄層鑒別[1，2] 分別精密稱取人參皂苷Rg1、Re、Rb1標(biāo)準(zhǔn)品，加甲醇制成每1m1各含0.2mg的混合溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照溶液。分別取人參藥材粉末1g、三批參藶加顆粒樣品及陰性樣品各5g置索氏提取器中，加三氯甲烷回流加熱3小時(shí)，藥渣揮干殘存溶劑，加水0.5ml拌勻潤濕后，加水飽和正丁醇10ml，超聲45min，吸取上清液，加氨水3倍量，取上層液蒸干加1ml甲醇溶解，作為對(duì)照藥材溶液。吸取各組溶液各1μl，分別點(diǎn)于同一以0.5%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（15：40：22：10）10℃以下放置后的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。在日光下，供試品、對(duì)照藥材與對(duì)照品在相應(yīng)位置上，顯相同的橙紅色斑點(diǎn)。而陰性對(duì)照品色譜中在相同位置處無則此斑點(diǎn)。（圖1）。表明本法可將人參與其它成分較好的分離開，專屬性好，靈敏度高。

2.1.2 紅景天薄層鑒別[1，3] 精密稱取紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。分別取紅景天藥材粉末約0.5g、 三批參藶加顆粒及陰性對(duì)照顆粒各5g，研細(xì)精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入甲醇10ml，搖勻，稱定重量，超聲30min，濾過，取續(xù)濾液分別作為對(duì)照藥材溶液、供試品溶液1、2、3，陰性對(duì)照溶液。吸取各組溶液10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-丙酮-水（6：3：1：1）的下層溶液為展開劑，展開，展距18cm，取出，晾干，置碘蒸氣中熏至斑點(diǎn)顯色清楚。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照品色譜中在相同位置處則無此斑點(diǎn)。（圖2）。表明本法可將紅景天與其它成分較好的分離開，專屬性好，靈敏度高。

2.1.3 淫羊藿薄層鑒別[1，4] 精密稱取淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)品2mg，加甲醇溶液定容于2ml容量瓶中，配成每1ml含1mg的淫羊藿苷甲醇溶液，作為對(duì)照品溶液。取淫羊藿藥材粉末約0.5g，三批參藶加顆粒、陰性對(duì)照顆粒各2g， 分別加入乙醇10ml，溫浸30min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖既芤?ml使之溶解，作為對(duì)照藥材溶液、供試品溶液1、2、3及陰性對(duì)照溶液。吸取各組溶液5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲苯-甲酸-水（10：1：1：1）為展開劑展開。噴以三氯化鋁試液后，在紫外光下顯相同的熒光斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照品色譜中在相同位置處無則此斑點(diǎn)。（圖3）。表明本法可將淫羊藿與其它成分較好的分離開，專屬性好，靈敏度高。

2.2 人參皂苷Rg1、Re、Rb1含量測定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性 色譜柱Diamonsil-C18（4.6mm×200mm，5μm）色譜柱；檢測波長為203nm；流速為1.3ml/min；柱溫40℃；流動(dòng)相是乙腈（A）-水（B）梯度洗脫。梯度洗脫程序見表1。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱定在60℃減壓干燥4小時(shí)的人參皂苷對(duì)照品Rg1、Re和Rb1適量，加甲醇制成每1ml含皂苷Rg1、Re、Rb1分別為0.228618mg、0.1936mg、0.2010mg的對(duì)照品混合溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 分別取參藶加顆粒三批樣品適量，研細(xì)，各取0.5g，精密稱定，加入70%乙醇溶液100ml，超聲提取兩小時(shí)，過濾，收集濾液，回收溶劑至干，用甲醇溶解轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中，定容，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 對(duì)照品來源及純度測定采用HLPC法測定，檢測人參皂苷Rg1、Re、Rb1標(biāo)準(zhǔn)品，純度符合要求，無雜質(zhì)峰。（圖4）

2.2.5 線性范圍的考察及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精確量取對(duì)照品混合溶液2μl、4μl、6μl、8μl、12μl、16μl和20μl，分別注入高效液相色譜儀，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得出線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)R值和線性范圍。結(jié)果見表2。

