HPLC法測(cè)定抗過(guò)敏類健康產(chǎn)品中非法添加的馬來(lái)酸氯苯那敏含量

魏志雄,劉丹丹

(東莞市食品藥品檢驗(yàn)所，廣東 東莞 523109)

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HPLC法測(cè)定抗過(guò)敏類健康產(chǎn)品中非法添加的馬來(lái)酸氯苯那敏含量

魏志雄*,劉丹丹

(東莞市食品藥品檢驗(yàn)所，廣東 東莞 523109)

目的：建立HPLC法測(cè)定抗過(guò)敏類健康產(chǎn)品中非法添加的馬來(lái)酸氯苯那敏含量。方法：采用 Diamonsil C18(4.6mm×250mm，5μm)色譜柱，以0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(含1%三乙胺和0.005mol/L的庚烷磺酸鈉，用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)-甲醇(45∶55)為流動(dòng)相，流速為1.0mL·min-1，柱溫為30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為262nm。結(jié)果：馬來(lái)酸氯苯那敏在0.100 4～4.016 0μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系(r2=0.999 7)，平均回收率為97.8%，RSD=1.6%(n=6)；31批供試品有3批檢測(cè)到非法添加的馬來(lái)酸氯苯那敏。結(jié)論：該方法專屬性強(qiáng)、靈敏度高，適用于測(cè)定抗過(guò)敏類健康產(chǎn)品中非法添加的馬來(lái)酸氯苯那敏含量。

抗過(guò)敏類健康產(chǎn)品；馬來(lái)酸氯苯那敏；高效液相色譜

馬來(lái)酸氯苯那敏又稱撲爾敏，是一種重要的抗過(guò)敏類非處方藥品，臨床上廣泛用于治療各種過(guò)敏性疾病，但其本身可引發(fā)交叉過(guò)敏，亦可引起嗜睡、心悸、出血傾向以及肝損傷等副作用。一些不法分子在抗過(guò)敏類健康產(chǎn)品中非法添加馬來(lái)酸氯苯那敏，給人民群眾的身體健康帶來(lái)極大威脅。

本文采用高效液相色譜法測(cè)定抗過(guò)敏類健康產(chǎn)品中馬來(lái)酸氯苯那敏的含量，結(jié)果表明，該方法重復(fù)性好，回收率高，可用于此類產(chǎn)品中非法添加的馬來(lái)酸氯苯那敏檢測(cè)。

1 儀器與試藥

島津LC-20AT液相色譜儀(配二極管陣列檢測(cè)器)；賽多利斯BP211D電子天平；色譜柱：Diamonsil C18(4.6mm×250mm，5μm)；馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)100047-200606，含量99.7%)；甲醇、庚烷磺酸鈉為色譜純，水為純化水，其余試劑均為化學(xué)純。抗過(guò)敏類健康產(chǎn)品為市購(gòu)滴鼻劑(共31批)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Diamosil C18(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相為0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(含1%三乙胺和0.005mol/L的庚烷磺酸鈉，用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)-甲醇(45∶55)；流速為1.0mL/min；進(jìn)樣量為20μL；柱溫為30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為262nm。在上述色譜條件下理論板數(shù)按氯苯那敏峰計(jì)不低于6 000，與周圍其他色譜峰分離良好。對(duì)照品、供試品及陰性等色譜見(jiàn)圖1。

圖1 馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品(A)、供試品(B-7～B-24)及陰性供試品HPLC色譜

注：*峰1為氯苯那敏。

2.2 對(duì)照品溶液制備

精密稱取經(jīng)105℃干燥3h的馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品0.010 07g，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，配成濃度約為0.4mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

精密吸取馬來(lái)酸氯苯那敏標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量，加甲醇稀釋制成濃度分別為0.2、0.1、0.04、0.02、0.01及0.005mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線系列溶液。

2.3 樣品溶液制備

精密吸取樣品適量體積置分液漏斗中，加40%氫氧化鈉溶液10mL，搖勻，用石油醚(60～90℃)振搖提取4次(1次30mL)，合并提取液，蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，并定容?0～50mL量瓶中，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得(制得供試品濃度在0.005～0.2mg/mL)。

2.4 線性關(guān)系考察

取不同濃度的對(duì)照品溶液20μL注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)(X)，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)繪制回歸方程，結(jié)果表明馬來(lái)酸氯苯那敏進(jìn)樣量在0.100 4～4.016 0μg范圍內(nèi)峰面積與進(jìn)樣量線性關(guān)系良好(Y=1.2×107X+14 210,R2=0.999 7)。

2.5 進(jìn)樣精密度試驗(yàn)

精密吸取0.005及0.1mg/mL的對(duì)照品溶液各20μL分別連續(xù)6次注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，RSD為1.1%及0.7%，表明進(jìn)樣精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

按上述制備方法制得供試品溶液，分別在0、2、4、8、16及24h進(jìn)樣20μL，記錄峰面積，結(jié)果RSD為0.3%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密吸取樣品2 mL置分液漏斗中，按上述制備方法制得6份供試品溶液，取續(xù)濾液20μL注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，RSD為0.5%，表明重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收試驗(yàn)

