褐黃水灰蘚2種提取液抑菌作用比較研究

馬海玲　劉俊華

摘 要：測定褐黃水灰蘚配子體提取液對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑菌活性，比較分析了2種提取液對受試菌的最小抑菌濃度。結果表明：褐黃水灰蘚無菌水、80%乙醇2種溶劑提取液對受試菌均有一定的抑制效果，且其醇提液抑菌活性更強。質量濃度為100g/L的乙醇提取液，對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑制率分別達69.98%、71.04%，乙醇提取液對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的MIC分別為12.5g/L、25g/L。

關鍵詞：褐黃水灰蘚提取液；抑菌作用；最小抑菌濃度；分光光度法

中圖分類號 S482.7 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）07-31-02

褐黃水灰蘚（Hygrohypnum ochraceum），又稱黃色水灰蘚，系柳葉蘚科（Amblystegiaceae）水灰蘚屬（Hygroypnum Lindb.）植物，廣泛分布于我國各省區(qū)[1]。已有研究表明，苔蘚植物能夠產生如萜類、黃酮類、脂肪酸等次生代謝產物及一些生物活性物質[2-3]，且多種苔蘚植物亦被證明有抑制微生物活性的作用[3-5]。本文以褐黃水灰蘚配子體為試材，以大腸桿菌、金黃色葡萄球菌為受試菌株，測定其抑菌活性，并比較不同溶劑提取液的抑菌效應與最低抑菌濃度。

1 材料與方法

1.1 材料 苔蘚樣品為褐黃水灰蘚，采自山東省境內鶴伴山區(qū)。供試菌株為大腸桿菌（Escherichia coli）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），均由濱州學院生物學實驗教學中心提供。

1.2 儀器 立式蒸汽滅菌器、LH系列層流潔凈工作臺、生化培養(yǎng)箱、FA1004N型電子天平、雙列六孔電熱恒溫水浴鍋、紫外-可見光分光光度計、可調萬用電熱爐、電冰箱、氣浴恒溫振蕩器等。

1.3 方法

1.3.1 母液的制備 用電子天平準確稱取2份褐黃水灰蘚配子體干粉（各10g），分別用無菌水、80%乙醇置于50℃恒溫水浴鍋內浸提24h后，過濾，重復提取1次，將2次浸提所得濾液合并，分別加入相應提取溶劑定容至100mL，得濃度為100g/L的提取母液。

1.3.2 最小抑菌濃度（MIC）的測定 以上述所得提取液母液，依次2倍稀釋得到質量濃度為50g/L、25g/L、12.5g/L、6.25g/L、3.125g/L的褐黃水灰蘚水提液和醇提液，分別加入0.1mL菌懸液，同時設生長對照（菌懸液+培養(yǎng)基），培養(yǎng)12h后觀察，無菌生長的最小處理濃度即為MIC。

1.3.3 提取液抑菌作用測定 采用分光光度計法[6]測定褐黃水灰蘚水浸提液對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的抑制作用。取裝有5mL已滅菌LB液體培養(yǎng)基試管，放入超凈工作臺中，紫外滅菌30min。在無菌室內，準確量取3mL褐黃水灰蘚水浸提液加入上述試管中，再用移液槍準確量取200μL菌懸液，另取1支裝有5mL已滅菌LB液體培養(yǎng)基試管，加入3mL褐黃水灰蘚提取液、200μL LB液體培養(yǎng)基，不接任何菌作為空白對照，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中搖床培養(yǎng)24h。然后分光光度計600nm下比色測定。每一個的梯度做3次重復。另取1支裝有5mL已滅菌LB液體培養(yǎng)基試管，加入200μL金黃色葡萄球菌菌懸液，3mL已滅菌LB液體培養(yǎng)基，作為含菌對照，同樣條件下培養(yǎng)24h后，分光光度計600nm下比色測定。

提取液抑菌率：抑菌率（%）=（1-處理組吸光值/對照組吸光值）×100。

2 結果與分析

2.1 最小抑菌濃度的測定 由表1、表2可知，不同提取液對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度不同：水提液對大腸桿菌的MIC為50g/L，而對金黃色葡萄球菌的MIC為25g/L；醇提液對2種受試菌的MIC分別為12.5g/L、25g/L?？傮w來看，本試驗中褐黃水灰蘚醇提液的抑菌效果較優(yōu)。

