不同激素濃度對(duì)羅漢果愈傷組織誘導(dǎo)的影響

伍琴文等

摘 要：以羅漢果（Siraitia grosvenorii）優(yōu)良株系的幼嫩莖段作為試驗(yàn)材料，經(jīng)過消毒處理后，剪成帶腋芽小段，探討植物激素細(xì)胞分裂素6-BA（6-芐基嘌呤）與生長激素IAA（吲哚乙酸）不同濃度配比和細(xì)胞分裂素6-BA與生長激素NAA（萘乙酸）不同濃度配比對(duì)其愈傷組織誘導(dǎo)的影響，以建立羅漢果高效再生系統(tǒng)。結(jié)果表明：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L+3%蔗糖+3.5g/L瓊脂為羅漢果愈傷組織最適宜的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，誘導(dǎo)率達(dá)83.33%。

關(guān)鍵詞：羅漢果；植物激素；愈傷組織；誘導(dǎo)率

中圖分類號(hào) S687.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2014）07-29-03

羅漢果（Siraitia grosvenorii）為多年生草質(zhì)藤本宿莖植物，屬葫蘆科，其成熟果實(shí)具有清熱、潤肺止咳等功效，是我國特產(chǎn)的傳統(tǒng)中藥和廣西特有的藥用植物，原產(chǎn)于廣西北部地區(qū)。羅漢果種苗主要采用塊莖和壓蔓進(jìn)行無性繁殖，繁殖系數(shù)低。為了擴(kuò)大羅漢果的繁殖，國內(nèi)多家科研院所都在重點(diǎn)研究利用組培快繁方法作為羅漢果種苗繁育的主要手段[1-3]。

目前羅漢果莖段愈傷組織誘導(dǎo)所使用的激素主要有6-BA、IAA、NAA、IBA等。而大部分學(xué)者主要采用的是6-BA和IBA 2種激素組合來探究對(duì)羅漢果愈傷組織誘導(dǎo)與生長的影響，效果一般。使用6-BA和IBA 2種植物激素所誘導(dǎo)的愈傷組織很少，分化程度也比較低，從而影響了其成活率[4]。同樣與IBA作為生長激素的IAA和NAA，在愈傷組織誘導(dǎo)中從6-BA和IAA 2種激素組合與6-BA和NAA 2種激素組合方面探究的比較少[5]。本試驗(yàn)通過研究植物激素對(duì)羅漢果莖段愈傷組織誘導(dǎo)和生長的影響，以探究出更好、更經(jīng)濟(jì)的羅漢果愈傷組織誘導(dǎo)的生長激素濃度配比，可以為進(jìn)一步完善羅漢果的快繁體系提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 試驗(yàn)所采集的羅漢果外植體來自衡陽市興民農(nóng)業(yè)有限公司羅漢果生產(chǎn)基地。

1.2 培養(yǎng)基 以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，蔗糖3.0%、瓊脂3.5g/L，pH5.8～6.0。

第一組：在MS基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加不同濃度的植物激素6-BA（0.5、1.0、1.5mg/L）+IAA（0.01、0.05、0.1mg/L）。

第二組：在MS基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加不同濃度的植物激素6-BA（0.5、1.0、1.5mg/L）+NAA（0.01、0.05、0.1mg/L）。培養(yǎng)基配制后都經(jīng)121℃高壓滅菌30min后待用。

1.3 培養(yǎng)條件 接種好的培養(yǎng)瓶放在恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度為（25±1）℃，暗培養(yǎng)一星期后，光培養(yǎng)每天光照12h/d，光照強(qiáng)度2 000lx[6]。

1.4 方法 取健壯且無病蟲害嫩梢，直接拿回實(shí)驗(yàn)室，用自來水沖洗干凈后，再?zèng)_洗60min。再用75%的酒精進(jìn)行消毒30s，用無菌水沖洗3～4次，再加入0.1%升汞溶液放在振蕩器上進(jìn)行振蕩消毒6～8min，然后用無菌水沖洗4次以上，瀝干水分。將滅菌好的莖段切成1cm左右?guī)б秆康男《?，形態(tài)學(xué)上端朝上，形態(tài)學(xué)下端朝下，頂部盡量剛好與培養(yǎng)基表面接觸，蓋好瓶蓋。及時(shí)放入光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

