血清藥物化學(xué)在中藥領(lǐng)域應(yīng)用研究進(jìn)展

★ 胡律江 曾文雪 雷景邦 趙曉娟 郭慧玲

(1.江西中醫(yī)藥大學(xué) 江西 南昌 330004；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué) 湖南 長沙 410208；3.江西省食品藥品稽查局 江西 南昌 330029)

近年來，血清藥理學(xué)和血清藥物化學(xué)在闡明中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及探討其藥理作用機(jī)制的研究中得到廣泛的應(yīng)用。中藥所含成分復(fù)雜，只有被吸收入血的成分才能發(fā)揮療效，因此給藥后進(jìn)入血液的成分才是與功能主治相吻合的物質(zhì)，才是真正治療疾病的關(guān)鍵。這主要包含三類物質(zhì)，首先是中藥或復(fù)方中成分的原型，其次是中藥或復(fù)方中成分經(jīng)各種酶和腸菌群的作用產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，第三是生理活性物質(zhì)，如激素類、遞質(zhì)等。

1988年田代真一[1,2]首次針對藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提出了假設(shè)，他認(rèn)為“中藥產(chǎn)生生物活性的成分可能是中藥經(jīng)過菌群代謝之后的產(chǎn)物”，并在此基礎(chǔ)上引出了一個全新概念“血清藥物化學(xué)”。1997年，我國學(xué)者王喜軍[3]正式提出了“中藥血清藥物化學(xué)”的概念與實(shí)施細(xì)則，并將血清藥理學(xué)和血清藥物化學(xué)的研究方法引入復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究，取得了許多有價值的研究成果。探討中藥或復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制的研究，已成為中藥研究的關(guān)鍵,由于含藥血清的藥理效應(yīng)受到其主要化學(xué)成分的影響，因而可通過血清藥物化學(xué)的方法明確血中移行成分，確定中藥及其復(fù)方中的指標(biāo)性成分，深入探究藥理效應(yīng)的作用基礎(chǔ)。目前，國內(nèi)許多學(xué)者對血清藥物化學(xué)進(jìn)行了大量的研究，為中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ)，現(xiàn)對其應(yīng)用研究現(xiàn)狀進(jìn)行綜述。

1 血清藥物化學(xué)在單味藥中研究現(xiàn)狀

1.1 李月婷等[4]通過對比葒草提取液，給藥后含藥血清和空白血清的超高效液相色譜指紋圖譜，以葒草含藥血清對氧化損傷心肌細(xì)胞存活率，乳酸脫氫酶漏出率、丙二醛含量、超氧化歧化酶活力的影響為評價指標(biāo)，從大鼠血清中發(fā)現(xiàn)25個移行成分，其中9個為原型成分，16個可能是其體內(nèi)代謝產(chǎn)物，推測可能其為葒草保護(hù)心肌細(xì)氧化損傷的物質(zhì)基礎(chǔ)。

1.2 霍世霞等[5]對高良姜中高良姜素、山奈素、槲皮素對照品與含藥血清的HPLC圖譜對比，并從原藥材中制備分離純化及進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定確定高良姜素是高良姜中入血成分。

1.3 沈嬋娟等[6]通過比較茯苓醇提物、空白血清和含藥血清的HPLC圖譜，結(jié)果顯示雌雄大鼠入血成分略有差異，雄性大鼠含藥血清中有11種移行成分，其中6中為原型藥物，5中為代謝產(chǎn)物，雌性大鼠含藥血清中有9種移行成分，其中5種為原型藥物，4中為代謝產(chǎn)物，提示藥物代謝存在性別差異。

1.4 黃柏[7]中16個成分入血，7個以原型藥物存在，9個為代謝產(chǎn)物，初步確定巴馬丁和小檗堿為黃柏的主要入血成分。

1.5 謝長等[8]對菝葜抗炎活性部位進(jìn)行血清藥物化學(xué)研究表明，菝葜提取物含藥血清中發(fā)現(xiàn)了45種入血成分，另發(fā)現(xiàn)新婦苷、黃杞苷、白藜蘆醇、槲皮素為主要入血成分，即可能為菝葜抗炎活性部位的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。

1.6 雷公藤[9]提取物給藥后24h內(nèi)血中先后出現(xiàn)了8個移行成分，其中5個為原型藥物，2個為代謝產(chǎn)物，1個為血清固有產(chǎn)物。雷公藤為8個入血成分之一。

沒食子酸的研究表明[10]，給藥后血清中確定5個血中移行成分，4個為原型成分，另外1個入血成分則可能是某種化學(xué)成分的代謝產(chǎn)物。4個入血成分可能為沒食子的體內(nèi)直接作用物質(zhì)，3種含藥血清中均含沒食子酸，提示沒食子的作用物質(zhì)可能是沒食子鞣質(zhì)在體內(nèi)降解后的沒食子酸。

