固相萃取結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)同時(shí)測定飼料中氯苯那敏和溴苯那敏含量

管 鑫 索德成 肖志明 王 石 馮玉超 梁 英 樊 霞*

(1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所，北京100081；2.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)，大慶163000)

氯苯那敏(chlorphenamine)，俗稱撲爾敏，化學(xué)名為3-(4-氯苯基)-N,N-二甲基-3-吡啶-2-基丙-1-胺；溴苯那敏(brompheniramine)，化學(xué)名為3-(4-溴苯基)-N,N-二甲基-3-吡啶-2-基丙-1-胺，是氯苯那敏的溴代同系物。溴苯那敏與氯苯那敏具有相似結(jié)構(gòu)，二者同為第一代的H1組胺受體拮抗劑[1]，功能性質(zhì)也類似。近50年來，該類藥物被用于治療多種過敏反應(yīng)，如花粉熱、慢性鼻竇炎/鼻炎以及上呼吸道咳嗽綜合征[2-3]等。其中，氯苯那敏因與常規(guī)局麻藥具有相似的化學(xué)結(jié)構(gòu)，同樣對心血管和中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有相似的毒性，故也可用作局麻藥[4]。在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中，氯苯那敏具有緩解高致病性豬藍(lán)耳病臨床癥狀[5]，穩(wěn)定低致病性禽流感患雞血液中白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、血小板數(shù)量和紅細(xì)胞相關(guān)指標(biāo)[6]，以及治療狂犬病免疫過程中免疫犬過敏癥狀[7]等功效，此外一些研究也發(fā)現(xiàn)二者還具有提高雞等家禽采食量、日增重以及促進(jìn)動(dòng)物生長等作用[8-9]。而同時(shí)，有大量研究顯示，氯苯那敏和溴苯那敏具有一定的潛在毒副作用，服用該類藥物可引起嗜睡、呼吸頻率降低等癥狀[10]，嚴(yán)重者還可導(dǎo)致急性中毒，甚至死亡[11-12]。動(dòng)物采食添加了含氯苯那敏和溴苯那敏的飼料后，可使其蓄積在組織中，而人類食用具有氯苯那敏和溴苯那敏殘留的動(dòng)物組織則會(huì)產(chǎn)生上述不良反應(yīng)。因此，迄今為止，氯苯那敏和溴苯那敏尚未被列入飼料中允許使用的藥物范圍。但在利益驅(qū)使下，一些養(yǎng)殖者將其添加在飼料中飼喂動(dòng)物，以提高動(dòng)物采食量、增加體重及促進(jìn)生長[13]，給飼料和畜禽產(chǎn)品質(zhì)量安全帶來了一定程度的潛在隱患。

目前，檢測氯苯那敏或溴苯那敏的方法主要是液-質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)法[13-17]、高效液相色譜(HPLC)法[18-24]等。Bachute等[18]建立了反相高效液相色譜法同時(shí)測定片劑中4種活性藥物含量的方法，其中氯苯那敏加標(biāo)回收率為98.61%～101.30%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.17%；劉凱雙等[20]研究復(fù)方金剛烷胺氨基比林片中氯苯那敏的測定方法，其回收率為99.42%～101.70%，RSD為0.84%，該方法可用于檢測低含量氯苯那敏；郭倩倩等[24]使用高效液相色譜法測定復(fù)方鋅布顆粒劑中氯苯那敏的含量，其中氯苯那敏的平均回收率為100.1%，RSD為0.49%，該方法定量限為11.80 μg/kg。

現(xiàn)有檢測方法涉及的對象以原料藥、血液、動(dòng)物組織為主[25-31]，而對于飼料中氯苯那敏和溴苯那敏的定量分析方法鮮有報(bào)道，缺少相關(guān)的檢測方法。由于飼料的復(fù)雜基質(zhì)干擾是影響方法靈敏度和穩(wěn)定性的關(guān)鍵因素，所以對其進(jìn)行凈化處理是精確測定被測物質(zhì)含量必不可少的一步。固相萃取(SPE)技術(shù)利用固體吸附劑將液體樣品中的被測物質(zhì)吸附，讓被測物質(zhì)與干擾物質(zhì)分離，然后再用洗脫液洗脫，達(dá)到分離和富集被測物質(zhì)的目的[32]?；诖?，本試驗(yàn)系統(tǒng)研究了飼料中氯苯那敏和溴苯那敏提取和凈化技術(shù)，建立了利用混合型陽離子固相萃取柱(MCX)結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)技術(shù)測定飼料中氯苯那敏和溴苯那敏的高效、靈敏定量分析方法，為監(jiān)測飼料中非法添加氯苯那敏和溴苯那敏的行為提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