精密移取已知含量的樣品溶液6份各1mL，各加入對(duì)照品儲(chǔ)備溶液2mL，按上述制備方法制成供試品溶液，測(cè)定計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品測(cè)定

取31批樣品，按上述制備方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣20μL，記錄色譜見(jiàn)圖1，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算其含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 色譜峰識(shí)別

在選定的流動(dòng)相pH值內(nèi)，馬來(lái)酸氯苯那敏會(huì)出現(xiàn)兩色譜峰[1]，考慮到馬來(lái)酸出峰時(shí)間短且易與供試品中其它雜質(zhì)及溶劑峰相互干擾，故選擇氯苯那敏峰來(lái)定量。

3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)確定

對(duì)馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品溶液的紫外吸收光譜進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)氯苯那敏在226nm及262nm處有最大吸收峰。考慮到226nm波長(zhǎng)下雜質(zhì)干擾較為嚴(yán)重，同時(shí)參照《中國(guó)藥典》2010版二部品種馬來(lái)酸氯苯那敏片的含量測(cè)定所采用的檢測(cè)波長(zhǎng)，選擇262nm 為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.3 流動(dòng)相條件選擇

分別考察了1%乙酸銨溶液-甲醇、0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液-甲醇、1%磷酸溶液-乙腈及0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(含1%三乙胺和0.005mol/L的庚烷磺酸鈉，用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)-甲醇等多種系統(tǒng)，最終選定0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(含1%三乙胺和0.005mol/L的庚烷磺酸鈉，用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)-甲醇 (45∶55)為流動(dòng)相。結(jié)果顯示加入適量的三乙胺有利于消除氯苯那敏中的氨基與C18固定相中的游離硅羥基相互作用而造成的峰拖尾現(xiàn)象[2]，在此條件下，氯苯那敏峰形較好，能達(dá)到基線分離，響應(yīng)值較高，保留時(shí)間適中。

3.4 提取方法選擇

由于抗過(guò)敏類健康產(chǎn)品成分復(fù)雜，提取方法選用不當(dāng)很容易對(duì)準(zhǔn)確定性及定量造成干擾。參照《中國(guó)藥典》2010版一部品種鼻炎康片的含量測(cè)定所采用前處理方法[4]，本方法利用馬來(lái)酸氯苯那敏易溶于水，加入強(qiáng)堿后氯苯那敏易游離，用石油醚(60～90℃)萃取，蒸干以后用甲醇溶解進(jìn)樣，這樣可有效地消除相關(guān)雜質(zhì)的干擾，方法準(zhǔn)確度良好。

4 結(jié)語(yǔ)

本實(shí)驗(yàn)建立了抗過(guò)敏類健康產(chǎn)品中非法添加馬來(lái)酸氯苯那敏的HPLC測(cè)定方法，并對(duì)33批樣品進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)有5批樣品非法添加馬來(lái)酸氯苯那敏。該方法專屬性強(qiáng)、靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于抗過(guò)敏類健康產(chǎn)品中非法添加馬來(lái)酸氯苯那敏的定性及定量測(cè)定。

[1] 紀(jì)宇.關(guān)于馬來(lái)酸氯苯那敏色譜峰的識(shí)別[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn),2004,5(1):31.

[2] 馬春梅,趙變,席榮英,等.高效液相色譜法測(cè)定馬來(lái)酸氯苯那敏[J].理化檢驗(yàn)：化學(xué)分冊(cè),2012,48(10):1244-1246.

(責(zé)任編輯：李嵐春)

Detection of Chlorphenamine Maleate in Anti-hypertensive Traditional Chinese Medicine and Health Foods by HPLC

Wei Zhixiong, Liu Dandan

(Dongguan Institute for Food and Drug Control，Guandong Dongguan 523109)

Objective:To establish an HPLC method for the detection of chlorphenamine maleate which were illegally added into antihytensive health products. Methods:Diamosil C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm) was adopted with the mobile phase of 0.05 mol/L KH2PO4(1% triethylamine and 0.005 mol/L potassium dihydrogen phosphate, pH was adjusted to 3.0 with phosphoric acid)-methanol (45∶55). The flow rate was 1.0 mL·min-1. The column temperature was 30℃. The detection wavelength was set at 262nm. Results:The method showed a good linear relationship within the range of chlorphenamine maleate 0.100 4～4.016 0 μg (r2=0.999 7). The average recovery was 97.8% with RSD=1.6% (n=6). Chlorphenamine maleate was found in 3 samples.Conclusion:The method is selective and sensitive and can be employed in the detection of chlorphenamine maleate in antihypertensive Traditional Chinese Medicine and Health Foods.

Antihypertensive Traditional Chinese Medicine and Health Foods; Chlorphenamine Maleate; HPLC

2014-03-21

廣東省促進(jìn)科技服務(wù)業(yè)發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2012B040304001)

魏志雄(1983-)，男，中藥學(xué)博士，廣東省東莞市食品藥品檢驗(yàn)所工程師，研究方向?yàn)楸＝∈称芳八幤窓z驗(yàn)。

R941.1

A

1673-2197(2014)12-0019-03