內(nèi)皮脂肪酶584C/T基因多態(tài)性與高血壓病相關(guān)性研究
——299例常州地區(qū)漢族人群分析

蔡高軍，翁偉進(jìn)，師干偉，薛社亮，楊麗萍，黃曉鳳，宋艷斌

（江蘇大學(xué)附屬武進(jìn)醫(yī)院心內(nèi)科，常州 213000）

高血壓病（essential hypertension，EH）在我國(guó)人群知曉率、治療率和控制率仍較低[1]。EH的發(fā)病受遺傳和環(huán)境因素共同作用[2,3]。有研究資料顯示單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）可能與EH發(fā)病有關(guān)[3]。近來研究表明，內(nèi)皮脂肪酶（endothelial lipase，EL）可能通過裂解高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C）及其他多條途徑參與動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病的發(fā)病。EL編碼基因定位于18q21.1，編碼產(chǎn)物由483個(gè)氨基酸組成，相對(duì)分子質(zhì)量約55ku[4]。近來，Shimokawa等[5]在自發(fā)性EH模型中發(fā)現(xiàn)主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中EL的表達(dá)上調(diào)。2002年deLemos等[6]首先發(fā)現(xiàn)人群中EL 584C/T基因多態(tài)性（ThrlllIle）。研究表明，不同人群該多態(tài)性的變異性較大[7,8]。該多態(tài)性可能與我國(guó)漢族人群冠心病相關(guān)[9]，與白庫(kù)瑤族人群EH之間存在相關(guān)性[3]。但目前國(guó)內(nèi)未見該多態(tài)性與我國(guó)漢族人群EH之間關(guān)聯(lián)性的研究。本研究旨在探討EL 584C/T多態(tài)性與常州地區(qū)漢族人群EH的相關(guān)性。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

入選江蘇大學(xué)附屬武進(jìn)醫(yī)院2008年8月～2011年1月心內(nèi)科住院患者，EH患者共160例，其中男80例，女80例，年齡29～78（62.0±10.1）歲，均符合《2010高血壓防治指南》[1]的診斷標(biāo)準(zhǔn)；對(duì)照組139例，其中男72例，女67例，年齡31～93（57.8±9.8）歲。所有研究對(duì)象均行冠狀動(dòng)脈造影檢查排除冠心病，根據(jù)患者病史和癥狀排除腦梗死（部分患者行頭顱電子計(jì)算機(jī)X射線斷層掃描技術(shù)或磁共振成像檢查），入選患者還排除有腫瘤、感染性疾病及肝腎功能異常者，均來自常州地區(qū)漢族人群。該研究征得所有入選對(duì)象知情同意。

1.2 方法

1.2.1 生化指標(biāo)檢測(cè) 制定專門表格統(tǒng)一登記入選對(duì)象的基本資料，包括年齡、性別、EH史及服藥情況、是否有糖尿病史和吸煙史等。血脂和血糖指標(biāo)檢測(cè)采用奧林巴斯AU5400全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)分析。

1.2.2 DNA的提取及PCR檢測(cè) 抽取患者次日清晨靜脈血3ml，以酚-氯仿法提取基因組DNA。采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性內(nèi)切酶片段多態(tài)性檢測(cè)（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP）方法檢測(cè)EL 584C/T基因多態(tài)性。具體過程參照文獻(xiàn)[10]，引物由大連寶生物合成。PCR反應(yīng)體系：1μl基因組DNA，1μl引物，0.25μl TaKaRa Ex Taq DNA聚合酶，5μl 10×Ex Taq緩沖液，4μl dNTP混合液。PCR反應(yīng)條件：首先94℃預(yù)變性5min，然后94℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，35個(gè)循環(huán)后72℃延伸10min。反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)限制性內(nèi)切酶NdeⅠ酶切，37℃溫育過夜。酶切產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后，在紫外燈下分型。選取部分PCR產(chǎn)物送上海生物工程有限公司測(cè)序分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包分析。計(jì)數(shù)資料采用直接計(jì)數(shù)法，率的比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s ）表示，比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，基因多態(tài)性與EH的相關(guān)性行多因素logistic回歸分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 EH組和對(duì)照組一般資料比較

與對(duì)照組比較，EH組患者年齡偏大，合并糖尿病患者的比例明顯升高，而且EH組患者甘油三酯（triglycerides，TG）水平明顯升高（P＜0.05；表1）。

表1 EH組和對(duì)照組一般資料比較Table1 Comparison of clinical characteristics between EH and control groups

2.2 EH組和對(duì)照組基因型和等位基因頻率比較

對(duì)照組基因型頻率分布符合Hardy-Weinberg平衡（P＞0.05），說明本研究資料具有群體代表性。EH組CC、CT、TT基因型和T等位基因頻率分別為56.3%、42.5%、1.1%和22.5%；對(duì)照組CC、CT、TT基因型和C、T等位基因頻率分別為56.1%、38.8%、5.0%和24.5%。兩組間基因型和等位基因頻率比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05；表2）。

表2 EH組和對(duì)照組基因型和等位基因頻率比較Table2 The genotype and allele frequencies of EL 584 C/T gene polymorphism between EH and controls groups [n(%)]

