二母安嗽片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

金 瑜

(常熟市建發(fā)醫(yī)藥有限公司，江蘇 常熟 215500)

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二母安嗽片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

金 瑜

(常熟市建發(fā)醫(yī)藥有限公司，江蘇 常熟 215500)

目的：對二母安嗽片進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。方法：采用薄層色譜法對處方中的知母、款冬花進(jìn)行定性鑒別，采用HPLC法測定罌粟堿含量。結(jié)果：在薄層色譜中均可檢出知母、款冬花的特征斑點；罌粟堿在0.082 5～0.742 5μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為98.7%，RSD為2.6%。結(jié)論：該方法簡便可行、重現(xiàn)性好，能有效控制該制劑的質(zhì)量。

二母安嗽片；知母；款冬花；TLC；罌粟堿；HPLC

二母安嗽片是由知母、 罌粟殼、款冬花等九味中藥制成的片劑，具有清肺化痰、止嗽定喘之效，用于虛勞久嗽、春秋舉發(fā)、咳嗽痰喘、骨蒸潮熱、音啞聲重、口燥舌干及痰涎壅盛。為有效控制本品質(zhì)量，保證臨床療效，本文采用了薄層色譜法對制劑中的知母、款冬花進(jìn)行定性鑒別，并采用高效液相色譜法對其所含的罌粟堿進(jìn)行含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

TSP-P100泵，TSP-UV100檢測器，ANASTAR Chromatography Data System工作站,100型超聲波清洗器(江蘇省昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥

鹽酸罌粟堿對照品、知母、款冬花對照藥材(中國食品藥品檢定研究院)；二母安嗽片(天津中新藥業(yè)集團(tuán)有限公司中藥制藥廠)；高效硅膠G板(煙臺大學(xué)生物科學(xué)與工程研究所)；乙腈為色譜純，水為超純水，其余均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 知母薄層鑒別

2.1.1 供試品溶液的制備 取樣品粉末12g，加乙醇20mL，加熱回流40min，濾過，取續(xù)濾液10mL，加鹽酸1mL，加熱回流1h，濃縮至5mL，加水10mL，用20mL苯萃取，萃取液濃縮至2mL，作為供試品溶液。

2.1.2 對照藥材溶液的制備 取知母對照藥材粉末2g，按“2.1.1”項下供試品溶液的制備方法制成對照藥材溶液。

2.1.3 薄層色譜鑒別[1]依照薄層色譜法(《中國藥典》2010版一部附錄ⅥB)試驗，吸取上述兩種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-丙酮(9∶1)為展開劑，展開，取出晾干，置365nm熒光處觀察。供試品色譜在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾作用。

2.2 款冬花的薄層鑒別

2.2.1 供試品溶液的制備 取本品5g，加甲醇10mL，超聲提取30min，濾過，濾液濃縮至1mL，作為供試品溶液。

2.2.2 對照藥材溶液的制備 取款冬花對照藥材1g，按供試品溶液的制備方法制成對照藥材溶液。

2.2.3 薄層色譜鑒別 照薄層色譜法(《中國藥典》2010版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-水(10∶3∶3)的下層溶液為展開劑，展開，取出晾干，用氨水熏蒸。供試品色譜與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾作用。

2.3 鹽酸罌粟堿的含量測定[2-4]

2.3.1 色譜條件 色譜柱：YMC-Pack ODS-A(150mm×4.6mm ,5μm)；流動相：乙腈-0.01M 磷酸二氫鈉溶液(用H3PO4調(diào)pH至3.0)(18∶82)；柱溫30℃；檢測波長：254nm；流速：1.0mL/min。

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸罌粟堿對照品2.29mg，至25mL容量瓶中，甲醇溶解，定容，精密吸取1.5mL，至50mL容量瓶中，甲醇定容，制得2.75μg/mL的對照品溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備 取本品粉末約2.0g精密稱定，加水50mL溶解，超聲5min，濾過，取續(xù)濾液25mL，置分液漏斗中，加濃氨水10mL，加氯仿30mL，振搖提取四次，合并氯仿液，蒸干，殘渣用乙醇轉(zhuǎn)溶至2mL容量瓶中，定容，用0.45μm有機系濾膜濾過，作為供試品液。

2.3.4 陰性對照試驗 取缺味罌粟殼制成的二母安嗽片，按“2.3.3”方法制備陰性樣品液，二母安嗽片的供試品溶液、對照品溶液、陰性樣品液分別進(jìn)樣測定，結(jié)果見圖1。