3 結論

本研究結果初步表明，作為尚無藥用記載的褐黃水灰蘚，其水提液、醇提液均對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌生長具有一定的抑制作用，且抑菌活性與提取液質量濃度間呈正相關關系；與水提液相比，其配子體乙醇提取液具有更強的抑菌能力。該蘚分布廣且生物量大，但若作為抑菌植物資源加以開發(fā)利用，仍需圍繞其抑菌機理及主要抑菌活性成分開展進一步研究。

參考文獻

[1]趙遵田，曹同.山東苔蘚植物志[M].濟南：山東科學技術出版社，1998.

[2]吳鵬程.苔蘚植物生物學[M].北京：科學出版社，1998.

[3]周江煜.苔蘚植物的化學活性成分研究概況[J].廣西中醫(yī)學院學報，2002，5（4）：84-87.

[4]婁紅祥.苔蘚植物化學與生物學[M].北京：北京科學技術出版社，2006.

[5]Asakawa Y.Biologically active compounds from bryophytes[J].Pure and Applied Chemistry，2007，79（4）：557-580.

[6]劉洪霞，韓址楠，姜詠棟，等. 蒼耳葉提取物與生物抑菌劑對幾種常見食品污染菌的體外協(xié)同抑菌作用及其作用機理[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2013，39（4）：17-21.

（責編：施婷婷）

摘 要：測定褐黃水灰蘚配子體提取液對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑菌活性，比較分析了2種提取液對受試菌的最小抑菌濃度。結果表明：褐黃水灰蘚無菌水、80%乙醇2種溶劑提取液對受試菌均有一定的抑制效果，且其醇提液抑菌活性更強。質量濃度為100g/L的乙醇提取液，對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑制率分別達69.98%、71.04%，乙醇提取液對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的MIC分別為12.5g/L、25g/L。

關鍵詞：褐黃水灰蘚提取液；抑菌作用；最小抑菌濃度；分光光度法

中圖分類號 S482.7 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）07-31-02

褐黃水灰蘚（Hygrohypnum ochraceum），又稱黃色水灰蘚，系柳葉蘚科（Amblystegiaceae）水灰蘚屬（Hygroypnum Lindb.）植物，廣泛分布于我國各省區(qū)[1]。已有研究表明，苔蘚植物能夠產生如萜類、黃酮類、脂肪酸等次生代謝產物及一些生物活性物質[2-3]，且多種苔蘚植物亦被證明有抑制微生物活性的作用[3-5]。本文以褐黃水灰蘚配子體為試材，以大腸桿菌、金黃色葡萄球菌為受試菌株，測定其抑菌活性，并比較不同溶劑提取液的抑菌效應與最低抑菌濃度。

1 材料與方法

1.1 材料 苔蘚樣品為褐黃水灰蘚，采自山東省境內鶴伴山區(qū)。供試菌株為大腸桿菌（Escherichia coli）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），均由濱州學院生物學實驗教學中心提供。

1.2 儀器 立式蒸汽滅菌器、LH系列層流潔凈工作臺、生化培養(yǎng)箱、FA1004N型電子天平、雙列六孔電熱恒溫水浴鍋、紫外-可見光分光光度計、可調萬用電熱爐、電冰箱、氣浴恒溫振蕩器等。

1.3 方法

1.3.1 母液的制備 用電子天平準確稱取2份褐黃水灰蘚配子體干粉（各10g），分別用無菌水、80%乙醇置于50℃恒溫水浴鍋內浸提24h后，過濾，重復提取1次，將2次浸提所得濾液合并，分別加入相應提取溶劑定容至100mL，得濃度為100g/L的提取母液。

1.3.2 最小抑菌濃度（MIC）的測定 以上述所得提取液母液，依次2倍稀釋得到質量濃度為50g/L、25g/L、12.5g/L、6.25g/L、3.125g/L的褐黃水灰蘚水提液和醇提液，分別加入0.1mL菌懸液，同時設生長對照（菌懸液+培養(yǎng)基），培養(yǎng)12h后觀察，無菌生長的最小處理濃度即為MIC。