2.3 不同基因型血脂水平及年齡比較

由于TT基因型數(shù)量較少，我們將CT+TT基因型視為T等位基因攜帶者與CC基因型進(jìn)行比較。由表中數(shù)據(jù)我們可以看出，無論是總體還是亞組分析，與CC基因型比較，T等位基因攜帶者血脂水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。女性T等位基因攜帶者年齡偏大（62.5±9.6vs58.8±9.0，P＜0.05；表3）。

2.4 EL 584C/T基因多態(tài)性與EH的相關(guān)性logistic回歸分析

以EH為因變量，性別、年齡、TC、TG、LDL-C、HDL-C和EL 584C/T基因多態(tài)性等為自變量，Logistic回歸結(jié)果顯示，EH與年齡、合并糖尿病、高TG有關(guān)，與EL 584C/T基因多態(tài)性無關(guān)（表4）。

3 討論

2005年，Shimokawa等在小鼠自發(fā)性EH模型中發(fā)現(xiàn)主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞表達(dá)EL上調(diào)。EL能降解HDL-C，產(chǎn)生游離脂肪酸等[11]。Badellino等[12]研究也表明EL與EH、脂質(zhì)代謝異常、肥胖和胰島素抵抗等相關(guān)。我國(guó)學(xué)者楊曉靜等[13]研究表明EH組患者血漿EL水平明顯高于對(duì)照組，而且EH組內(nèi)患者EL水平與收縮壓、舒張壓呈正相關(guān)。

目前已發(fā)現(xiàn)人類EL基因17個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性，研究較多的是584C/T位點(diǎn)和-384A/C位點(diǎn)多態(tài)性[14]。2012年，Yin等[3]研究白庫(kù)瑤族人群血壓與血脂相關(guān)基因多態(tài)性關(guān)系，研究納入682例對(duì)照人群和670例EH患者。該研究發(fā)現(xiàn)，EL 584C/T多態(tài)性與女性EH之間存在明顯相關(guān)性；同時(shí)研究還發(fā)現(xiàn)在EH組內(nèi)，該多態(tài)性與男性收縮壓、舒張壓之間也存在明顯相關(guān)性，CT基因型組收縮壓、舒張壓水平明顯高于CC基因型組，而TT基因型組舒張壓明顯高于CC基因型組。但本課題組前期研究表明，該多態(tài)性與蘇南地區(qū)漢族人群冠心病和血脂水平無明顯相關(guān)性[10]。本研究表明，EL 584C/T多態(tài)性與常州地區(qū)漢族人群EH之間也無明顯相關(guān)性。logistic回歸分析顯示，EH與年齡、是否有糖尿病、TG等因素有關(guān)，與EL 584C/T無關(guān)。本研究與Yin等的研究結(jié)論不一致，考慮主要可能與種族不同有關(guān)，同時(shí)也因?yàn)楸狙芯繕颖玖科?，未按不同EH水平進(jìn)行亞組分析。雖然EL與血壓水平明顯相關(guān)，但其多態(tài)性與EL水平無相關(guān)性，這也可能是該多態(tài)性與EH無相關(guān)性的原因之一[15]。

綜上所述，本研究未發(fā)現(xiàn)EL 584C/T多態(tài)性與常州地區(qū)漢族人群EH之間有明顯相關(guān)性。但由于本研究樣本量較少，有待后續(xù)大樣本的研究進(jìn)一步驗(yàn)證。

表3 不同基因型間血脂水平比較Table3 Comparison of lipids level and age between different genotypes (±s)

表3 不同基因型間血脂水平比較Table3 Comparison of lipids level and age between different genotypes (±s)

EH: essential hypertension; TC: total cholesterol; TG: triglycerides; HDL-C: high density lipoprotein-cholesterol; LDL-C: low density lipoprotein cholesterol.Compared with CC group, *P＜0.05

Item n Age(years) TC(mmol/L) TG(mmol/L) HDL-C(mmol/L) LDL-C(mmol/L)Total(n＝299)CC 168 59.2±9.6 4.5±0.9 1.7±1.3 1.2±0.3 2.6±0.7 CT+TT 131 61.1±10.8 4.7±1.1 1.8±1.2 1.2±0.4 2.7±0.8 EH group(n＝160)CC 090 61.2±9.0 4.6±1.0 1.9±1.3 1.2±0.3 2.6±0.7 CT+TT 070 63.1±11.3 4.6±1.0 1.9±1.4 1.2±0.4 2.7±0.7 Control(n＝139)CC 078 56.8±9.8 4.5±0.9 1.6±1.3 1.2±0.3 2.7±0.6 CT+TT 061 58.9±9.9 4.7±1.3 1.6±0.9 1.2±0.3 2.7±1.0 Male(n＝152)CC 086 59.5±10.2 4.3±0.9 1.7±1.3 1.1±0.3 2.5±0.7 CT+TT 066 59.8±11.9 4.5±1.2 1.9±1.4 1.2±0.4 2.6±0.9 Female(n＝147)CC 082 58.8±9.0 4.8±0.9 1.8±1.3 1.2±0.3 2.7±0.7 CT+TT 065 62.5±9.6* 4.8±1.0 1.6±0.9 1.3±0.3 2.8±0.8

表4 基因多態(tài)性與EH相關(guān)性logistic回歸分析Table4 Logistic analysis of EL 584 C/T polymorphism and EH risk

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