圖1 鹽酸罌粟堿(對照品A)、樣品(B)、陰性樣品(C)HPLC色譜

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別吸取對照品液1μL、3μL、5μL、7μL、9μL，進(jìn)樣，按上述色譜條件測定，以對照品的進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，鹽酸罌粟堿的峰面積為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=-65 097X+2 947.9(r=0.999 5)，表明鹽酸罌粟堿在0.082 5～0.742 5μg內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4.2 精密度試驗 吸取鹽酸罌粟堿對照品液5μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定其峰面積。計算峰面積的RSD值為1.01%，表明儀器精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗 精密吸取樣品液5μL，分別在0、1、2、3、4、5h中進(jìn)樣，測定樣品中罌粟堿的峰面積，峰面積的RSD值為1.12%，表明樣品在5h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.4 重復(fù)性試驗 精密稱取同一批號樣品6份，分別按供試品液制備方法制備供試液，進(jìn)樣測定其鹽酸罌粟堿的含量，6份樣品鹽酸罌粟堿含量的RSD值為1.33%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗 精密稱取5份已知含量的樣品1.0g，每份精密加入濃度為0.091 6mg/mL標(biāo)準(zhǔn)品液52μL，按供試液溶液制備方法制備，各取5μL進(jìn)樣測定鹽酸罌粟堿含量并計算其平均回收率，結(jié)果見表1。

2.5 樣品含量測定

取三批次樣品，按 “2.1.1”項下供試品處理方法制備樣品，對三批樣品進(jìn)行測定，計算含量，結(jié)果見表2。

3 討論

選擇展開系統(tǒng)鑒別款冬花時，開始時選用乙酸乙酯-甲酸-水(10∶1∶3)的下層溶液為展開劑，發(fā)現(xiàn)薄層板上的點拖尾較嚴(yán)重，加大甲酸的比例可以適當(dāng)解決拖尾嚴(yán)重的問題。

液相的流動相采用磷酸二氫鈉的緩沖鹽體系,能顯著改善目標(biāo)化合物的分離度。pH對吸收峰的對稱因子有一定的影響，適當(dāng)調(diào)pH至3.0時能有效改善峰的分離度，比較了不同測定波長下，鹽酸罌粟堿的峰面積值，在254nm時峰面積較大，且和相鄰化合物完全分離，故選擇254nm作為測定波長。

表1 加樣回收率 (n=6)

表2 三批次二母安嗽片中鹽酸罌粟堿含量 (n=3)

4 結(jié)論

罌粟殼具有斂肺止咳、澀腸、定痛的功效，其主要有效成分為鹽酸罌粟堿，為生物堿中的一種。本研究采用高效液相色譜法測定其含量，從而達(dá)到控制二母安嗽片的質(zhì)量，采用薄層色譜法對知母、款冬花進(jìn)行定性鑒定，能有效區(qū)分藥材的真?zhèn)?，從而達(dá)到控制質(zhì)量的目的。綜上所述，本研究采用TLC、HPLC研究二母安嗽片，該方法簡便可行、重現(xiàn)性好，能有效控制該制劑質(zhì)量。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2] 李雪梅.高效液相色譜法測定注射用鹽酸罌粟堿的含量[J].青島醫(yī)藥衛(wèi)生,2005,37(03):205-206.

[3] 凌志敏，黃鳳婷.高效液相色譜法測定注射用鹽酸罌粟堿的含量[J].國際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報,2005,11(16):105-107.

[4] 王瑤，陸益紅，孟長虹，等.鹽酸罌粟堿注射液含量測定及有關(guān)物質(zhì)研究[J].藥物分析雜志,2011,4(09):1693-1698.

(責(zé)任編輯：李嵐春)

Study on Quality Standard of ERMUANSOU Tablets

Jin yu

(Changshu Jianfa Medicine Co., Ltd. ，Jiangsu 215500，China)

Objective:To study the quality standards for ERMUANSOU Tablets.Methods:TLC was used to qualitative identification of Rhizoma Anemarrhena ,Colts foot flower. HPLC was used to determine papaverine.Results:Papaverine showed good linear relationships in the ranges of 0.0825～0.7425 μg. The average recoveries of papaverine was 98.74%， RSD was 2.63%.Conclusion:This methods is stable， simple and reproducible. It can be used for the quality control of preparation of Ermuansou Tablets.

ERMUANSOU Tablet;Rhizoma Anemarrhena; Sinensis; TLC; Papaverine; HPLC

2014-02-27

金瑜(1977-)，女，江蘇省常熟市建發(fā)醫(yī)藥有限公司主管中藥師，研究方向中藥制劑。

R927.11

A

1673-2197(2014)12-0017-02