1.7 程星燁等[11]采用LC-MS/MS對延胡索活性部位入血成分進(jìn)行研究，通過對保留時間比對、離子碎片解析等綜合分析，堅定了9個入血成分均為原型成分，同時也發(fā)現(xiàn)部分生物堿是以葡萄糖酸醛結(jié)合物的形式存在。

1.8 龍血竭[12]給藥后在含藥血清中發(fā)現(xiàn)6個入血成分，其中5個都屬原型成分，分別為，3,4'-二羥基-5-甲氧基二苯乙烯、劍葉龍血素B,4'-羥基-4,2'-二氫查耳酮(新化合物)、劍葉龍血素A和龍血素B；1個可能為原型成分或代謝產(chǎn)物。

此外，還有學(xué)者對金銀花、防風(fēng)、五味子、烏藥、淫羊藿等藥材進(jìn)行了血清藥物化學(xué)研究，為深入研究中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和闡明作用機(jī)制奠定了一定的基礎(chǔ)。

2 血清藥物化學(xué)在中藥復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)方面的研究現(xiàn)狀

2.1 對當(dāng)歸芍藥散的研究表明[13]，給藥后大鼠入血成分中有7個被確定為原型吸收、1個被確定為代謝產(chǎn)物吸收，并發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸芍藥散的藥效成分可能為芍藥苷磺酸鹽、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、阿魏酸、川芎內(nèi)酯I、藳本內(nèi)酯和丁烯酜內(nèi)酯。

2.2 郭輝等[14]對大黃附子湯的研究表明，給藥后發(fā)現(xiàn)18個入血成分，其中初步確定4個為原型成分，14個為代謝產(chǎn)物，血中移行成分主要來源于大黃和附子兩味君藥，復(fù)方中的蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、細(xì)辛脂素均以原型形式直接吸收入血，初步推測其為治療寒積腹痛的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。

2.3 地黃飲子研究表明[15]，給藥后家兔血清中9個入血成分，其中2個為原型成分，7個為代謝產(chǎn)物，這些分別來源于五味子、遠(yuǎn)志、石菖蒲、巴戟天、山茱萸、肉蓯蓉、附子和麥冬。

2.4 復(fù)方貞術(shù)調(diào)脂膠囊研究表明[16]，給藥后血清中發(fā)現(xiàn)有28個藥源性成分，其中10個為原型成分，18個為代謝產(chǎn)物。體內(nèi)藥效物質(zhì)并非體外成分的簡單相加，經(jīng)體內(nèi)生物轉(zhuǎn)化和選擇性吸收，體外主要成分巴馬汀和小檗堿在體內(nèi)經(jīng)代謝后含量明顯降低，而丹酚酸A和丹酚酸B等含量較高的物質(zhì)在實(shí)驗(yàn)中未被檢測到。

2.5 生脈散的研究表明[17]，給藥后血清中產(chǎn)生18個血中移行成分，利用質(zhì)譜數(shù)據(jù)表征血中移行成分的結(jié)構(gòu)，其中13個為原型藥物，5個為代謝產(chǎn)物，推測他們有可能為生脈散的體內(nèi)直接作用物質(zhì)。

2.6 呂永海等[18]采用RRLC-Q-TOF/MS檢測到復(fù)方丹參片的入血成分，14個原型藥物和8個代謝產(chǎn)物，其中丹參醛、丹參新醌B、丹參素的糖結(jié)合物(M1)和丹參新醌B的甲基化產(chǎn)物(M8)等是利用LC-MS首次在大鼠體內(nèi)檢測到。利用UPLC-Q-TOF/MS鑒定了心肌缺血大鼠血漿中的22個生物標(biāo)志物，其中7個標(biāo)志物出現(xiàn)在嘌呤代謝途徑中，丹參酮ⅡA和丹參酚酸B分別具有調(diào)節(jié)鈣離子通道和抑制腎上腺素β受體的作用。

此外，對燈盞細(xì)辛提取物、芍藥甘草湯、舒胸片、四逆散、酸棗仁湯、三黃瀉心湯、大承氣湯等的血清藥源性成分的研究初步明確了復(fù)方中眾多化學(xué)成分在體內(nèi)的吸收情況，為中藥是我藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究奠定了一定的基礎(chǔ)。

3 血清藥物化學(xué)在其他領(lǐng)域的應(yīng)用

近些年，藥食同源的中藥材成為我國功能性食品的資源寶庫。血清藥物化學(xué)在尋找食品功能因子和功能性食品功效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究方面起到了很大的作用。功能食品中的功能因子，與藥物中的藥效活性成分基本類似，因此中藥血清藥物化學(xué)的研究方法也可以應(yīng)用到藥食同源的中藥材食品功能因子的開發(fā)，同時，該法較之傳統(tǒng)的研究方法，血中移行成分比原藥的化學(xué)成分減少了很多，這在很大程度上降低了研究的難度，提高了研究的針對性，也節(jié)約了研究成本，為我們的功能性食品研究提供了新的思路[19]。

