定量壓制對(duì)大青葉煎煮質(zhì)量的影響

朱 聰，宋 英*，王聰穎，郭志青

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，四川 成都 610072；2.成都中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，四川 成都 610075)

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定量壓制對(duì)大青葉煎煮質(zhì)量的影響

朱 聰1，宋 英1*，王聰穎2，郭志青1

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，四川 成都 610072；2.成都中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，四川 成都 610075)

目的：通過(guò)對(duì)大青葉壓制飲片和普通飲片的煎煮，觀察定量壓制是否影響大青葉的煎煮質(zhì)量。方法：分別對(duì)大青葉壓制飲片和傳統(tǒng)飲片進(jìn)行單味煎煮和在復(fù)方中煎煮，以靛玉紅含量及干膏率為評(píng)價(jià)指標(biāo)。結(jié)果：壓制中藥飲片水煎液中靛玉紅含量及干膏收率與傳統(tǒng)飲片無(wú)明顯差異。結(jié)論：壓制并不影響大青葉飲片的煎煮效果。

大青葉壓制飲片；傳統(tǒng)飲片；靛玉紅；干膏率

大青葉為常用清熱解毒中藥,來(lái)源于十字花科植物菘藍(lán)isatisindigoticafort的干燥葉[1]，具有清熱解毒、涼血消斑的功能，主要用于治療溫邪入營(yíng)、高熱神昏、發(fā)斑發(fā)疹、黃疸、熱痢、痄腮、喉痹、丹毒、癰腫等癥[2]。其主要有效成分為吲哚類(lèi)生物堿: 靛藍(lán)( indigotin) 、靛玉紅( indirubin) ，《中國(guó)藥典》2010 版以靛玉紅作為大青葉藥材的質(zhì)量控制指標(biāo)[3]，并且靛玉紅是傳統(tǒng)的治療白血病的藥物[4]。

大青葉密度小、流動(dòng)性差，不利于小包裝飲片的定量分裝和藥房的調(diào)劑。

壓制飲片是一種新的專(zhuān)利技術(shù)，其采用物理壓縮法，將飲片制成一定形狀， 用一定的包裝材料封裝，由配方藥師直接調(diào)配而無(wú)需稱(chēng)量，是一種新型飲片[5]。同時(shí)解決了花類(lèi)、全草類(lèi)、葉類(lèi)及部分質(zhì)輕或不規(guī)則飲片，因密度小、流動(dòng)性差、體積大而增加飲片生產(chǎn)、包裝、貯藏、運(yùn)輸、調(diào)劑等環(huán)節(jié)中存在困難[6]。本實(shí)驗(yàn)旨在研究定量壓制會(huì)不會(huì)對(duì)大青葉的煎煮質(zhì)量造成影響，從而為大青葉壓制飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 試驗(yàn)儀器

島津LC 20A液相色譜儀，浙大智達(dá)N2000色譜工作站；BP211D分析天平(十萬(wàn)分之一型，德國(guó)賽多利斯公司)；101A-3干燥箱(上海市實(shí)驗(yàn)儀器總廠)；永欣TW-2000W可調(diào)溫電爐(郫縣永結(jié)電器總廠)。

1.2 試藥

大青葉傳統(tǒng)飲片(批號(hào)：120319，四川省中藥飲片有限公司);大青葉壓制中藥飲片(批號(hào)：120319，四川省中藥飲片有限公司);靛玉紅對(duì)照品(批號(hào)110717-200204，中國(guó)食品藥品生物制品檢定研究院);甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測(cè)定[7-9]

2.1.1 色譜條件 色譜柱為 Comatex C18(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇—水為75∶25(體積分?jǐn)?shù))；流速：1μL/min ；檢測(cè)波長(zhǎng)：289nm，柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μL。理論塔板數(shù)按靛玉紅計(jì)應(yīng)不低于4 000。

2.1.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱(chēng)取靛玉紅1.62mg，置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密吸取2mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(6.48μg/μL)。

2.1.3 供試品溶液制備 取本品細(xì)粉0.25g，精密稱(chēng)定，置索氏提取器中，加三氯甲烷，浸泡15h，加熱回流提取至提取液無(wú)色?；厥杖軇┲粮桑瑲?jiān)蛹状际谷芙獠⑥D(zhuǎn)移至100μL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 專(zhuān)屬性試驗(yàn) 按“2.1.1”項(xiàng)色譜條件，精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，結(jié)果供試品中靛玉紅色譜峰與相鄰色譜峰分離度>1.5，理論塔板數(shù)按靛玉紅峰計(jì)算不低于4 000，陰性無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