2.2.6 精密度考察 精確吸取對(duì)照品混和溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次， 10μl /次，測定人參皂苷Rg1、Re、Rb1的峰面積。經(jīng)計(jì)算，三種成分峰面積積分值的RSD分別為1.24%，1.56%，1.43%。表明儀器精密度高，穩(wěn)定可靠。

2.2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取供試參藶加顆粒5袋，精密稱定，分別按2.2.3項(xiàng)下的方法操作，平行制備5份樣品溶液，分別連續(xù)5次，每次進(jìn)樣10μl，測定人參皂苷Rg1，Re，Rb1的峰面積，計(jì)算含量。經(jīng)計(jì)算，人參皂苷Rg1，Re，Rb1的RSD分別為1.79%、1.87%、1.56%，表明測定方法重現(xiàn)性良好。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試參藶加顆粒，分別按2.2.3項(xiàng)下的方法操作，平行制備5份樣品溶液，測定48h內(nèi)溶液中人參三種皂苷隨時(shí)間變化的峰面積積分值，以考察其穩(wěn)定性。測定結(jié)果表明，三個(gè)峰面積積分值的RSD分別為1.07%、1.02%、1.36%。

2.2.9 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量參藶加顆粒5份，分別加入一定量的人參皂苷Rb1標(biāo)準(zhǔn)品，按2.2.3項(xiàng)下制備樣品溶液，定容10ml，進(jìn)樣量20μl，測定人參皂苷Rb1的含量，測得五次加樣回收率平均值為99.89%，RSD為1.65%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該測定方法測定結(jié)果準(zhǔn)確。

2.2.10 參藶加顆粒中人參皂苷的含量測定按2.2.3項(xiàng)下方法操作，制備供試品溶液，測定三批參藶加顆粒中三種人參皂苷的含量，測定結(jié)果見表3。復(fù)方中人參皂苷色譜圖見圖5，陰性對(duì)照色譜圖見圖6。

測定結(jié)果表明，參藶加顆粒中人參皂苷含量基本穩(wěn)定，考慮到藥材的來源及制劑生產(chǎn)、儲(chǔ)藏等因素的影響，在三種人參皂苷總含量平均值的基礎(chǔ)上上下浮動(dòng)20%制定本制劑含量限度，即每克本品中含人參皂苷Rg1不低于4.48mg，Re不低于0.78mg，Rb1不低于3.04mg。皂苷總含量不低于8.3mg。每袋中不低于99.6mg。

3 討論

人參為方中君藥，而人參中主要有效成分為人參皂苷類成分，其中人參皂苷Rg1、Re、Rb1是最能代表人參藥理活性物質(zhì)的成分?？梢苑磻?yīng)和控制本品的內(nèi)在質(zhì)量。因此本質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并不單獨(dú)限定其中某一種人參皂苷的含量，而是將人參皂苷Rg1、Re、Rb1的總含量作為控制制劑的含量標(biāo)準(zhǔn)是非常有意義的。通過以上試驗(yàn)證明本法簡便、穩(wěn)定性強(qiáng)、靈敏度高可作為參藶加顆粒質(zhì)量控制方法。

參考文獻(xiàn)：

[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：8.

[2] 黎陽，張鐵軍，劉素香，等.人參化學(xué)成分和藥理研究進(jìn)展[J].中草藥，2009，40（1）：164-166.

[3] 宋月英，馬玉珍，韓慧文，等.紅景天屬植物化學(xué)成分及藥理作用的研究進(jìn)展[J]. 中草藥：醫(yī)學(xué)版，2004，35（2） ：235-236

[4] 郭寒.淫羊藿對(duì)心血管系統(tǒng)的藥理作用[J].山西中醫(yī)，2009，25（7）：52-53.

作者簡介：

楊天悅（1967- ），女，博士研究生。

通訊作者簡介：

姜德友 （1960- ），男，教授，博士研究生導(dǎo)師，博士。研究方向：經(jīng)方治療內(nèi)科疑難雜病臨床與基礎(chǔ)研究。