AB SCIEX QTRAP?6500+型超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(美國SCIEX公司)：配備電噴霧電離源(ESI源)。氯苯那敏和溴苯那敏標(biāo)準(zhǔn)品(純度>98%)購自德國Dr. Ehrenstorfer公司；甲酸(色譜純，德國Sigma公司)；乙腈和甲醇(色譜純，美國Fisher ChenAlert Guide公司)；其他試劑均為分析純試劑，購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。試驗(yàn)用水為經(jīng)Milli-Q純化制備的一級水(>18.2 MΩ)。0.22 μm尼龍濾膜(上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司)；Oasis HLB固相萃取柱、Oasis MCX固相萃取柱、Oasis MAX固相萃取柱(美國Waters公司)；C18固相萃取柱(天津博納艾杰爾科技有限公司)。不同基質(zhì)飼料樣品由國家飼料質(zhì)量檢驗(yàn)檢測中心(北京)提供，并按試驗(yàn)設(shè)計(jì)制備，具有充分的代表性。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

1)混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液：稱取氯苯那敏和溴苯那敏標(biāo)準(zhǔn)品各5 mg(精確至0.01 mg)，置于10 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，制備氯苯那敏和溴苯那敏含量為500 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。

2)混合標(biāo)準(zhǔn)中間液：準(zhǔn)確移取2.0 mL混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液于100 mL棕色容量瓶中，用乙腈定容，配制成10 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。

3)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：用0.1%甲酸∶乙腈(90∶10，v/v)溶液逐級稀釋，配制成濃度為1.0～100.0 ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，該標(biāo)準(zhǔn)系列溶液需臨用現(xiàn)配。

1.2.2 樣品前處理

精確稱取飼料樣品5 g，加入20 mL 1%甲酸乙腈溶液，渦旋振蕩提取30 min，于10 000 r/min條件下離心5 min，取上清液備用。MCX固相萃取柱依次用3 mL甲醇和3 mL水活化，然后準(zhǔn)確移取上清液5 mL過柱，之后依次加入3 mL水和3 mL甲醇淋洗，抽干，最后用5%氨水甲醇溶液3 mL洗脫，收集洗脫液，于40 ℃下氮?dú)獯蹈?。?zhǔn)確加入1 mL 0.1%甲酸∶乙腈(90∶10，v/v)溶液溶解殘余物，混勻后過0.22 μm濾膜，上液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。

1.3 色譜和質(zhì)譜條件

色譜柱：Waters BEH C18柱(100 mm×3.0 mm, 1.7 μm)；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：5 μL；流動(dòng)相流速：0.4 mL/min，流動(dòng)相組成及洗脫梯度見表1。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫條件

質(zhì)譜采用電噴霧電離源(ESI+)，多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式；噴霧電壓為3.2 kV；離子源溫度為350 ℃；氣簾氣為空氣、碰撞氣為氮?dú)?，使用前調(diào)節(jié)各氣體流量以使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測要求，分段采集，溴苯那敏和氯苯那敏質(zhì)譜條件見表2。