圖1 靛玉紅對(duì)照品、供試品和陰性樣品的HPLC圖譜

2.1.5 精密度試驗(yàn) 按照“2.1.1”項(xiàng)色譜條件，精密吸取靛玉紅對(duì)照品溶液20μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄靛玉紅色譜峰峰面積，結(jié)果顯示，靛玉紅對(duì)照品峰面積均值為23 475.2，RSD為1.57%，表明精密度良好。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按照“2.1.1”項(xiàng)色譜條件，精密吸取供試品溶液20μL，分別于0h、2h、4h、6h、8h、10h，注入液相色譜儀，記錄峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果顯示，靛玉紅峰面積均值為660.7，RSD為2.58%，表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.1.7 重復(fù)性試驗(yàn) 按“2.1.3”項(xiàng)下方法，分別制備供試品溶液6份，按照“2.1.1”項(xiàng)色譜條件，注入液相色譜儀，記錄靛玉紅色譜峰峰面積，計(jì)算供試品中靛玉紅含量，結(jié)果顯示，樣品中靛玉紅含量均值為47.990 7μg/μL，RSD為2.26%，表明試驗(yàn)重復(fù)性較好。

2.1.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知含量的樣品制備溶液0.5μL(479.907 2μg/μL)共6份，分別精密加入靛玉紅對(duì)照品溶液(0.143 2mg/μL)2μL，按供試品制備方法及色譜條件，測(cè)定含量，計(jì)算回收率。

回收率

經(jīng)計(jì)算靛玉紅的加樣回收率平均值為98.76%，加樣回收率在95%～105%之間，RSD=2.08%,表明該方法的加樣回收率良好。

2.1.9 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 分別精密吸取靛玉紅對(duì)照品溶液(6.48μg/μL)1mL置50mL量瓶中，1mL、2mL、5mL置25mL量瓶中，分別加甲醇至刻度，搖勻，即得標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照品溶液。按照上述色譜條件，分別精密吸取20μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，結(jié)果見(jiàn)表1。以峰面積(Y)對(duì)進(jìn)樣量(X)進(jìn)行回歸分析，計(jì)算回歸方程，并以峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品含量(μg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖2。

表1 靛玉紅線性范圍考察

圖2 靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)曲線

經(jīng)計(jì)算，得線性回歸方程Y=2 183.6X+1 834.9，R=0.999 8，結(jié)果表明，進(jìn)樣量在2.592～129.6μg范圍內(nèi)，靛玉紅進(jìn)樣量與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.2 大青葉定量壓制樣品與傳統(tǒng)飲片單味煎煮比較

2.2.1 靛玉紅含量測(cè)定 分別稱(chēng)取大青葉傳統(tǒng)飲片600g和壓制飲片600g各6份，其中各取3份分別加15倍量水，浸泡30min，第1次煎煮保持微沸15min，第2次煎煮保持沸騰10min，濾過(guò)，濾液濃縮并定容至7 000mL，作為傳統(tǒng)煎煮組；另外各3份分別加水8 000mL，浸泡30min，煎煮15min，濾過(guò)，藥液定容至7 000mL，作為機(jī)器煎煮組。精密吸取上述各樣品溶液5mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，經(jīng)微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密吸取供試液20μL，注入液相色譜儀，計(jì)算靛玉紅含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2.2 干膏收率測(cè)定 精密吸取樣品溶液25mL，置已恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，置干燥器中冷卻30min，迅速精密稱(chēng)定重量，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2.3 結(jié)果 大青葉壓制中藥飲片單味水煎液中靛玉紅含量略高于傳統(tǒng)飲片單味水煎液，干膏收率基本一致。

表2 單味煎煮比較結(jié)果

注:靛玉紅含量及干膏收率權(quán)重系數(shù)分別為0.6、0.4。

2.3 大青葉壓制飲片和傳統(tǒng)飲片在復(fù)方中煎煮比較

2.3.1 靛玉紅含量測(cè)定 按照處方比例分別稱(chēng)取大青葉600g、升麻400g、玄參400g、知母400g、麥冬400g、荷葉400g 6份和大青葉壓制飲片600g、升麻400g、玄參400g、知母400g、麥冬400g、荷葉400g 6份，其中各取3份分別加15倍量水，浸泡30min，第1次煎煮保持微沸15min，第2次煎煮保持沸騰10min，濾過(guò)，濾液濃縮并定容至7 000mL，作為傳統(tǒng)煎煮組；另外各三組分別加水10 000mL，浸泡30min，煎煮15min，濾過(guò)，藥液定容至7 000mL，作為機(jī)器煎煮組。