2 結(jié)果

2.1 6-BA和IAA不同濃度配比對(duì)羅漢果愈傷組織誘導(dǎo)和生長的影響 將處理好的羅漢果莖段接入第一組1～9號(hào)不同濃度培養(yǎng)基的處理中，4周左右后形成黃白色愈傷組織，且長勢(shì)良好，并記錄數(shù)據(jù)。

如表1所示，9種培養(yǎng)基均能誘導(dǎo)出不定芽，但不同濃度植物激素組合對(duì)其誘導(dǎo)率有很大影響，由于植物激素生理作用的雙重性，當(dāng)IAA一定時(shí)，隨著6-BA的濃度增大，誘導(dǎo)率首先逐漸上升，在濃度為1.0mg/L時(shí)達(dá)到最大，隨后又逐漸下降，且變化趨勢(shì)較大。而當(dāng)6-BA濃度一定時(shí)，隨著IAA濃度的增大，誘導(dǎo)率首先逐漸上升，在濃度為0.05mg/L時(shí)達(dá)到最大，隨后又逐漸下降，且變化趨勢(shì)不大。這也驗(yàn)證了分裂素比生長激素對(duì)羅漢果愈傷組織誘導(dǎo)的影響大。通過圖1可知：以5號(hào)處理即6-BA 1.0mg/L+IAA 0.05mg/L的組合誘導(dǎo)率最高，達(dá)66.67%。

3 討論

羅漢果外植體愈傷組織誘導(dǎo)成功與否，除了要選擇正確的基本培養(yǎng)基和適合于組培苗生長的光照時(shí)間和光照強(qiáng)度、培養(yǎng)溫度及濕度以外，最主要的影響因素還在于選用適宜的激素種類和濃度配比。外植體的脫分化、再分化過程，試管苗根、莖、葉等器官的發(fā)生，往往都需要向培養(yǎng)基中添加植物激素或生長調(diào)節(jié)劑。對(duì)激素種類和濃度的篩選始終是組培工作的重點(diǎn)和難點(diǎn)。

植物生長激素在離體組織愈傷組織誘導(dǎo)方法中對(duì)植物的生長發(fā)育表現(xiàn)出雙重作用：一般生長素在低濃度時(shí)可以促進(jìn)生長，濃度較高則會(huì)抑制生長，如果濃度更高則會(huì)使植物受傷，其發(fā)揮的生理作用會(huì)因濃度、植物的種類、器官、細(xì)胞的年齡不同而有差異。而細(xì)胞分裂素如6-BA等，主要生理功能就是促進(jìn)細(xì)胞的分裂，而又主要是對(duì)細(xì)胞質(zhì)的分裂起作用，所以，細(xì)胞分裂素促進(jìn)細(xì)胞分裂的效應(yīng)只有在生長素存在的前提下才能表現(xiàn)出來。

對(duì)于不同激素在羅漢果離體組織誘導(dǎo)的影響有很多的研究，例如：宋鵬飛、唐國興等利用羅漢果離體葉片在MS+6-BA 1.0mg/L+IBA 0.5mg/L培養(yǎng)基中誘導(dǎo)愈傷組織[7]；林榮、王秀琴等采用羅漢果離體莖段在MS+6-

BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L培養(yǎng)基中誘導(dǎo)愈傷組織[8]；黃春梅、曾黎輝等采用羅漢果葉片在6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L+

2，4-D 0.5mg/L培養(yǎng)基中誘導(dǎo)愈傷組織，但誘導(dǎo)率都比較低且誘導(dǎo)時(shí)間較長[9]；付長亮、馬小軍等采用羅漢果離體莖段在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L培養(yǎng)基中誘導(dǎo)愈傷組織，并發(fā)現(xiàn)對(duì)羅漢果莖段增值系數(shù)影響最大的是6-BA，其次是NAA，最小的是IBA[10]。本試驗(yàn)也驗(yàn)證了這一規(guī)律：6-BA對(duì)羅漢果愈傷組織誘導(dǎo)的影響比IAA或NAA要大。

參考文獻(xiàn)

[1]付長亮，馬小軍，白隆華，等.羅漢果組織培養(yǎng)研究進(jìn)展[J].中國中藥雜志，2005，30（5）： 325-328.