表2 溴苯那敏和氯苯那敏質(zhì)譜條件

2 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)譜條件優(yōu)化

配制100 ng/mL氯苯那敏和溴苯那敏標(biāo)準(zhǔn)溶液，以微流量泵直接進(jìn)質(zhì)譜，進(jìn)行質(zhì)譜條件的優(yōu)化。由于正離子比負(fù)離子響應(yīng)強(qiáng)度高，所以采用ESI+模式的測定。通過一級全掃描質(zhì)譜得到氯苯那敏和溴苯那敏的母離子[M+H]+為質(zhì)荷比(m/z)275.2、m/z 319.1；通過子離子掃描得到二級質(zhì)譜，分別選擇m/z較大、強(qiáng)度較穩(wěn)定的2組m/z 167.2、m/z 230.2(氯苯那敏)和m/z 274、m/z 167.1(溴苯那敏)共4個(gè)碎片作為子離子；其中子碎片275.2/167.2(氯苯那敏)、319.1/274.0(溴苯那敏)的響應(yīng)強(qiáng)度最強(qiáng)且背景干擾小，所以選為定量離子對，另2個(gè)子碎片275.2/230.2(氯苯那敏)、319.1/167.1(溴苯那敏)組成定性離子對。在MRM模式下，進(jìn)一步優(yōu)化了上述2對離子對的去簇電壓(DP)和碰撞電壓(CE)，結(jié)果見表2。

2.2 色譜條件優(yōu)化

本研究通過對出峰時(shí)間、分離效果、峰形和靈敏度等因素分別考察了水(A)-乙腈(B)、0.1%甲酸溶液(A)-乙腈(B)、5 mmol/L甲酸銨(A)-乙腈(B)以及5 mmol/L甲酸銨-0.1%甲酸溶液(A)-乙腈(B)作為流動(dòng)相時(shí)的梯度洗脫效果。結(jié)果顯示：在相同的梯度洗脫條件下，0.1%甲酸溶液(A)-乙腈(B)作為流動(dòng)相時(shí)，采用0.4 mL/min的流速，洗脫效果更好，具體流動(dòng)相組成及洗脫梯度見表1。在上述條件下，氯苯那敏和溴苯那敏在該色譜柱上的保留時(shí)間分別為2.10、2.25 min，氯苯那敏和溴苯那敏MRM色譜圖如圖1所示。

2.3 提取試劑選擇

試驗(yàn)以配合飼料為對象，研究了1%甲酸乙腈溶液、甲醇∶乙腈∶水(10∶80∶10，v/v/v)溶液、1%鹽酸溶液、乙腈、甲醇等5種提取溶劑對氯苯那敏和溴苯那敏的提取效果，稱取10份5 g飼料樣品，分別加入5種提取劑20 mL，按1.2.2的步驟操作，結(jié)果見圖2。

從圖2可以看出，選取1%甲酸乙腈溶液和乙腈作為提取溶劑對飼料中的氯苯那敏和溴苯那敏具有很好的提取效果，兩者的提取效率在90%～95%。而甲醇∶乙腈∶水(10∶80∶10，v/v/v)溶液、1%鹽酸溶液、甲醇的提取效率較低，通過對檢測結(jié)果進(jìn)行計(jì)算，回收率均在60%以下，說明飼料中的氯苯那敏和溴苯那敏提取不完全。

2.4 固相萃取柱的優(yōu)化

2.4.1 固相萃取柱的選擇

試驗(yàn)比較了4種市售的HLB、MCX、MAX、C18固相萃取柱對飼料中氯苯那敏和溴苯那敏的凈化效果。先對4種固相萃取柱進(jìn)行活化處理：加入3 mL甲醇，待甲醇流出后，再加入3 mL水。然后將提取離心后的上清液加入固相萃取柱中，每個(gè)小柱10 mL，待樣液全部流出后，依次加入3 mL水和甲醇淋洗固相萃取柱，最后MCX用3 mL 5%氨水甲醇溶液洗脫，MAX用3 mL 1%甲酸甲醇溶液洗脫，C18、HLB固相萃取柱用3 mL甲醇洗脫，各收集洗脫液氮吹至近干，用0.1%甲酸∶乙腈(90∶10，v/v)溶液溶解定容至1 mL，上機(jī)檢測，結(jié)果見圖3。

圖1 氯苯那敏和溴苯那MRM色譜圖

誤差線為3次測量結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差。下圖同。

從圖3可以看出，經(jīng)過MCX固相萃取柱凈化后，飼料中的氯苯那敏和溴苯那敏具有很好的回收率，在100%左右。而HLB、MAX、C18固相萃取柱的回收率較低，回收率都在50%以下，證明其對氯苯那敏和溴苯那敏并未完全吸附。