1.3.3 提取液抑菌作用測定 采用分光光度計法[6]測定褐黃水灰蘚水浸提液對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的抑制作用。取裝有5mL已滅菌LB液體培養(yǎng)基試管，放入超凈工作臺中，紫外滅菌30min。在無菌室內，準確量取3mL褐黃水灰蘚水浸提液加入上述試管中，再用移液槍準確量取200μL菌懸液，另取1支裝有5mL已滅菌LB液體培養(yǎng)基試管，加入3mL褐黃水灰蘚提取液、200μL LB液體培養(yǎng)基，不接任何菌作為空白對照，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中搖床培養(yǎng)24h。然后分光光度計600nm下比色測定。每一個的梯度做3次重復。另取1支裝有5mL已滅菌LB液體培養(yǎng)基試管，加入200μL金黃色葡萄球菌菌懸液，3mL已滅菌LB液體培養(yǎng)基，作為含菌對照，同樣條件下培養(yǎng)24h后，分光光度計600nm下比色測定。

提取液抑菌率：抑菌率（%）=（1-處理組吸光值/對照組吸光值）×100。

2 結果與分析

2.1 最小抑菌濃度的測定 由表1、表2可知，不同提取液對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度不同：水提液對大腸桿菌的MIC為50g/L，而對金黃色葡萄球菌的MIC為25g/L；醇提液對2種受試菌的MIC分別為12.5g/L、25g/L。總體來看，本試驗中褐黃水灰蘚醇提液的抑菌效果較優(yōu)。

3 結論

本研究結果初步表明，作為尚無藥用記載的褐黃水灰蘚，其水提液、醇提液均對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌生長具有一定的抑制作用，且抑菌活性與提取液質量濃度間呈正相關關系；與水提液相比，其配子體乙醇提取液具有更強的抑菌能力。該蘚分布廣且生物量大，但若作為抑菌植物資源加以開發(fā)利用，仍需圍繞其抑菌機理及主要抑菌活性成分開展進一步研究。

參考文獻

[1]趙遵田，曹同.山東苔蘚植物志[M].濟南：山東科學技術出版社，1998.

[2]吳鵬程.苔蘚植物生物學[M].北京：科學出版社，1998.

[3]周江煜.苔蘚植物的化學活性成分研究概況[J].廣西中醫(yī)學院學報，2002，5（4）：84-87.

[4]婁紅祥.苔蘚植物化學與生物學[M].北京：北京科學技術出版社，2006.

[5]Asakawa Y.Biologically active compounds from bryophytes[J].Pure and Applied Chemistry，2007，79（4）：557-580.

[6]劉洪霞，韓址楠，姜詠棟，等. 蒼耳葉提取物與生物抑菌劑對幾種常見食品污染菌的體外協(xié)同抑菌作用及其作用機理[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2013，39（4）：17-21.

（責編：施婷婷）

摘 要：測定褐黃水灰蘚配子體提取液對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑菌活性，比較分析了2種提取液對受試菌的最小抑菌濃度。結果表明：褐黃水灰蘚無菌水、80%乙醇2種溶劑提取液對受試菌均有一定的抑制效果，且其醇提液抑菌活性更強。質量濃度為100g/L的乙醇提取液，對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑制率分別達69.98%、71.04%，乙醇提取液對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的MIC分別為12.5g/L、25g/L。

關鍵詞：褐黃水灰蘚提取液；抑菌作用；最小抑菌濃度；分光光度法

中圖分類號 S482.7 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）07-31-02

褐黃水灰蘚（Hygrohypnum ochraceum），又稱黃色水灰蘚，系柳葉蘚科（Amblystegiaceae）水灰蘚屬（Hygroypnum Lindb.）植物，廣泛分布于我國各省區(qū)[1]。已有研究表明，苔蘚植物能夠產生如萜類、黃酮類、脂肪酸等次生代謝產物及一些生物活性物質[2-3]，且多種苔蘚植物亦被證明有抑制微生物活性的作用[3-5]。本文以褐黃水灰蘚配子體為試材，以大腸桿菌、金黃色葡萄球菌為受試菌株，測定其抑菌活性，并比較不同溶劑提取液的抑菌效應與最低抑菌濃度。