[2]吳金壽，劉月學(xué)，賴鐘雄，等.應(yīng)用生物技術(shù)發(fā)展羅漢果產(chǎn)業(yè)化的探討[J].廈門大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2001，40 （增刊2）： 220-224.

[3]李典鵬，張厚瑞.廣西特產(chǎn)植物羅漢果的研究與應(yīng)用[J].廣西植物，2000，20（3）： 270-276.

[4]李代麗，康向陽.植物愈傷組織培養(yǎng)中內(nèi)外源激素效應(yīng)的研究現(xiàn)狀與展望[J].生物技術(shù)通訊，2007，18（3）： 546-548.

[5]郎多勇，張新惠，孫志國.外援激素配比對(duì)藥用植物鎖陽愈傷組織誘導(dǎo)的影響[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2012，23（10）： 2 463-2 465.

[6]顏呂敬.植物組織培養(yǎng)手冊(cè)[M].上海： 上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1990.

[7]宋鵬飛，唐興國，周全，等.羅漢果葉片離體再生快繁技術(shù)[J].武漢生物工程學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，6（1）： 16-19.

[8]林榮，王秀琴，王潤珍，等.羅漢果莖段離體培養(yǎng)研究[J].廣西植物，1985，5（3）： 273-277.

[9]黃春梅，曾黎輝，吳金壽，等.羅漢果葉片培養(yǎng)及其不定芽形成的細(xì)胞學(xué)觀察[J].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，27（6）： 639-642.

[10]付長亮，馬小軍，白隆華，等.羅漢果脫毒苗的快速繁殖研究[J].中草藥，2005，36（8）： 1 225-1 229. （責(zé)編：施婷婷）

摘 要：以羅漢果（Siraitia grosvenorii）優(yōu)良株系的幼嫩莖段作為試驗(yàn)材料，經(jīng)過消毒處理后，剪成帶腋芽小段，探討植物激素細(xì)胞分裂素6-BA（6-芐基嘌呤）與生長激素IAA（吲哚乙酸）不同濃度配比和細(xì)胞分裂素6-BA與生長激素NAA（萘乙酸）不同濃度配比對(duì)其愈傷組織誘導(dǎo)的影響，以建立羅漢果高效再生系統(tǒng)。結(jié)果表明：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L+3%蔗糖+3.5g/L瓊脂為羅漢果愈傷組織最適宜的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，誘導(dǎo)率達(dá)83.33%。

關(guān)鍵詞：羅漢果；植物激素；愈傷組織；誘導(dǎo)率

中圖分類號(hào) S687.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2014）07-29-03

羅漢果（Siraitia grosvenorii）為多年生草質(zhì)藤本宿莖植物，屬葫蘆科，其成熟果實(shí)具有清熱、潤肺止咳等功效，是我國特產(chǎn)的傳統(tǒng)中藥和廣西特有的藥用植物，原產(chǎn)于廣西北部地區(qū)。羅漢果種苗主要采用塊莖和壓蔓進(jìn)行無性繁殖，繁殖系數(shù)低。為了擴(kuò)大羅漢果的繁殖，國內(nèi)多家科研院所都在重點(diǎn)研究利用組培快繁方法作為羅漢果種苗繁育的主要手段[1-3]。

目前羅漢果莖段愈傷組織誘導(dǎo)所使用的激素主要有6-BA、IAA、NAA、IBA等。而大部分學(xué)者主要采用的是6-BA和IBA 2種激素組合來探究對(duì)羅漢果愈傷組織誘導(dǎo)與生長的影響，效果一般。使用6-BA和IBA 2種植物激素所誘導(dǎo)的愈傷組織很少，分化程度也比較低，從而影響了其成活率[4]。同樣與IBA作為生長激素的IAA和NAA，在愈傷組織誘導(dǎo)中從6-BA和IAA 2種激素組合與6-BA和NAA 2種激素組合方面探究的比較少[5]。本試驗(yàn)通過研究植物激素對(duì)羅漢果莖段愈傷組織誘導(dǎo)和生長的影響，以探究出更好、更經(jīng)濟(jì)的羅漢果愈傷組織誘導(dǎo)的生長激素濃度配比，可以為進(jìn)一步完善羅漢果的快繁體系提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 試驗(yàn)所采集的羅漢果外植體來自衡陽市興民農(nóng)業(yè)有限公司羅漢果生產(chǎn)基地。