2.4.2 洗脫試劑的優(yōu)化

根據(jù)前人研究，氨水甲醇是MCX固相萃取柱的最佳洗脫試劑[33]。所以本試驗(yàn)研究了不同比例的氨水甲醇對氯苯那敏和溴苯那敏的洗脫效果，按照上述操作，洗脫時(shí)用不同比例的氨水甲醇進(jìn)行洗脫，最終上機(jī)檢測，結(jié)果見圖4。

從圖4可以看出，5%氨水甲醇洗脫效果最好，飼料中的氯苯那敏和溴苯那敏具有很好的回收率，在100%左右。甲醇幾乎沒有洗脫效果，其他比例的氨水甲醇，雖然也有不錯(cuò)的回收率，但效果不如5%氨水甲醇顯著。

圖3 不同固相萃取柱對凈化效果

圖4 不同洗脫試劑的洗脫效果

2.4.3 洗脫溶液用量的優(yōu)化

作為洗脫溶劑，用量的選擇是一個(gè)關(guān)鍵參數(shù)，因此，試驗(yàn)評估了1.0～5.0 mL 5%氨水甲醇溶液對飼料中氯苯那敏和溴苯那敏的洗脫效果。結(jié)果見圖5。

從圖5可以看出，使用1 mL洗脫液就能較好地將氯苯那敏和溴苯那敏淋洗下來，回收率達(dá)到82%；2 mL幾乎可以將全部氯苯那敏和溴苯那敏淋洗下來，回收率達(dá)到96%；3 mL可以將MCX固相萃取柱上的氯苯那敏和溴苯那敏完全洗脫下來。因此，本研究最終選擇3 mL為MCX固相萃取柱的洗脫液用量。

2.5 基質(zhì)效應(yīng)

由于不同飼料樣品的組成十分復(fù)雜，LC-MS/MS檢測氯苯那敏和溴苯那敏時(shí)基質(zhì)干擾非常明顯，所以基質(zhì)效應(yīng)的校正必不可少。取不同飼料樣品進(jìn)行前處理(1.2.2)，以此基質(zhì)提取液作稀釋液配制1、5、10、20、50、100 ng/mL的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，與直接用0.1%甲酸∶乙腈(90∶10，v/v)溶液配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液對比，大部分氯苯那敏和溴苯那敏表現(xiàn)為基質(zhì)抑制。為消除基質(zhì)效應(yīng)，本試驗(yàn)繪制氯苯那敏和溴苯那敏基質(zhì)效應(yīng)圖進(jìn)行校正，結(jié)果見圖6。

圖5 不同洗脫體積的洗脫效果

2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程、方法檢出限和定量限

在上述優(yōu)化條件下，取空白基質(zhì)溶液將氯苯那敏和溴苯那敏配制成包含定量限在內(nèi)的由低到高6個(gè)濃度的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，其質(zhì)量濃度分別為1、5、10、20、50、100 ng/mL，經(jīng)LC-MS/MS測定分析，以定量離子色譜峰面積與基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線。依據(jù)定量離子色譜峰的信噪比(S/N)=3為檢出限(LOD)，S/N=10為定量限(LOQ)，得出LOD和LOQ，結(jié)果見表3?；|(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)溶液在1.0～100.0 ng/mL的線性關(guān)系良好；方法檢出限為0.3 μg/kg，定量限為1 μg/kg，能夠滿足飼料中氯苯那敏和溴苯那敏含量的分析需要。

2.7 回收率試驗(yàn)和精密度考察

精密稱取配合飼料、預(yù)混合飼料與濃縮飼料樣品各5 g，然后添加不同含量的氯苯那敏和溴苯那敏標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制成1、10、100 μg/kg標(biāo)準(zhǔn)的樣品，按上述方法進(jìn)行檢測，每個(gè)樣品6個(gè)重復(fù)，連續(xù)重復(fù)3 d，計(jì)算平均回收率、批內(nèi)及批間變異系數(shù)。由表4可知，在1、10、100 μg/kg添加濃度下，平均回收率為85.8%～108.4%，RSD小于15%。