另按處方比例稱(chēng)取除大青葉外藥材共100g，按照上述方法制備缺大青葉陰性樣品溶液。

精密吸取上述樣品溶液1μL，置10μL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，經(jīng)微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密吸取供試液20μL，注入液相色譜儀，計(jì)算靛玉紅含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 復(fù)方煎煮比較結(jié)果

注:靛玉紅含量及干膏收率權(quán)重系數(shù)分別為0.6、0.4。

2.3.2 干膏收率測(cè)定 精密吸取樣品溶液25μL，置已恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，置干燥器中冷卻30min，迅速精密稱(chēng)定重量，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

2.3.3 結(jié)果 大青葉壓制中藥飲片復(fù)方水煎液中靛玉紅含量略高于未壓制飲片，干膏收率基本一致。

2.4 溶出曲線比較[10-11]

2.4.1 不同時(shí)間點(diǎn)靛玉紅含量測(cè)定 ①傳統(tǒng)飲片樣品溶液制備。分別稱(chēng)取大青葉傳統(tǒng)飲片200g，加水2 000mL(補(bǔ)加吸水量)，浸泡30min，分別于煎煮5min，10min，15min，20min，30min，40min，50min，60min取樣100mL,并補(bǔ)充水體積，藥液濾過(guò)，備用。②定量壓制樣品溶液制備。分別稱(chēng)取定量壓制樣品200g，按上述方法同法制備定量壓制樣品溶液。

圖3 靛玉紅溶出曲線

精密吸取上述樣品溶液10mL，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，經(jīng)微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密吸取供試液20μL，注入液相色譜儀，計(jì)算靛玉紅含量，結(jié)果見(jiàn)表4(圖3)。

2.4.2 不同時(shí)間點(diǎn)干膏收率測(cè)定 精密吸取煎煮不同時(shí)間點(diǎn)樣品溶液各25μL，置已恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，置干燥器中冷卻30min，迅速精密稱(chēng)定重量，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 溶出曲線結(jié)果

3 結(jié)論

以上大青葉傳統(tǒng)飲片與壓制中藥飲片的溶出曲線、單味煎煮、復(fù)方煎煮比較結(jié)果表明，在大青葉壓制中藥飲片崩散完全情況下，壓制中藥飲片水煎液中靛玉紅含量略高于傳統(tǒng)飲片，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，干膏收率與傳統(tǒng)飲片無(wú)明顯差異，壓制并不影響大青葉飲片的煎煮效果。且從靛玉紅前15min的溶出曲線看，由于壓制樣品不會(huì)像傳統(tǒng)樣品一樣漂浮在水面，故其溶出速度更快。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中國(guó)藥典(一部) [M] .北京：中國(guó)醫(yī)藥出版社,2010:20-21.

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(責(zé)任編輯：宋勇剛)

The Press Forming’s Affects to the Decoction Quality of Folium Isatidis

Zhu Cong1,Song Ying1*,Wang Congying2,Guo Zhiqing1

(1.The Affiliated Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 610072,China;2.Pharmacy College,Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 610075,China)

Objective:To observe whether the press forming affects the decoction quality of Folium Isatidis by contrast the decoction of compressed pieces and ordinary pieces.Methods:Evaluating the content of indirubin and dry extract yielding rate of compressed pieces and ordinary pieces respectively. Results:No obvious difference of indirubin content nor dry extract yielding rate was found in the decoction between compressed pieces and ordinary pieces. Conclusion:Press forming does not affect the decoction quality of Folium Isatidis pieces.

Folium Isatidis Compressed Pieces；Ordinary Pieces；Indirubin；Dry Extract Yielding Rate

2014-07-02

四川省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2011SZ0311)

朱聰(1988-)，男，成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中藥師，研究方向?yàn)橹兴幹苿?/p>

通訊簡(jiǎn)介：宋英(1959-)，男，碩士，成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院主任藥師，研究方向?yàn)橹兴幣谥婆c制劑。

R284.2

A

1673-2197(2014)21-0014-03