1.2 培養(yǎng)基 以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，蔗糖3.0%、瓊脂3.5g/L，pH5.8～6.0。

第一組：在MS基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加不同濃度的植物激素6-BA（0.5、1.0、1.5mg/L）+IAA（0.01、0.05、0.1mg/L）。

第二組：在MS基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加不同濃度的植物激素6-BA（0.5、1.0、1.5mg/L）+NAA（0.01、0.05、0.1mg/L）。培養(yǎng)基配制后都經(jīng)121℃高壓滅菌30min后待用。

1.3 培養(yǎng)條件 接種好的培養(yǎng)瓶放在恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度為（25±1）℃，暗培養(yǎng)一星期后，光培養(yǎng)每天光照12h/d，光照強(qiáng)度2 000lx[6]。

1.4 方法 取健壯且無病蟲害嫩梢，直接拿回實(shí)驗(yàn)室，用自來水沖洗干凈后，再?zèng)_洗60min。再用75%的酒精進(jìn)行消毒30s，用無菌水沖洗3～4次，再加入0.1%升汞溶液放在振蕩器上進(jìn)行振蕩消毒6～8min，然后用無菌水沖洗4次以上，瀝干水分。將滅菌好的莖段切成1cm左右?guī)б秆康男《?，形態(tài)學(xué)上端朝上，形態(tài)學(xué)下端朝下，頂部盡量剛好與培養(yǎng)基表面接觸，蓋好瓶蓋。及時(shí)放入光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

2 結(jié)果

2.1 6-BA和IAA不同濃度配比對(duì)羅漢果愈傷組織誘導(dǎo)和生長的影響 將處理好的羅漢果莖段接入第一組1～9號(hào)不同濃度培養(yǎng)基的處理中，4周左右后形成黃白色愈傷組織，且長勢(shì)良好，并記錄數(shù)據(jù)。

如表1所示，9種培養(yǎng)基均能誘導(dǎo)出不定芽，但不同濃度植物激素組合對(duì)其誘導(dǎo)率有很大影響，由于植物激素生理作用的雙重性，當(dāng)IAA一定時(shí)，隨著6-BA的濃度增大，誘導(dǎo)率首先逐漸上升，在濃度為1.0mg/L時(shí)達(dá)到最大，隨后又逐漸下降，且變化趨勢(shì)較大。而當(dāng)6-BA濃度一定時(shí)，隨著IAA濃度的增大，誘導(dǎo)率首先逐漸上升，在濃度為0.05mg/L時(shí)達(dá)到最大，隨后又逐漸下降，且變化趨勢(shì)不大。這也驗(yàn)證了分裂素比生長激素對(duì)羅漢果愈傷組織誘導(dǎo)的影響大。通過圖1可知：以5號(hào)處理即6-BA 1.0mg/L+IAA 0.05mg/L的組合誘導(dǎo)率最高，達(dá)66.67%。

3 討論

羅漢果外植體愈傷組織誘導(dǎo)成功與否，除了要選擇正確的基本培養(yǎng)基和適合于組培苗生長的光照時(shí)間和光照強(qiáng)度、培養(yǎng)溫度及濕度以外，最主要的影響因素還在于選用適宜的激素種類和濃度配比。外植體的脫分化、再分化過程，試管苗根、莖、葉等器官的發(fā)生，往往都需要向培養(yǎng)基中添加植物激素或生長調(diào)節(jié)劑。對(duì)激素種類和濃度的篩選始終是組培工作的重點(diǎn)和難點(diǎn)。