1 材料與方法

1.1 材料 苔蘚樣品為褐黃水灰蘚，采自山東省境內鶴伴山區(qū)。供試菌株為大腸桿菌（Escherichia coli）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），均由濱州學院生物學實驗教學中心提供。

1.2 儀器 立式蒸汽滅菌器、LH系列層流潔凈工作臺、生化培養(yǎng)箱、FA1004N型電子天平、雙列六孔電熱恒溫水浴鍋、紫外-可見光分光光度計、可調萬用電熱爐、電冰箱、氣浴恒溫振蕩器等。

1.3 方法

1.3.1 母液的制備 用電子天平準確稱取2份褐黃水灰蘚配子體干粉（各10g），分別用無菌水、80%乙醇置于50℃恒溫水浴鍋內浸提24h后，過濾，重復提取1次，將2次浸提所得濾液合并，分別加入相應提取溶劑定容至100mL，得濃度為100g/L的提取母液。

1.3.2 最小抑菌濃度（MIC）的測定 以上述所得提取液母液，依次2倍稀釋得到質量濃度為50g/L、25g/L、12.5g/L、6.25g/L、3.125g/L的褐黃水灰蘚水提液和醇提液，分別加入0.1mL菌懸液，同時設生長對照（菌懸液+培養(yǎng)基），培養(yǎng)12h后觀察，無菌生長的最小處理濃度即為MIC。

1.3.3 提取液抑菌作用測定 采用分光光度計法[6]測定褐黃水灰蘚水浸提液對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的抑制作用。取裝有5mL已滅菌LB液體培養(yǎng)基試管，放入超凈工作臺中，紫外滅菌30min。在無菌室內，準確量取3mL褐黃水灰蘚水浸提液加入上述試管中，再用移液槍準確量取200μL菌懸液，另取1支裝有5mL已滅菌LB液體培養(yǎng)基試管，加入3mL褐黃水灰蘚提取液、200μL LB液體培養(yǎng)基，不接任何菌作為空白對照，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中搖床培養(yǎng)24h。然后分光光度計600nm下比色測定。每一個的梯度做3次重復。另取1支裝有5mL已滅菌LB液體培養(yǎng)基試管，加入200μL金黃色葡萄球菌菌懸液，3mL已滅菌LB液體培養(yǎng)基，作為含菌對照，同樣條件下培養(yǎng)24h后，分光光度計600nm下比色測定。

提取液抑菌率：抑菌率（%）=（1-處理組吸光值/對照組吸光值）×100。

2 結果與分析

2.1 最小抑菌濃度的測定 由表1、表2可知，不同提取液對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度不同：水提液對大腸桿菌的MIC為50g/L，而對金黃色葡萄球菌的MIC為25g/L；醇提液對2種受試菌的MIC分別為12.5g/L、25g/L?？傮w來看，本試驗中褐黃水灰蘚醇提液的抑菌效果較優(yōu)。

3 結論

本研究結果初步表明，作為尚無藥用記載的褐黃水灰蘚，其水提液、醇提液均對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌生長具有一定的抑制作用，且抑菌活性與提取液質量濃度間呈正相關關系；與水提液相比，其配子體乙醇提取液具有更強的抑菌能力。該蘚分布廣且生物量大，但若作為抑菌植物資源加以開發(fā)利用，仍需圍繞其抑菌機理及主要抑菌活性成分開展進一步研究。

參考文獻

[1]趙遵田，曹同.山東苔蘚植物志[M].濟南：山東科學技術出版社，1998.

[2]吳鵬程.苔蘚植物生物學[M].北京：科學出版社，1998.

[3]周江煜.苔蘚植物的化學活性成分研究概況[J].廣西中醫(yī)學院學報，2002，5（4）：84-87.

[4]婁紅祥.苔蘚植物化學與生物學[M].北京：北京科學技術出版社，2006.

[5]Asakawa Y.Biologically active compounds from bryophytes[J].Pure and Applied Chemistry，2007，79（4）：557-580.

[6]劉洪霞，韓址楠，姜詠棟，等. 蒼耳葉提取物與生物抑菌劑對幾種常見食品污染菌的體外協(xié)同抑菌作用及其作用機理[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2013，39（4）：17-21.

（責編：施婷婷）