2.8 實(shí)際樣品測定

通過建立的上述方法對市場上采集的30份不同類型的飼料樣品進(jìn)行檢測，在30份飼料樣品中有2份樣品檢出氯苯那敏，分別為預(yù)混合飼料(2.37×104μg/kg)和配合飼料(12.58 μg/kg)，其余飼料樣品均未檢出氯苯那敏和溴苯那敏。

圖6 氯苯那敏和溴苯那敏基質(zhì)效應(yīng)圖

表3 基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性方程和相關(guān)系數(shù)

表4 不同飼料中添加氯苯那敏、溴苯那敏的回收率及精密度

3 討 論

3.1 流動(dòng)相的選擇

以氯苯那敏和溴苯那敏的分離為主要指標(biāo)，同時(shí)兼顧分析檢測時(shí)間和色譜圖基線平穩(wěn)情況，選用了乙腈、甲醇[28-31]作為流動(dòng)相，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，甲醇作為有機(jī)相出峰時(shí)間較晚且峰形拖尾嚴(yán)重，因此選擇了乙腈作為流動(dòng)相；也對不同水相(水、5 mmol/L甲酸銨溶液、5 mmol/L甲酸銨-0.1%甲酸溶液、0.1%甲酸溶液)進(jìn)行考察，通過不斷摸索優(yōu)化，最終確定本試驗(yàn)的水相為0.1%甲酸溶液。雖然氯苯那敏和溴苯那敏色譜圖部分沒有完全分離，但由于二者的定量離子對完全不同，因此并不影響對飼料中氯苯那敏和溴苯那敏精確定量分析。

3.2 提取

文獻(xiàn)介紹，使用甲醇、乙腈對人血和中成藥樣品中氯苯那敏和溴苯那敏進(jìn)行提取具有較高的提取效率[15,27]，但對于飼料樣品，根據(jù)圖2結(jié)果可知，甲醇對其提取效率較低，回收率在30%以下，出現(xiàn)這種結(jié)果的原因可能是飼料基質(zhì)復(fù)雜，甲醇將飼料中的其他干擾物質(zhì)也過多溶出，使提取液中干擾物質(zhì)增多，從而影響了氯苯那敏和溴苯那敏的定量檢測；同理甲醇∶乙腈∶水(10∶80∶10，v/v/v)溶液可能也使干擾物質(zhì)增多，最終影響了檢測結(jié)果；1%鹽酸溶液由于其酸性過強(qiáng)，在飼料提取過程中，可對飼料中一些物質(zhì)的結(jié)構(gòu)造成破環(huán)，從而造成干擾物質(zhì)劇增，嚴(yán)重影響回收率；1%甲酸乙腈溶液和乙腈在對氯苯那敏和溴苯那敏的提取過程中，表現(xiàn)出良好的提取效果，提取效率達(dá)90%以上，為最佳提取液。綜合分析發(fā)現(xiàn)，氯苯那敏和溴苯那敏在弱酸性條件下保留效果較好，且上機(jī)檢測過程中還可以增強(qiáng)電離信號，故最終選擇1%甲酸乙腈溶液作為提取溶劑。

前人研究表明，通過加入緩沖鹽來提高分析物的回收率[34-35]。本研究加入不同種類緩沖鹽(醋酸鈉、無水硫酸鈉、硼砂-碳酸鈉、磷酸二氫鉀)與1%甲酸乙腈溶液共同提取氯苯那敏和溴苯那敏，觀察其對回收率的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，和未加入緩沖鹽的試驗(yàn)比較，回收率幾乎沒有明顯影響，為了降低對儀器的不利影響，因此沒有加入緩沖鹽。