植物生長激素在離體組織愈傷組織誘導(dǎo)方法中對(duì)植物的生長發(fā)育表現(xiàn)出雙重作用：一般生長素在低濃度時(shí)可以促進(jìn)生長，濃度較高則會(huì)抑制生長，如果濃度更高則會(huì)使植物受傷，其發(fā)揮的生理作用會(huì)因濃度、植物的種類、器官、細(xì)胞的年齡不同而有差異。而細(xì)胞分裂素如6-BA等，主要生理功能就是促進(jìn)細(xì)胞的分裂，而又主要是對(duì)細(xì)胞質(zhì)的分裂起作用，所以，細(xì)胞分裂素促進(jìn)細(xì)胞分裂的效應(yīng)只有在生長素存在的前提下才能表現(xiàn)出來。

對(duì)于不同激素在羅漢果離體組織誘導(dǎo)的影響有很多的研究，例如：宋鵬飛、唐國興等利用羅漢果離體葉片在MS+6-BA 1.0mg/L+IBA 0.5mg/L培養(yǎng)基中誘導(dǎo)愈傷組織[7]；林榮、王秀琴等采用羅漢果離體莖段在MS+6-

BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L培養(yǎng)基中誘導(dǎo)愈傷組織[8]；黃春梅、曾黎輝等采用羅漢果葉片在6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L+

2，4-D 0.5mg/L培養(yǎng)基中誘導(dǎo)愈傷組織，但誘導(dǎo)率都比較低且誘導(dǎo)時(shí)間較長[9]；付長亮、馬小軍等采用羅漢果離體莖段在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L培養(yǎng)基中誘導(dǎo)愈傷組織，并發(fā)現(xiàn)對(duì)羅漢果莖段增值系數(shù)影響最大的是6-BA，其次是NAA，最小的是IBA[10]。本試驗(yàn)也驗(yàn)證了這一規(guī)律：6-BA對(duì)羅漢果愈傷組織誘導(dǎo)的影響比IAA或NAA要大。

參考文獻(xiàn)

[1]付長亮，馬小軍，白隆華，等.羅漢果組織培養(yǎng)研究進(jìn)展[J].中國中藥雜志，2005，30（5）： 325-328.

[2]吳金壽，劉月學(xué)，賴鐘雄，等.應(yīng)用生物技術(shù)發(fā)展羅漢果產(chǎn)業(yè)化的探討[J].廈門大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2001，40 （增刊2）： 220-224.

[3]李典鵬，張厚瑞.廣西特產(chǎn)植物羅漢果的研究與應(yīng)用[J].廣西植物，2000，20（3）： 270-276.

[4]李代麗，康向陽.植物愈傷組織培養(yǎng)中內(nèi)外源激素效應(yīng)的研究現(xiàn)狀與展望[J].生物技術(shù)通訊，2007，18（3）： 546-548.

[5]郎多勇，張新惠，孫志國.外援激素配比對(duì)藥用植物鎖陽愈傷組織誘導(dǎo)的影響[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2012，23（10）： 2 463-2 465.

[6]顏呂敬.植物組織培養(yǎng)手冊(cè)[M].上海： 上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1990.

[7]宋鵬飛，唐興國，周全，等.羅漢果葉片離體再生快繁技術(shù)[J].武漢生物工程學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，6（1）： 16-19.

[8]林榮，王秀琴，王潤珍，等.羅漢果莖段離體培養(yǎng)研究[J].廣西植物，1985，5（3）： 273-277.

[9]黃春梅，曾黎輝，吳金壽，等.羅漢果葉片培養(yǎng)及其不定芽形成的細(xì)胞學(xué)觀察[J].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，27（6）： 639-642.

[10]付長亮，馬小軍，白隆華，等.羅漢果脫毒苗的快速繁殖研究[J].中草藥，2005，36（8）： 1 225-1 229. （責(zé)編：施婷婷）

摘 要：以羅漢果（Siraitia grosvenorii）優(yōu)良株系的幼嫩莖段作為試驗(yàn)材料，經(jīng)過消毒處理后，剪成帶腋芽小段，探討植物激素細(xì)胞分裂素6-BA（6-芐基嘌呤）與生長激素IAA（吲哚乙酸）不同濃度配比和細(xì)胞分裂素6-BA與生長激素NAA（萘乙酸）不同濃度配比對(duì)其愈傷組織誘導(dǎo)的影響，以建立羅漢果高效再生系統(tǒng)。結(jié)果表明：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L+3%蔗糖+3.5g/L瓊脂為羅漢果愈傷組織最適宜的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，誘導(dǎo)率達(dá)83.33%。