此外，孫志翠等人提出[20]，借鑒“中藥血清藥物化學(xué)”研究思路，運(yùn)用化學(xué)分析分離方法，觀察給藥后進(jìn)入腦脊液的化學(xué)成分，通過關(guān)聯(lián)透過血腦屏障的移行成分與中藥復(fù)方的藥理效應(yīng)，來闡明藥物透過血腦屏障來發(fā)揮作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，這一方法的引入為中藥復(fù)方體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究開辟了了新的道路，為中藥物質(zhì)基礎(chǔ)的研究邁了新的一步。

4 研究中藥血清藥物化學(xué)的意義

4.1 促進(jìn)了中藥血清藥理學(xué)和中藥藥代動力學(xué)發(fā)展 中藥血清藥理學(xué)是一種離體的實(shí)驗(yàn)方法，是指給動物服藥后，再取經(jīng)消化、吸收、分布，代謝和排泄等體內(nèi)過程的含藥血清作為藥物源進(jìn)行藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)的方法。在實(shí)驗(yàn)中受到的影響因素較多，結(jié)果重現(xiàn)性低，引入血清藥物化學(xué)的方法，可以根據(jù)給藥后入血成分和血清HPLC指紋圖譜的變化規(guī)律，消除不利的因素，采取合理的實(shí)驗(yàn)方案，利用化學(xué)分離技術(shù)有效的集合入血成分。

藥物動力學(xué)是應(yīng)用動力學(xué)的基本原理，定量的描述藥物通過各種途徑進(jìn)入人體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄等過程的動態(tài)變化規(guī)律。應(yīng)用血清藥物化學(xué)可在眾多的復(fù)方成分中富集入血成分，形成有效成分群，從而更加清晰，全面的闡釋復(fù)方中藥效物質(zhì)在體內(nèi)經(jīng)時量變化過程和藥代動力學(xué)模型，探討藥物動力學(xué)參數(shù)與藥物效應(yīng)之間的關(guān)系，研究藥物制劑體外的動力學(xué)特征與動力學(xué)之間的關(guān)系，也可以推測體內(nèi)藥量與時間的關(guān)系，以藥物動力學(xué)參數(shù)定量的描述藥物在體內(nèi)的變化規(guī)律。

4.2 建立中藥及復(fù)方的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 建立既符合中醫(yī)藥特色、又能走向國際的中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系，是中藥實(shí)現(xiàn)現(xiàn)代化、標(biāo)準(zhǔn)化的關(guān)鍵。中藥成分復(fù)雜，進(jìn)入血液的成分才是起效的根本物質(zhì)。因此通過指紋圖譜模式結(jié)合中藥血清藥物化學(xué)方法，同時以中藥復(fù)方中的主要成分和血中移行成分均為指標(biāo)，既能合理地評價復(fù)雜的中藥復(fù)方的穩(wěn)定性和真實(shí)性，也可以更真實(shí)全面的體現(xiàn)中藥多途徑多靶點(diǎn)的作用特點(diǎn)[21]。

4.3 有助于闡明中藥復(fù)方的配伍機(jī)制 配伍是中藥在臨床應(yīng)用的特點(diǎn)，通過配伍可增強(qiáng)療效，降低毒副作用，擴(kuò)大適應(yīng)范圍，改變藥性藥味以適應(yīng)病情需要。按照配伍變化的發(fā)生部位，分為藥物進(jìn)入機(jī)體前由其理化性質(zhì)的改變所引起的，稱之為體外配伍變化。體內(nèi)藥物相互作用主要表現(xiàn)在藥物再吸收、分布、代謝與排泄過程中產(chǎn)生的協(xié)同、拮抗或毒副作用。利用現(xiàn)代科學(xué)方法和先進(jìn)的技術(shù)，通過中藥血清藥物化學(xué)方法可以全面分析復(fù)方的血中移行成分、確定復(fù)方的藥效物質(zhì)，闡明有效成分的體內(nèi)動態(tài)變化和成分間相互作用及消長規(guī)律的研究，能夠在一定程度上科學(xué)地詮釋復(fù)方的配伍規(guī)律[22-24]。

4.4 促進(jìn)了新藥開發(fā) 從植物藥、動物藥、礦物藥中提取有效成分或有效成分群是開發(fā)中藥新藥的重要途徑。在應(yīng)用血清藥物化學(xué)研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步利用化學(xué)分析分離方法對中藥中有效成分分離并制備其血中移行成分，從而獲得有效成分或有效成分群。再以此有效成分或有效成分群為原料進(jìn)行新藥開發(fā)與申報。因此中藥血清藥物化學(xué)為新藥開發(fā)開辟了新的研究方法和思路。

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