3.3 凈化

飼料樣品成分多種多樣，富含大量礦物質(zhì)、維生素、蛋白質(zhì)等，選擇合適的凈化方式是精確定量分析氯苯那敏和溴苯那敏至關(guān)重要的一步[36]。SPE是目前較為熱門的凈化方法，與傳統(tǒng)的基質(zhì)分散固相萃取方法相比，SPE具有凈化效果好、回收率高、溶劑消耗量小、操作簡單、省時(shí)省力等優(yōu)點(diǎn)[37]。本試驗(yàn)選擇了市售的4種固相萃取柱，對氯苯那敏和溴苯那敏進(jìn)行凈化處理，結(jié)果見圖3，只有MCX對其展現(xiàn)出良好的凈化效果。造成HLB、C18、MAX回收率低的原因可能是其對酸性物質(zhì)有較好的選擇性，而氯苯那敏和溴苯那敏呈現(xiàn)弱堿性；MCX是將磺酸基鍵合在高度交聯(lián)的PS/DVB表面得到的混合型強(qiáng)陽離子交換吸附劑，有反相和強(qiáng)陽離子交換雙重保留性能，對堿性物質(zhì)氯苯那敏和溴苯那敏有良好的選擇性和靈敏度，所以MCX比HLB、C18和MAX表現(xiàn)出了更加優(yōu)越的分離富集性能，顯著降低了基質(zhì)干擾，因此，本試驗(yàn)選擇了對目標(biāo)氯苯那敏和溴苯那敏具有高效吸附作用的MCX。

為了得到更好的回收率，本試驗(yàn)對洗脫試劑同樣進(jìn)行嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膬?yōu)化處理，結(jié)果見圖4。甲醇在MCX凈化過程中對氯苯那敏和溴苯那敏幾乎沒有洗脫效果，而加入氨水之后，回收率顯著提升，究其原因，MCX作為具有反相和強(qiáng)陽離子交換作用的凈化柱，氨水提供了強(qiáng)效的陽離子供應(yīng)，為氯苯那敏和溴苯那敏的洗脫提供了充足的動(dòng)力。但是過高或者過低濃度的氨水會(huì)使其回收率降低，分析原因，過低濃度的氨水不能提供足夠的陽離子，導(dǎo)致洗脫不完全；而過高濃度的氨水則是由于其高濃度會(huì)影響氯苯那敏和溴苯那敏的穩(wěn)定性，導(dǎo)致回收率降低。

3.4 方法性能

目前關(guān)于飼料中氯苯那敏和溴苯那敏同步檢測的研究尚未見報(bào)道，由于飼料成分復(fù)雜，形式多樣，因此，常規(guī)的提取凈化方法會(huì)造成基體干擾，需要進(jìn)一步優(yōu)化提取、凈化的方法；此外，在檢測技術(shù)方面，現(xiàn)有的檢測技術(shù)雖穩(wěn)定、可靠，但在分析復(fù)雜樣品時(shí)，其靈敏度和選擇性還有諸多不足，如郭倩倩等[24]使用HPLC測定氯苯那敏的定量限僅為11.8 μg/kg；谷亦平等[38]使用HPLC測定氯苯那敏的定量限更是達(dá)到58.09 μg/kg；甚至如果僅僅依靠LC可能會(huì)出現(xiàn)靈敏度低、容易出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象。LC-MS/MS選擇性和特異性好，檢出限低，近年來是研究抗組胺藥物的熱門方向，因此本試驗(yàn)采用LC-MS/MS進(jìn)行檢測，其方法檢出限為0.3 μg/kg，定量限為1.0 μg/kg，更為靈敏；且加標(biāo)飼料樣品中不同添加濃度(1、10、100 μg/kg)氯苯那敏和溴苯那敏的平均回收率為85.8%～108.4%，RSD<15%，這說明本試驗(yàn)所建LC-MS/MS方法與相關(guān)報(bào)道方法的回收率沒有顯著差別，在一定水平上滿足飼料中非法添加物質(zhì)檢測的回收率要求，表明了新建立的方法具有較高的準(zhǔn)確性和精密度。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)通過對提取溶劑、凈化等前處理?xiàng)l件及LC-MS/MS分析條件的優(yōu)化，建立了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同步檢測飼料中氯苯那敏和溴苯那敏含量的方法。氯苯那敏和溴苯那敏含量在1.0～100.0 ng/mL線性關(guān)系良好，方法檢出限為0.3 μg/kg，定量限為1.0 μg/kg，回收率為85.8%～108.4%，RSD小于15%。該方法前處理操作簡單，試劑材料消耗量小，靈敏度高，結(jié)果穩(wěn)定準(zhǔn)確，在實(shí)際應(yīng)用中更具有優(yōu)勢。