關(guān)鍵詞：羅漢果；植物激素；愈傷組織；誘導(dǎo)率

中圖分類號(hào) S687.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2014）07-29-03

羅漢果（Siraitia grosvenorii）為多年生草質(zhì)藤本宿莖植物，屬葫蘆科，其成熟果實(shí)具有清熱、潤肺止咳等功效，是我國特產(chǎn)的傳統(tǒng)中藥和廣西特有的藥用植物，原產(chǎn)于廣西北部地區(qū)。羅漢果種苗主要采用塊莖和壓蔓進(jìn)行無性繁殖，繁殖系數(shù)低。為了擴(kuò)大羅漢果的繁殖，國內(nèi)多家科研院所都在重點(diǎn)研究利用組培快繁方法作為羅漢果種苗繁育的主要手段[1-3]。

目前羅漢果莖段愈傷組織誘導(dǎo)所使用的激素主要有6-BA、IAA、NAA、IBA等。而大部分學(xué)者主要采用的是6-BA和IBA 2種激素組合來探究對(duì)羅漢果愈傷組織誘導(dǎo)與生長的影響，效果一般。使用6-BA和IBA 2種植物激素所誘導(dǎo)的愈傷組織很少，分化程度也比較低，從而影響了其成活率[4]。同樣與IBA作為生長激素的IAA和NAA，在愈傷組織誘導(dǎo)中從6-BA和IAA 2種激素組合與6-BA和NAA 2種激素組合方面探究的比較少[5]。本試驗(yàn)通過研究植物激素對(duì)羅漢果莖段愈傷組織誘導(dǎo)和生長的影響，以探究出更好、更經(jīng)濟(jì)的羅漢果愈傷組織誘導(dǎo)的生長激素濃度配比，可以為進(jìn)一步完善羅漢果的快繁體系提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 試驗(yàn)所采集的羅漢果外植體來自衡陽市興民農(nóng)業(yè)有限公司羅漢果生產(chǎn)基地。

1.2 培養(yǎng)基 以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，蔗糖3.0%、瓊脂3.5g/L，pH5.8～6.0。

第一組：在MS基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加不同濃度的植物激素6-BA（0.5、1.0、1.5mg/L）+IAA（0.01、0.05、0.1mg/L）。

第二組：在MS基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加不同濃度的植物激素6-BA（0.5、1.0、1.5mg/L）+NAA（0.01、0.05、0.1mg/L）。培養(yǎng)基配制后都經(jīng)121℃高壓滅菌30min后待用。

1.3 培養(yǎng)條件 接種好的培養(yǎng)瓶放在恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度為（25±1）℃，暗培養(yǎng)一星期后，光培養(yǎng)每天光照12h/d，光照強(qiáng)度2 000lx[6]。

1.4 方法 取健壯且無病蟲害嫩梢，直接拿回實(shí)驗(yàn)室，用自來水沖洗干凈后，再?zèng)_洗60min。再用75%的酒精進(jìn)行消毒30s，用無菌水沖洗3～4次，再加入0.1%升汞溶液放在振蕩器上進(jìn)行振蕩消毒6～8min，然后用無菌水沖洗4次以上，瀝干水分。將滅菌好的莖段切成1cm左右?guī)б秆康男《?，形態(tài)學(xué)上端朝上，形態(tài)學(xué)下端朝下，頂部盡量剛好與培養(yǎng)基表面接觸，蓋好瓶蓋。及時(shí)放入光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

2 結(jié)果

2.1 6-BA和IAA不同濃度配比對(duì)羅漢果愈傷組織誘導(dǎo)和生長的影響 將處理好的羅漢果莖段接入第一組1～9號(hào)不同濃度培養(yǎng)基的處理中，4周左右后形成黃白色愈傷組織，且長勢(shì)良好，并記錄數(shù)據(jù)。

如表1所示，9種培養(yǎng)基均能誘導(dǎo)出不定芽，但不同濃度植物激素組合對(duì)其誘導(dǎo)率有很大影響，由于植物激素生理作用的雙重性，當(dāng)IAA一定時(shí)，隨著6-BA的濃度增大，誘導(dǎo)率首先逐漸上升，在濃度為1.0mg/L時(shí)達(dá)到最大，隨后又逐漸下降，且變化趨勢(shì)較大。而當(dāng)6-BA濃度一定時(shí)，隨著IAA濃度的增大，誘導(dǎo)率首先逐漸上升，在濃度為0.05mg/L時(shí)達(dá)到最大，隨后又逐漸下降，且變化趨勢(shì)不大。這也驗(yàn)證了分裂素比生長激素對(duì)羅漢果愈傷組織誘導(dǎo)的影響大。通過圖1可知：以5號(hào)處理即6-BA 1.0mg/L+IAA 0.05mg/L的組合誘導(dǎo)率最高，達(dá)66.67%。

3 討論

羅漢果外植體愈傷組織誘導(dǎo)成功與否，除了要選擇正確的基本培養(yǎng)基和適合于組培苗生長的光照時(shí)間和光照強(qiáng)度、培養(yǎng)溫度及濕度以外，最主要的影響因素還在于選用適宜的激素種類和濃度配比。外植體的脫分化、再分化過程，試管苗根、莖、葉等器官的發(fā)生，往往都需要向培養(yǎng)基中添加植物激素或生長調(diào)節(jié)劑。對(duì)激素種類和濃度的篩選始終是組培工作的重點(diǎn)和難點(diǎn)。

植物生長激素在離體組織愈傷組織誘導(dǎo)方法中對(duì)植物的生長發(fā)育表現(xiàn)出雙重作用：一般生長素在低濃度時(shí)可以促進(jìn)生長，濃度較高則會(huì)抑制生長，如果濃度更高則會(huì)使植物受傷，其發(fā)揮的生理作用會(huì)因濃度、植物的種類、器官、細(xì)胞的年齡不同而有差異。而細(xì)胞分裂素如6-BA等，主要生理功能就是促進(jìn)細(xì)胞的分裂，而又主要是對(duì)細(xì)胞質(zhì)的分裂起作用，所以，細(xì)胞分裂素促進(jìn)細(xì)胞分裂的效應(yīng)只有在生長素存在的前提下才能表現(xiàn)出來。

對(duì)于不同激素在羅漢果離體組織誘導(dǎo)的影響有很多的研究，例如：宋鵬飛、唐國興等利用羅漢果離體葉片在MS+6-BA 1.0mg/L+IBA 0.5mg/L培養(yǎng)基中誘導(dǎo)愈傷組織[7]；林榮、王秀琴等采用羅漢果離體莖段在MS+6-

BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L培養(yǎng)基中誘導(dǎo)愈傷組織[8]；黃春梅、曾黎輝等采用羅漢果葉片在6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L+

2，4-D 0.5mg/L培養(yǎng)基中誘導(dǎo)愈傷組織，但誘導(dǎo)率都比較低且誘導(dǎo)時(shí)間較長[9]；付長亮、馬小軍等采用羅漢果離體莖段在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L培養(yǎng)基中誘導(dǎo)愈傷組織，并發(fā)現(xiàn)對(duì)羅漢果莖段增值系數(shù)影響最大的是6-BA，其次是NAA，最小的是IBA[10]。本試驗(yàn)也驗(yàn)證了這一規(guī)律：6-BA對(duì)羅漢果愈傷組織誘導(dǎo)的影響比IAA或NAA要大。

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[8]林榮，王秀琴，王潤珍，等.羅漢果莖段離體培養(yǎng)研究[J].廣西植物，1985，5（3）： 273-277.

[9]黃春梅，曾黎輝，吳金壽，等.羅漢果葉片培養(yǎng)及其不定芽形成的細(xì)胞學(xué)觀察[J].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，27（6）： 639-642.

[10]付長亮，馬小軍，白隆華，等.羅漢果脫毒苗的快速繁殖研究[J].中草藥，2005，36（8）： 1 225-1 229. （責(zé)編：施婷婷）